疫苗规模化分离纯化研究进展

朱俊颖, 孙 晔, 蒋丽华, 邱勇隽, 赵黎明

华东理工大学发酵工业分离提取技术研发中心, 生物反应器国家重点实验室, 上海 200237

疫苗规模化分离纯化研究进展

朱俊颖, 孙 晔, 蒋丽华, 邱勇隽, 赵黎明*

华东理工大学发酵工业分离提取技术研发中心, 生物反应器国家重点实验室, 上海 200237

随着我国疫苗行业的不断发展及人们对疫苗安全性和副作用认识的加深，经简单提纯的疫苗已不能满足人们的需求，因此分离纯化在疫苗制备和生产中尤为重要。综述了各类疫苗分离纯化技术方法的研究进展，介绍了国内外疫苗分离纯化的新趋势和发展方向。离心和沉淀作为传统的分离方法已在各类疫苗中得到广泛地应用，膜分离技术和层析技术以及与其他方法的结合已经成为疫苗分离纯化的主要方向；而整体柱、膜色谱以及模拟移动床技术作为新兴技术正在疫苗的分离纯化中逐渐兴起。

疫苗；分离纯化；层析；膜分离

疫苗是生物制品，是应用传统方法或基因工程等生物技术，针对病原体或其相关的蛋白(多肽、肽)、多糖或核酸，以一种或多种成分，直接或间接通过载体经免疫接种进入机体后，能诱导产生特异性的液体和(或)细胞免疫，从而使机体获得预防该病的免疫力,主要用于疾病的预防和治疗[1]。据古籍记载，我国在公元10世纪就曾采用接种人痘(天花病原体)的方法来预防天花。近年来，随着生物、化学技术的迅猛发展，尤其是基因工程技术的兴起，疫苗已不是完整的病原体，灭活和减毒的概念亦模糊不清。疫苗的应用已从预防疾病发展到治疗疾病，因而有预防性疫苗和治疗性疫苗之分。目前大多数疫苗产品，都是用于预防病毒或细菌的感染。根据制备技术可分为传统疫苗和新型疫苗(或高技术疫苗)。传统疫苗包括灭活疫苗、减毒活疫苗和从微生物及其衍生物分离提取的亚单位疫苗，如蛋白疫苗和多糖疫苗；新型疫苗包括基因工程亚单位疫苗、重组载体活疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗、遗传重配疫苗以及合成肽疫苗等。

随着我国疫苗市场规模的持续快速增长、科学技术的发展以及人们对疫苗安全性和副作用认识的加深，经简单提纯的疫苗已不能满足人们对疫苗的纯度、无菌性和安全性等的要求，在历史上曾因疫苗提取后仍含有过高的宿主蛋白，去除杂蛋白率不高，影响疫苗的产品质量，导致疫苗在临床使用后有较大的副作用，这促使人们对疫苗的纯度、无菌性和安全性等提出了更高的要求。研究者期望通过以下两个方向的研究得到纯度高、无菌和安全的疫苗制品：①从疫苗开发的技术路线出发研制更高效、安全的新疫苗；②从分离纯化工艺出发提高疫苗的纯度。过去，人们认为只有亚单位疫苗和菌体分离才需要精制纯化设备，大多数疫苗仅进行初步纯化，但现在越来越多的疫苗是精制纯化疫苗。同时，疫苗在来源、组分、物化性质以及生产方式等方面存在着一定差异性，因此不同疫苗的分离方法也存在相对特异性。而目前疫苗分离纯化的主要研究方向为在尽可能保证疫苗生物活性不受损失的情况下，提高分离效率，提高回收率和产品纯度等几个分离纯化关键共性问题。

本文对目前国内外疫苗的分离纯化策略、方法和规模化应用现状进行了归纳，介绍了膜分离、色谱技术以及膜色谱、整体柱、模拟移动床等疫苗纯化技术的发展新趋势，以期为疫苗大规模分离纯化技术的研究和应用提供思路和方向。

