HPLC法测定生姜半夏汤单煎与合煎中6-姜酚和6-姜醇含量

刘芸,王珂佳,黄锴,莫正昌

(1.铜仁职业技术学院 药学院，贵州 铜仁 554300；2.贵州轻工职业技术学院 化工系，贵州 贵阳 550025；3.贵州理工学院 干部科，贵州 贵阳 550003)



HPLC法测定生姜半夏汤单煎与合煎中6-姜酚和6-姜醇含量

刘芸1,王珂佳2,黄锴3,莫正昌1

(1.铜仁职业技术学院 药学院，贵州 铜仁 554300；2.贵州轻工职业技术学院 化工系，贵州 贵阳 550025；3.贵州理工学院 干部科，贵州 贵阳 550003)

目的 HPLC法测定生姜半夏汤单煎液与合煎液中6-姜酚、6-姜醇的含量变化。方法 采用Amethyst C18-P柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇 -水(60:40)为流动相，检测波长281 nm，流速0.9 mL/min，柱温25 ℃。结果 6-姜酚、6-姜醇在合煎液中含量均明显高于单煎液。结论 生姜半夏汤使用时应采用合煎的方式制备，否则会降低6-姜酚、6-姜醇浸出的含量，影响生姜半夏汤的药效。

生姜半夏汤；6-姜酚；单煎；合煎；6-姜醇；含量测定

生姜与半夏是我国两味传统止呕药材，2者互为君辅，可构成生姜半夏汤和小半夏汤两种传统止呕方剂，2种方剂组成相同，只是剂量有差别。小半夏汤半夏剂量较高，而生姜半夏汤生姜剂量较高，2者都具有止呕功效，但2者侧重点不一样。经药理学研究证明， 生姜半夏汤和小半夏汤2种方剂起到止呕作用的主要药材为生姜，姜有抗炎、解热、镇吐、镇痛、抗心衰、促进胆汁分泌等药理活性[1-3]，被应用于生产抗晕、止呕药物[4-5]，主要化学成分为挥发油、姜辣素类化合物[5-7]，其中起到止呕功效的活性物质为姜酚、姜醇类[8]。

中药是中华传统瑰宝，中药饮片煎剂更是华夏几千年文明在医疗实践中的体现，在不断的实践和使用过程中积累了非常丰富的理论基础，其疗效明确，迄今仍是中医用药的主要剂型。但其药理作用及药物相互作用复杂。其中一味药方单独煎煮或者合煎，其药效可能会产生巨大变化。本实验采用超声提取，HPLC 法检测，研究了生姜半夏汤单煎与合煎液中主要有效成分6-姜酚、6-姜醇煎出量的变化，为生姜半夏汤颗粒剂的研制方法提供实验依据，为研究中药复方配伍变化提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 Agilent110高效液相色谱仪(美国Angilent公司，四元梯度泵，手动进样)；HMC-WS10(韩国Human 公司)；TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)；RE52-05旋转蒸发仪(上海亚荣生化yiqichang)；AR1530电子天平(美国Ohaus公司)；20kHz超声波发生器；6-姜酚对照品(上海一基生物技术有限公司，批号：241200706)；6-姜醇(日本和光纯药株式会社，批号：20020911)；半夏(产地贵州铜仁，经梁玉勇教授鉴定为天南星科植物半夏PinelLiaternata(Thunb.) Breit. 的干燥块茎)；生姜(产地贵州铜仁，经梁玉勇教授鉴定为姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.新鲜根茎)。

1.2 方法

1.2.1 测定波长的选择：采用紫外区全波长扫描的方法，对6-姜酚和6-姜醇的最大吸收波长进行研究。

1.2.2 色谱条件：色谱柱：Amethyst C18-P柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水(60:40)，检测波长：281 nm;流速:0.9 mL/min，柱温：25 ℃进样量：20 μL。

1.2.3 方法学研究

① 对照品溶液的制备 精密称取6-姜酚7.52 mg，6-姜醇1.43 mg。甲醇溶解后移至50 mL容量瓶中，甲醇定容。即配成6-姜酚和6-姜醇对照品储备液。

② 线性关系的考察 分别精密量取6-姜酚和6-姜醇对照品贮备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL，置于10 mL量瓶，甲醇定容。进样20 μL测定。以6-姜酚、6-姜醇标准溶液浓度X对色谱峰面积Y进行线性回归，得6-姜酚、6-姜醇化合物的线性回归方程。

