肺癌患者外周血液树突状细胞和淋巴细胞亚群的检测及临床意义

叶肖燕

作者单位：510220广州暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院检验科

临床经验

肺癌患者外周血液树突状细胞和淋巴细胞亚群的检测及临床意义

叶肖燕

作者单位：510220广州暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院检验科

目的检测肺癌患者外周血液树突状细胞和淋巴细胞亚群的数量并分析其临床意义。方法流式细胞术检测34例肺癌患者外周血CD123+、CD11c+的树突状细胞（dendritic cell，DC）和淋巴细胞亚群的数量及所占比例，并与28名健康志愿者作对照。结果与健康对照组比较，肺癌患者CD123+DC的绝对数和比值下降，但差异无统计学意义（P＞0.05），而CD11c+DC的绝对数和比值均显著下降（P均＜0.05）。两组的月淋巴细胞绝对数比较差异无统计学意义（P＞0.05），但肺癌患者外周血T、Th、Ts、NK细胞的绝对数均较健康对照组低，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论肺癌患者外周血液树突状细胞和淋巴细胞亚群普遍发生改变，肺癌患者外周血T、Th、Ts、NK细胞数值下降的同时CD11c+DC数值也下降，对其进行检测可为肺癌治疗方案的制定及预后判断提供一定参考。

肺肿瘤；树突状细胞；淋巴细胞；检测；临床意义

肺癌是最常见的呼吸系统恶性疾病，发病率和死亡率均处于恶性肿瘤的前列。随着对肿瘤研究的深入，人们逐渐从免疫学的角度认识肿瘤。树突状细胞（dendritic cell，DC）是迄今为止发现的功能最强的抗原提呈细胞，因其成熟时伸出大量树突状突起而得名。DC可以捕获抗原，加工处理后将抗原呈递给淋巴细胞，促进先天性免疫发生和启动获得性免疫［1～3］，它的激活在肿瘤治疗中具有重要的作用［4～6］，对其进行检测有利于了解患者体内免疫状况进而选择治疗方案。本文采用流式细胞术对28名健康志愿者和34例肺癌患者外周血液中淋巴细胞亚群、CD123+DC亚群和CD11c+DC亚群进行检测，旨在了解其与肺癌患者免疫功能状况的关系，为患者临床治疗及预后判断提供一定参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象

34例肺癌患者均经病理活检确诊，其中男21例，女13例；年龄25～71岁，平均55岁。28名健康成年人作为对照组，选自本院体检健康人群，其中男18例，女10例；年龄20～65岁，平均49岁。

1.2 主要试剂及仪器

Cali月RITE四色标准荧光微球、MultiTEST四色试剂盒、FALCON管、TruCOUNT管、FACS溶血素均购自美国月D公司。FACSCalibur3.0流式细胞术仪为美国月D公司产品。

1.3 免疫荧光染色

①树突状细胞亚群染色方法如下：取两管分别加入A组和月组单克隆抗体各10μl；每管加抗凝血100μl，振荡混匀，室温静置20 min；加入2 m l溶血素，混匀，室温静置8 min；350×g离心6 min，弃上清液，混匀，加入1 ml P月S液；350×g离心6 min，弃上清液，混匀，样品8 h内上机检测。⑵淋巴细胞染色方法如下：取两只TruCOUNT管，分别加入C组和D组单克隆抗体各20μl，每管加抗凝血50μl，充分混匀，室温避光静置20 min；再加入450μl溶血素，混匀，室温避光静置20 min，样品8 h内上机检测。

1.4 流式细胞术检测

使用前，用四色标准荧光微球校准仪器的灵敏性、阈值、荧光补偿和光电倍增管电压。①树突状细胞亚群检测：CELLQuest软件获取100 000个细胞，确认CD11c和Anti-HLA-DR双阳的细胞为CD11c+DC；确认CD123和Anti-HLA-DR双阳的细胞为CD123+DC。⑵淋巴细胞检测：MultiSET软件自动获取和分析60 000个细胞，最后分别报告总T、Th、Ts、NK和月淋巴细胞的绝对数。

1.5 统计学分析

采用SPSS 15.0统计学软件对数据进行分析。数据以均数±标准差（±s）表示，两组均数的比较用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌组与健康对照组外周血液树突状细胞亚群CD123+DC和CD11c+DC的比值和绝对数的比较

肺癌组外周血液CD123+DC和CD11c+DC的比值和绝对数均低于健康对照组，但与健康对照组比较前者差异无统计学意义（P＞0.05），后者差异则有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 肺癌组与健康对照组外周血液淋巴细胞亚群绝对数的比较

与健康对照组比较，肺癌组患者外周血液月淋巴细胞的绝对数变化不显著（P＞0.05），T、Th、Ts、NK细胞绝对数均明显低于健康对照组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。见表2。

表1 肺癌组与健康对照组外周血液树突状细胞亚群比值及绝对数的比较（±s）

表1 肺癌组与健康对照组外周血液树突状细胞亚群比值及绝对数的比较（±s）

CD11c+DC（106个/L）健康对照组28 0.14±0.07 7.6±3.1 0.21±0.07 9.6±3.2肺癌组34 0.12±0.06 6.8±3.4 0.13±0.09 6.4±3.6 t 1.21 0.96 3.84 3.66 P 1.29 0.45＜0.001＜0.001组别n CD123+DC（%）CD123+DC（106个/L）CD11c+DC（%）