1 疫苗纯化策略及工艺

大多数疫苗的抗原成分是细菌、病毒或是他们的亚单位抗原、基因工程表达产物等，这些物质就是疫苗目的产物。而在大规模培养过程中会产生许多非目的产物，例如培养基固有成分(血清类、激素多肽等)、细菌酵母菌的菌体成分以及其他分泌物、细胞碎片和微生物的溶解物等。在疫苗纯化制备过程中，需要将所需的目的产物如微生物本身或亚单位等成分从培养物中分离出来，并进一步纯化，去除杂质，使最终的目标疫苗成分纯度达到90%～95%以上。

除多糖类疫苗以及核酸类疫苗外，现阶段广泛研发和使用的疫苗主要成分为蛋白质等大分子物质，故可参照蛋白质的分离纯化方法。但与蛋白纯化不同的是，疫苗的普及率高、用量大，且使用对象多为婴幼儿和儿童，其分离纯化相应要求更高；很多疫苗(如乙肝表面抗原)由多聚亚基组成，其免疫原性大于各单个亚基的免疫原性之和，分离纯化过程更为复杂；而最大的不同之处在于：一般基因工程的疫苗蛋白分子量超过几十万，可达数百万道尔顿(Da)。因此，与一般蛋白的分离纯化相比，疫苗的提纯又具有特殊性。

但由于不同疫苗在其组成成分及理化性质等方面都具有一定差异，因此可以利用这些特异性进行分离。例如：有些产物可以采用化学促沉降法去除杂质，再以差异离心沉降法[2,3]等技术分离，另外一些则可先以差异离心技术分离，后再以液相色谱层析技术分离纯化；或者以不同类型的液相色谱层析技术交替或重复进行纯化。有些以超滤技术去除小分子杂质；有些则以超滤技术进行分子洗净等。如果目标产物是较小的分子，如多肽抗原，则可以收获超滤的滤液，辅以液相色谱层析等。对疫苗成分的纯化，在经澄清处理后，某些疫苗收取上清，而对于另一些不同的疫苗则可能是收取沉淀物；有些则采用离子层析加凝胶过滤层析串联处理方法[4,5]；有些则采用超滤技术加超速离心技术[6,7]；反之亦然。

虽然不同疫苗具体的分离纯化路线有所不同，但总体纯化策略大体一致，分为初步分离和后期精制。初步分离的目的是将目标粗产物与培养液分离，包括细胞破碎技术，浓缩以及利用膜分离技术初步除杂；而后期精制阶段的主要目的在于在保证其活性的前提下，利用超速离心、层析技术等方法，进一步提高目标产物的纯度，使其达到疫苗行业标准。同时也要兼顾生产规模、制备要求等条件，进而确定纯化工艺条件。表1概括了在实验室规模和大规模工业生产病毒性疫苗的一般纯化方案。在实验室规模的病毒纯化操作通常使用超速离心法为基础方法；而在大规模工业生产病毒的纯化方法中，更倾向于采用易放大的技术如膜过滤及层析技术。

表1 病毒性疫苗纯化的一般方法

2 疫苗分离纯化技术

2.1 细胞破碎

细胞破碎是针对目标产物存在于细胞内部的预处理方法，经过破碎处理后，细胞内部的目标产物释放到培养液中，进而通过离心沉淀将产物与培养液进行固液相分离的方法。表2是细胞破碎常用的方法。对于较难破碎的细胞，通常采用表中两种方法或几种方法连用的手段。其后为澄清处理，通过过滤、离心沉降等技术去除细胞碎片、非目的菌体片段和培养基成分等。

表2 细胞破碎常用方法

在完成发酵培养物固液分离得到含有目的抗原的澄清提取液后，在纯化前可对目的产物进行浓缩，此过程可通过采用透析袋外加强吸水物、超速过滤、速率区带离心等技术完成。其后进行纯化步骤，可以采用速度区带离心、液相色谱层析、等密度区带离心等。其后是再次对目的产物进行浓缩或者这些步骤的重复。

2.2 离心与超速离心

离心沉淀是将细胞培养后的目标产物与培养液进行固液相分离的重要步骤。在实验室规模纯化病毒性疫苗主要采用超速离心法，其中最常用的为梯度密度离心法。其原理是通过在溶液中加入少量大分子物质，改变溶液密度，在离心力的作用下，密度较大的物质下沉，密度小的物质上浮，最终达到重力与浮力平衡，形成大分子带状物，进而达到分离效果。常用的梯度材料为蔗糖[15]、氯化铯[16]和碘克沙醇等[17]。但此法对仪器的要求很高，转速至少为30 000 r/min，在这个转速下要求离心7～8 h。