③ 精密度试验 取同一浓度对照品溶液连续进样5次，测定峰面积，计算RSD值。

④ 重复性实验 对同一提取液，按 “2.3.2”项下所述制备样品。5 份样品溶液，测定峰面积，计算RSD。

⑤ 稳定性试验 取同一样品溶液于室温下0、1、2、4、6、8 h 分别进样，测定峰面积，计算RSD。

⑥ 回收率试验 6-姜酚、6-姜醇分别精密量取同一水煎液样品各6份，其中5份分别精确加入对照品，另一份作为测定本底值样品用，各份均按上述色谱条件测定HPLC值，计算回收率。

1.2.4 生姜单煎液的制备：称取生姜0.6 g，甲醇60 mL，于67 ℃超声提取1 h。补足损失，离心，即得生姜单煎液。

1.2.5 半夏单煎液的制备：称取半夏0.3 g，甲醇30 mL，于67 ℃超声提取1 h。补足损失，1000 r/min离心5 min，即得0.3 g半夏单煎液；可同法制备0.4 g半夏单煎液；半夏0.6 g单煎液；半夏0.9 g单煎液；半夏1.2 g单煎液。

1.2.6 生姜半夏合煎液的制备：按处方比例准确称取生姜0.6 g，半夏0.3 g待用。于回流装置中加入甲醇90 mL，于67 ℃回流提取1 h。补足损失，离心，即得生姜半夏6:3合煎液；称取生姜0.6 g，半夏0.4 g，按上述方法操作，即得生姜半夏6:4合煎液；称取生姜0.6 g，半夏0.6 g，按上述方法操作，即得生姜半夏6:6合煎液；准确称取生姜0.6 g，半夏0.9 g，按上述方法操作，即得生姜半夏6:9合煎液；准确称取生姜0.6 g，半夏1.2 g，按上述方法操作，即得生姜半夏6:12合煎液。

1.2.7 供试品中各成分含量测定：精密吸取各煎液50 mL，置150 mL分液漏斗中，加入等量石油醚，萃取3次，取甲醇层，过0.45 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得。取20 μL进样测定。

1.2.8 生姜半夏汤的单煎与合煎对6-姜酚和6-姜醇溶出量影响的单因素考察：按照1.2.6项下的方法进行试验。

2 结果

2.1 测定波长的选择 2者均在281 nm处呈现最大吸收，因此确定在281 nm处进行测定。见图1。

图1 6-姜酚和6-姜醇的全波长扫描图Fig.1 Full wavelength scan map of 6- gingerol and 6-shogaol

2.2 6-姜酚和6-姜醇的高效液相色谱图 理论踏板大于4000，在“1.2.2”条件下的6-姜酚、6-姜醇分离良好，见图2。且生姜半夏汤中，6-姜酚、6-姜醇与其他组分的分离度均大于1.5，见图3。

图2 标准品6-姜醇、6-姜酚的高效液相色谱图Fig.3 HPLC chromatogram of 6- gingerol,6- shogaol reference substance

图3 生姜半夏汤6-姜醇、6-姜酚的高效液相色谱图Fig.3 HPLC chromatogram of 6- gingerol,6- shogaol of ginger pinellia decoction

2.3 线性关系的考察 6-姜酚在1.504 μg/mL～24.064 μg/mL有良好的线性关系，回归方程为Y=5.38400X-1996，r=0.9997；6-姜醇在0.286 μg/mL～4.576 μg/mL有良好的线性关系，回归方程为Y=2.37900X-1203.3，r=0.9998 。

2.3.1 精密度试验：6-姜酚RSD为1.42 %，6-姜醇RSD为1.31%。表明仪器精密度良好。

2.3.2 重复性试验：5份样品溶液，测定峰面积，计算RSD，6-姜酚为1.73%，6-姜醇为1.30%。

2.3.3 稳定性试验：6-姜酚为2.00%，6-姜醇为1.47 %。结果表明，样品溶液在8h内稳定。

2.3.4 回收率试验：6-姜酚本底值为1557 μg，6-姜醇为347 μg，结果6-姜酚平均回收率97.97%，RSD为1.01%。6-姜醇平均回收率100.86%，RSD为0.35%。

