肺炎链球菌临床检验分析

于洋

摘要 探讨由肺炎链球菌感染患者的临床检验分析方法及细菌特性。方法选取2011年3月-12月，我院收治的由肺炎链球菌感染患者20例，临床通过取痰、脓液、脑脊液、血液等方式对链球菌进行检验分析。结果在35% C0环境行菌种生存活动降低，生存率30%，10%C0环形中菌种的生存率85%，菌种的生存条件经培养分析显示在10%C0环境中生长更好。最适温度35℃，最适pH7.6～8.0。对比生存率显示，p<0.05，表示差异有统计意义。结论 通过鉴别诊断对菌种进行分型，细菌培养确定菌种在不同溶液及环境下成阴性或是阳性。在分析培养下确定不同的生存环境下细菌的活动能力。

关键词 肺炎链球菌；检验方法

肺炎链球菌俗称肺炎双球菌。该菌广泛分布于自然界，主要寄生在人类上呼吸道，大多数人鼻咽腔中有本菌存在。根据荚膜抗原的不同，可分为84个血清型，多数菌株不致病，少部分强致病菌株，主要引起人类化脓性感染和大叶性肺炎。选取2011年3月-12月，我院收治的由肺炎链球菌感染患者20例，对20例患者临床菌种检验分析进行总结，报告如下。

1临床资料与方法

1.1一般资料 选取2011年3月-12月，我院收治的由肺炎链球菌感染患者20例，患者年龄3-40岁，平均年龄35岁，20例患者中，大叶性肺炎患者10例，6例呼吸道功能异常，4例由酒精及药物中毒引起，肺炎链球主要引起人类大叶性肺炎。75%的成年人肺炎链球菌肺炎及50%以上严重的肺炎链球菌菌血症。临床菌种采集根据疾病的不同采集相应的标本。通常取痰、脓液、脑脊液、血液等。

1.2标本采集 根据疾病的不同采集相应的标本。通常取痰、脓液、脑脊液、血液等。最好在用药前采集标本。采集菌种所使用的器皿应清洁无菌，采集标本时避免污染，尽快送检。自肺部咳出的痰，應选择铁锈色或脓性分泌物部分送检。诊断菌血症、败血症，采血时应选择在寒战、高热时。采血量应在5～10 ml。

1.3检验方法 直接涂片检查 除血液标本外，其他标本均可使用该方法。经革兰或亚甲蓝染色后镜检，见符合肺炎链球菌形态特点，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确定为荚膜者，可初步报告。荚膜肿胀试验 可作为肺炎链球菌的快速诊断。取纯培养菌液l滴和肺炎链球菌诊断血清l滴再加一接种环亚甲蓝染液，混匀后加盖片油镜检查。如荚膜显著增厚，即荚膜肿胀试阳性[1] 。

1.4细菌培养 增菌培养：血液、脑脊液经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，肺炎链球菌均匀浑浊生长并有绿色荧光。分离培养：脓液、脑脊液沉淀物或经无菌盐水洗涤过的痰液，接种血平板，35℃l8～24小时培养后，观察菌落生长情况，再取可疑菌落作进一步鉴定。

1.5统计分析利用spss19.0软件对临床数据处理，审核资料数据计量采用t检验，结果显示p<0.05，表示临床差异有意义，有显著效果。

2结果 在20例患者中根据不同病因对患者的痰、脓液、脑脊液、血液进行抽取检验及分离培养显示，20例患者中12例患者抑菌圈 >18mm，为阳性，在35% C0环境行菌种生存活动降低，生存率30%，10%C0环形中菌种的生存率85%，菌种的生存条件经培养分析显示在10%C0环境中生长更好。最适温度35℃，最适pH7.6～8.0。对比生存率显示，p<0.05，表示差异有统计意义。

3讨论 当出现某种降低这种抵抗功能的因素时，肺炎链球菌可引起感染，如①呼吸道功能异常：病毒及其它感染性因子损伤呼吸道粘膜上皮细胞；某些异常因素（如过敏）导致粘液的过度分泌，使侵入的病原菌受到保护；各种原因导致的支气管阻塞及各种原因导致的纤毛功能损伤；②酒精及药物中毒：酒精及某些药物中毒可抑制吞噬细胞的活性及咳嗽反射，有利于病原菌的吸入；③循环系统功能异常及任何原因导致的肺充血、心功能衰竭；④其它：营养缺陷、体质虚弱、贫血、血清补体水平低下等。肺炎链球菌肺炎常突然发病，表现为高热、寒战、胸膜剧烈疼痛、咳铁锈色痰。10%～20%的患者可于高热期伴发菌血症。其病理表现主要是最初肺泡内有大量纤维蛋白渗出液，继之是红细胞和白细胞向肺泡内渗出，最终导致病变部位肺组织实变[2] .

肺炎链球菌革兰染色阳性，呈矛头状排列，尖端向外。在痰及脓液中可单个、成双或短链状排列。无鞭毛及芽孢，在体内可形成荚膜。营养要求较高，必须在含有血液血清或葡萄糖的培养基中才能良好生长。本菌为兼性厌氧菌，但在10%C0环境中生长更好。最适温度35℃，最适pH7.6～8.0。在血平板上，35℃24小时可形成细小、灰白色、透明或半透明、表面光滑的扁平菌落。菌落周围有草绿色溶血环。培养稍久，可产生自溶酶而使菌落中央塌陷，边缘隆起，呈脐状。

肺炎链球菌能分解多种糖类，如：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖等产酸不产气。多数新分离的菌株分解菊糖，有的也可不分解。菊糖分解、胆汁溶菌及奥泼托欣（optochin）试验肺炎链球菌均阳性，借此可与甲型溶血性链球菌相鉴别。该菌不产生靛基质，不液化明胶[3] 。

链球菌主要致病物质：荚膜是肺炎链球菌的主要侵袭力，失去荚膜其毒力减弱或消失；肺炎链球菌溶血素0类似A群链球菌SL0，抑制淋巴细胞的增殖、中性粒细胞趋化及吞噬。脂磷壁酸具有黏附作用；而神经氨酸酶则与细菌在黏膜上皮细胞定植、繁殖、扩散有关。

通过本检验研究显示，20例患者中12例患者抑菌圈 >18mm，为阳性，在35% C0环境行菌种生存活动降低，生存率30%，10%C0环形中菌种的生存率85%，菌种的生存条件经培养分析显示在10%C0环境中生长更好。最适温度35℃，最适pH7.6～8.0。对比生存率显示，p<0.05，表示差异有统计意义。通过鉴别诊断对菌种进行分型，分离培养中明显查别均属生活环境特性及性状。

参考文献

[1] 王静静，宋晓萍，王海静.临床微生物检验和细菌耐药性监测分析 . 中国保健营养（中旬刊） .2014，06： 3924-3924.

[2] 罗湘蓉，袁平，李红凌，金婷婷，胡方芳，袁军 .肺炎链球菌临床分布及其耐药性分析. 检验医学与临床. 2014，03： 361-362，364.

[3] 曹焱 .下呼吸道感染患者病原菌检验的临床分析. 中外医疗 .2014，33（03）： 186，188.