从收获的上清液或细胞裂解物中除去细胞和细胞碎片通常通过间歇离心来实现。这种简单的操作让病毒颗粒从大多数细胞碎片中分离出来。通过调整离心的时间、离心力等因素，可以提高产品得率。

2.3 膜过滤技术

过滤是指在一定的压力下，利用特定的分离介质将不同大小的物质分离。分离介质可以是滤板或是微孔过滤膜。过去将滤板过滤技术称为深层过滤技术。滤板是由特殊纤维组成，具有一定的厚度，一般认为它们难以确定被过滤物质的大小限度；而且对于过滤物的一些成分具有吸附作用。因此，目前大多数情况下它们只用于澄清过滤；主要用于除去细菌和亚细胞成分，不适用于细菌的回收。而随着膜过滤技术的发展，其在生物制品中的应用也越来越广泛。膜过滤技术，按照截留颗粒尺寸可以分为反渗透、纳滤、超滤、微滤等[18]，表3为几种常用的膜组件及其优缺点。

采用何种形式的膜组件取决于待处理物料的性质及膜材料性能。待处理的疫苗料液多包含细胞碎片、大分子蛋白及微生物等成分，这些成分极易造成膜表面污染和膜孔堵塞。传统的过滤方式为死端过滤，即料液流动方向朝向膜表面，所有截留物均堆积于膜表面，从而造成膜过滤效率下降和严重的膜污染，不适用于大规模高固形物含量的物料分离。错流过滤或称切向流过滤是目前主流的物料膜分离方式，待分离物料流动方向切向于膜表面(与过滤方向相垂直)，液体流动在膜表面产生剪切力，减小了浓差极化及沉积带来的不利影响。

表3 各种膜组件性能的比较

膜过滤技术可广泛应用于疫苗制备。微滤可以取代离心机从发酵罐中收集细胞及去除细胞碎片，在细胞连续培养的无菌换液中也有一定应用。超滤主要应用于产品浓缩、透析(脱盐，脱醇等)以及置换缓冲液等方面。

2.3.1 微滤 实验室规模的梯度超速离心法和沉淀法不适用于较大规模的疫苗分离纯化过程，特别是减毒、灭活的病毒和病毒样颗粒(VLP)，因为它们极端脆弱和敏感，分子的完整性易受到不恰当操作条件的破坏。故采用较低剪切力的中空纤维膜微滤对病毒性疫苗如乙肝病毒、流感病毒、狂犬病毒和HPV疫苗等进行澄清。

微滤广泛用于发酵液澄清过滤及细胞裂解物的大规模澄清过滤。微滤膜孔径在0.05～10 μm之间。细胞和细胞碎片等尺寸大于膜孔径的物质将被微滤膜截留，抗原组分尺寸小于微滤膜孔径而透过微滤膜。滤膜孔径大于0.45 μm的滤膜，大多用于澄清过滤；孔径为0.45 μm的滤膜可用于除去一般细菌；而较小的孔径，如0.22 μm，可能会导致早期膜封锁和抗原组分的失活，只能用于溶液、培养基以及产品的最终除菌过滤。Merck公司[23]采用0.65 μm中空纤维滤膜澄清酵母细胞的表达体系，发现其回收率和处理速度远远好于平板式膜。Negrete[24]在两步切向流澄清和浓缩HIV病毒样颗粒时，第一步采用0.45 μm中空纤维膜在跨膜压差0.125 MPa、6 000/s的剪切力下微滤，然后采用超滤技术，在6 h内可处理2 L细胞悬浮液，为进一步大规模纯化工艺开发艾滋病毒样颗粒等生物制品提供了极有价值的支持。因此，微滤膜适合用于大规模疫苗分离纯化，膜孔径和剪切力是关键选择条件。