2.4 生姜半夏汤的单煎与合煎对6-姜酚和6-姜醇溶出量影响的单因素考察 生姜半夏汤的单煎与合煎对6-姜酚和6-姜醇溶出量影响的单因素考察，见表1。分析表明合煎生姜半夏汤中6-姜酚和6-姜醇溶出量要比单煎的溶出量高。

表1 不同煎煮6-姜酚、6-姜醇测定结果(n=10)Tab.1 The determination results of 6- gingerol,6- shogaol by different decocting method(n=10)

3 讨论

本文中使用的生姜半夏汤单煎与合煎所用药材为同批药材，供试品的处理方法平行进行，采用加热超声提取，这样便于提高提取效率。在方法学验证实验中，其结果专属性强、线性关系好、稳定性强、重复性好、精密度高、回收率高，这都表明测量生姜半夏汤中6-姜酚和6-姜醇含量的方法良好。

比起单煎，生姜与半夏配来合煎，6-姜酚和6-姜醇的煎出量均发生了明显的变化，合煎后煎煮液中6-姜酚和6-姜醇的含量均比单煎时所得含量有明显提高。结果显示，合煎与单煎的比值随着生姜与半夏的比例变化而变化，6-姜酚和6-姜醇的溶出率呈现类似于抛物线规律变化。6:4配伍合煎时，6-姜酚和6-姜醇的溶出量达到峰值。分别是单煎时的1.19倍、1.10倍。我们认为，生姜半夏合煎液中6-姜酚和6-姜醇含量的提高可能是因为合煎过程生姜和半夏某些成分间可能存在着助溶作用或者帮助其脱离植物体，从而提高两者的溶出率，是否有其他原因，有需实验进一步确定。实验结果证明生姜和半夏合煎优于单煎。就6-姜酚和6-姜醇含量为指标而言，生姜半夏汤中药免煎颗粒剂的制备应采用生姜与半夏合煎的方式，且比例最好是接近于6：4，这样可以大大地提高6-姜酚和6-姜醇的含量，节省半夏的用量。

近些年来，中药免煎颗粒剂由于其使用和携带方便被医疗界广泛使用，同时争议之声也不断喧涨。毕竟中药成分复杂，各种药物相互作用相互影响。单就生姜半夏在单煎与合煎时有显著性差异，且是合煎的溶出度高于单煎，这说明半夏与生姜合煎有利于6-姜酚、6-姜醇的溶出，若只从6-姜酚、6-姜醇的单体含量方面看合煎优于其单煎。但是，中药复方的复杂之处在于其并不是一个或几个单体的简单相加。在研究单煎和合煎问题时， 不能够简单地以某几个指标性成分来定论。 而应该从复方整体布局，宏观分析，并结合药效学、药理学等相关学科， 综合评价单煎和合煎孰优孰劣，还需对生姜半夏汤不断深入研究。

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(编校：王冬梅)

Determination of 6-gingerol and 6-shogaol in ginger pinellia decoction of different decoction by HPLC

LIU Yun1,WANG Ke-jia2,HUANG Kai3,MO Zheng-chang1

(1.Pharmacy College, Tongren Polytechnic College, Tongren 554300, China; 2.Department of Chemical Engineering, Guizhou Light Industry Technical College, Guiyang 550025, China; 3.Department of Cadre, Guizhou Institute of Technology, Guiyang 550003, China)

ObjectiveTo determine the content of 6-gingerol and 6-shogaol in separately decocted and mingly decocted ginger pinellia decoction by HPLC.MethodsThe samples were separated on Amethyst C18-P (4.6 mm×250 mm，5 μm) column. The mobile phase was methanol-water(60:40) at the flow rate of 0.9 mL/min. The detection wavelength was 281 nm.The column temperature was 25 ℃.ResultsThe content of 6-gingerol and 6-shogaol in separately decocted obviously less than that in mingly decocted ginger pinellia decoction.ConclusionGinger pinellia decoction should be used mingly decocted. Otherwise, it will reduce the contents of 6-gingerol and 6-shogaol , affect the efficacy of ginger pinellia decoction.

ginger pinellia decoction; 6-gingerol; 6-shogaol; single-decoction;mixed-decoction;determination

刘芸，女，硕士，讲师，执业药师，研究方向：天然药物提取，E-mail：yun4028@sina.com。

R286.02

A

1005-1678(2015)02-0168-03