表2 肺癌组与健康对照组外周血淋巴细胞亚群绝对数的比较（±s，个/μl）

表2 肺癌组与健康对照组外周血淋巴细胞亚群绝对数的比较（±s，个/μl）

组别n月淋巴细胞总T细胞Th细胞Ts细胞NK细胞健康对照组28 315±160 1627±304 1015±326 594±283 277±125肺癌组34 288±174 998±429 756±431 376±197 196±148 t 0.63 6.52 2.62 3.57 2.01 P 0.54＜0.001 0.01＜0.001 0.02

3 讨论

正常人体内有许多细胞可能发生突变，但一般不会发展为肿瘤，因为免疫系统能够特异地识别和杀伤突变细胞，在肿瘤形成前将其消灭。淋巴细胞亚群是机体免疫系统的重要组成部分，T细胞根据功能可分为Th和Ts细胞。Th细胞不能直接识别和杀伤肿瘤细胞，需要依赖抗原提呈细胞提呈相关的肿瘤抗原，对之进行特异性激发后分泌淋巴因子，在对体液和细胞免疫调节中起着关键的作用。Ts细胞含有穿孔素和颗粒酶，可引起细胞裂解和靶细胞凋亡，从而特异性地杀伤肿瘤细胞。NK细胞通过配体诱导受体介导的凋亡，引起靶细胞凋亡或释放细胞因子杀伤靶细胞。月淋巴细胞分化成浆细胞后合成和分泌各类免疫球蛋白，通过体液免疫发挥抗肿瘤作用。有研究报道，机体通过免疫效应机制发挥抗肿瘤作用，而抗肿瘤免疫机制包括细胞免疫和体液免疫两方面，这两方面不是孤立存在和单独发挥作用的，它们相互协作共同杀伤肿瘤细胞［7，8］。如果免疫系统不能正确识别、捕获和提呈抗原、合成和分泌细胞因子及引导细胞免疫，机体就不能清除突变细胞，有可能形成肿瘤。肿瘤发生后，肿瘤细胞与淋巴细胞相互作用促使肿瘤细胞和淋巴细胞的表型和特性发生改变［9，10］。肺癌是常见的恶性肿瘤，它的发生、发展与机体的免疫功能状态有关。肺癌患者的淋巴细胞亚群异常、减少、比例失衡可导致机体对肿瘤细胞识别和杀伤能力降低，进而引起肿瘤细胞逃逸，致使肺癌进展和转移［11，12］。本研究发现与健康志愿者比较，肺癌患者T、Th、Ts、NK细胞绝对数下降显著，而月淋巴细胞下降不显著，与文献报道［13，14］一致。进一步证实了机体对肿瘤的免疫应答是细胞免疫和体液免疫相互协同作用的结果，但以细胞免疫为主［8，13］。本组肺癌患者外周血液淋巴细胞偏低，可能是由于患者患病后淋巴细胞向肿瘤周围聚集，在杀伤肿瘤细胞的过程中，消耗和凋亡水平升高，从而使外周血液中淋巴细胞数量减少。

DC是一种专职的抗原提呈细胞，在肿瘤免疫中起重要的作用。人外周血液DC可分为髓系DC（myeloid-derived DC，MDC）和淋巴系DC（lymphoidrelated DC，LDC）两种亚型［1～3］。MDC亚型为髓样细胞来源DC，它以CD11c+DC前体形式存在于外周血液中，促进Th1应答；LDC亚型为淋巴样细胞来源DC，由其CD123+DC前体细胞分化成熟，诱导Th2应答。外周血液中MDC、LDC比值的变化能很好地反映机体的免疫状态。朴炳奎等［15］及郑红刚等［16］报道，肺癌患者外周血液CD11c+DC、CD123+DC在白细胞中所占比例均低于正常人，但CD11c+DC下降较为显著。多项研究认为，肿瘤的发生、发展反过来也可以影响DC的数量和功能，肿瘤细胞可直接诱导DC的凋亡，并通过分泌细胞因子抑制DC产生、成熟和聚集［17～19］。DC还可以分泌趋化因子促进初始型T细胞的聚集，保持效应T细胞在肿瘤组织附近长期存在，然后释放血管生成抑制因子影响肿瘤血管的形成［20～22］。本研究结果显示，肺癌患者与健康志愿者比较，CD123+DC亚群和CD11c+DC亚群的数量均有不同程度地降低，CD11c+DC的绝对数和比例显著下降，与上述研究结果一致。肺癌患者DC的降低提示患者机体免疫功能受损，未成熟的DC向MDC分化困难，不能有效地促进Th1应答引起细胞免疫杀伤肺癌细胞。而LDC变化不明显，Th2应答没有增强，说明肺癌患者体内没有诱发足够体液免疫应答。

综上所述，本研究发现肺癌患者树突状细胞和淋巴细胞亚群的多项指标明显降低，进一步证实了肺癌患者细胞免疫功能降低。提示在肺癌患者的临床治疗过程中，检测其体内外周血液树突状细胞和淋巴细胞亚群可在一定程度上反映患者的免疫功能状况，对于判断患者的预后及采取相应治疗措施有积极的意义。

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［2015-01-10收稿］［2015-02-25修回］［编辑罗惠予］

R734.2

A

1674-5671（2015）02-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.02.16