2.3.2 超滤 在疫苗生产过程中，超滤技术逐步取代了传统的透析技术，可用于浓缩、透析或分子洗净。超滤分离主要是基于筛分原理，但有些情况下受到粒子荷电性的影响。超滤膜的孔径范围为0.001～0.05 μm，它可以分离分子量从1～1 000 kDa的可溶性大分子物质，操作压力范围为0.1～1 MPa[25，26]。经过超滤，在较短的时间内可完成抗原组分富集于截留液中，而水和小分子杂质在透过液中。膜分离条件温和，特别适合用于病毒颗粒的浓缩。

一般采用300 kDa的超滤膜进行狂犬病疫苗浓缩；用于流感疫苗超滤浓缩的超滤膜则为50 kDa；采用30～50 kDa的超滤膜进行流脑球菌多糖的分子清洗和浓缩，肺炎球菌多糖的分子洗净和浓缩采用100 kDa的超滤膜。例如Peter等[27]分别用分子量为30 kDa、50 kDa、100 kDa和300 kDa的超滤膜，采用切向流超滤浓缩埃及伊蚊(Aedesaegypti)病毒颗粒，发现在100 kDa下，病毒颗粒能够最大程度的保留在截留液中，同时部分宿主蛋白能够透过超滤膜，达到初步分离的效果。

此外，由于膜分离过程很容易按比例放大，可用于GMP生产。无细胞百日咳疫苗的生产中，普遍采用离心共纯化工艺，但该工艺中使用的传统流式透析操作时间长、效率低，不利于品质控制。而目前新版的GMP对产品在生产中的质量控制又提出了更高的要求，因此若采用中空纤维超滤膜对脱毒后的抗原进行纯化，回收率、纯度及效价等方面是透析法的5～7倍[28]，方便品质控制。

膜污染是在超滤过程中所面临的主要问题，膜污染会造成膜通透性能降低。实际生产过程中需要对膜材料，操作工艺等进行选择，同时采用机械性能强且耐清洗的膜来获得稳定的膜通量[29]。

超滤技术虽然可以用于疫苗的分离纯化，但分离精度不高，只有当疫苗与杂质的分子量差别达到一个数量级以上时，才可能用超滤技术实现有效分离。在实际生产过程中，膜分离技术往往与层析技术等工艺耦合应用[30]。

2.4 层析技术

层析技术在生物制品的分离纯化中扮演着不可或缺的角色，因为它克服了普通实验室规模的技术瓶颈，很容易按比例放大，并且分离速度快，具有高度重现性，分离系统密闭无菌，符合所有GMP法规要求。根据分离介质的特性和样品分配交换原理不同，可以分为离子交换层析、凝胶过滤层析(分子筛)和亲和层析，这3种层析是分离蛋白质的经典层析技术[31]。离子交换层析、分子筛常用于疫苗分离纯化，而针对不同目标产物的性质以及不同的分离阶段可选用相应的层析技术(表4)。

表4 常用层析技术的特征与应用阶段

2.4.1 离子交换 离子交换是基于带电荷的分子与带相反电荷的固化离子交换基团之间选择性地、可逆地结合的原理,离子交换介质由共价结合带电荷基团的固体多孔基质构成。根据交换介质所带电荷可分为阴离子交换和阳离子交换。在层析过程中，带电相反的料液与基质结合，被吸附留在层析柱内，而未结合的料液被流穿液体洗脱，进而达到分离的目的。Raksha等[32]仅采用一步阴离子交换色谱法纯化Nipah病毒中的糖蛋白，其纯度可达90%。

2.4.2 亲和层析 亲和层析是利用目标产物的特殊物理化学性质，设计特异性配体，利用亲和作用力，将其从体系中分离出来的层析技术。该技术可有效浓缩稀溶液，纯化大分子物质，尤其是含量极低且稳定性差的活性物质，例如利用镍基对组氨酸的亲和性质，镍基亲和层析可以分离纯化带有组氨酸标签的重组表达产物；能够通过免疫作用吸附能与其配位的生物大分子[33,34]。但同时由于亲和配体成本较高，本身需要高度纯化又极不稳定，导致在纯化过程中，配体易失活，增加了分离难度。

2.4.3 疏水层析 由于蛋白质与多肽在其疏水性方面各不相同，这种差异构成了疏水层析(HIC)分离的基础。盐溶液用于调节样品分子与结合在亲水基质上的疏水配体间的吸附。由于其具有高选择性，疏水层析在疫苗的中间纯化步骤中有广泛的应用。其速度、分辨率和载量与离子交换层析相当；并且可作为离子交换和分子排阻层析的替换。不过，介质因配给类型、置换程度和基质不同而不同。只有通过实验才能确定最佳的选择性和结合强度，同时也取决于操作的规模和在纯化工艺中的位置。Diogo[35]采用经丁二醇二缩水甘油醚衍生的琼脂糖凝胶树脂从狂犬病毒中分离DNA疫苗，进行60倍放大后发现疫苗质量及生物活性不会随放大倍数的增加而改变。

2.4.4 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析，又称分子大小排阻层析，与离子交换、疏水层析及亲和层析不同的是，其分离机理是通过分子筛原理，根据分子大小来分离生物分子[36,37]。常用的凝胶如葡聚糖凝胶(dextran)、聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide)、琼脂糖凝胶(agarose)以及聚丙烯酰胺和琼脂糖之间的交联物。其中最常用的载体为葡聚糖凝胶中的Sephadex系列。在疫苗纯化中，凝胶过滤多用于精制纯化或最终纯化阶段，凝胶过滤主要用于产品脱盐、更换缓冲溶液，或者去除分子量大于或小于所需产品的杂质。

3 疫苗分离纯化技术新趋势

采用膜分离与层析技术对疫苗进行分离纯化使得传统分离纯化行业得到了长足发展，同时与之相关的新老技术的结合及新技术之间的融合也引起了人们的重视。目前，国内外学者在整体柱、移动模拟床色谱、膜色谱等步骤更为简化、实用性更高的新兴技术研究方面也取得了显著成果。

3.1 整体柱

整体柱(monolithic column)又称连续床(continuous bed)，出现于20世纪80年代末。按制备材料可分为硅胶整体柱、有机聚合物整体柱和无机硅胶-有机聚合物混合基质整体柱3类，并且还可以通过进行化学修饰或改变进而得到不同用途的整体柱。

整体柱是通过柱管内原位聚合或固化的方法制备得到的具有高度多孔、且相互连通形成通道网络结构的整体棒状固定相。这种独特的结构能够最大程度的减弱扩散阻力。因其与填充柱相比具有简单、通透性好和传质快等诸多优点而被广泛应用于电色谱、液相色谱及固相萃取等生物分离分析方面。近年来，整体柱在生物大分子如蛋白、DNA和病毒的分离中也得到一定应用。Banjac等[38]分别采用甲基丙烯酸基质的强阴离子型QA、弱阴离子型DEAE以及阳离子型SO3的离子交换整体柱分离流感病毒，发现经过强阴离子型QA整体柱后，能得到高回收率的流感病毒，同时能够将宿主细胞中的DNA去除，这为大规模生产减毒的流感疫苗奠定了基础。刘海燕等[39]采用原位聚合法制备poly(VC-co-EDMA)整体柱。并通过衍生后处理，加硫酸制成亲水柱，能够成功分离血浆和鸡卵黄中的免疫球蛋白。Soares等[40]采用固定了精氨酸配体的整体柱，从蛋白、内毒素及RNA中，分离纯化质粒DNA。通过与普通精氨酸-琼脂糖亲和色谱比较，发现质粒DNA与整体柱的结合力比普通亲和色谱高10%。

3.2 模拟移动床色谱

移动床分离技术(simulated moving bed, SMB)是基于色谱分离技术原理，将多根色谱柱串联，通过阀切换技术，进而使流动相循环的色谱分离装置。结合生成工艺，将设备、电器以及自动控制等多学科技术集于一身，技术含量高，设计复杂，能够高效廉价地分离一般分离方法(如沉淀、萃取、膜过滤等)难以分离的一些物理性质与化学性质相似的混合物。评价模拟移动床的指标有：柱数、柱长、柱径和柱压降以及分离强度、纯度、浓度、循环比和料剂比等。

20世纪60年代，Broughton[41]首次通过阀切换技术改变进样、流动相注入点等实现逆流操作而设计出模拟移动床雏形，并应用其成功分离了二甲苯和C8化合物。随后美国环球油品公司(UOP)将其商业化。20世纪90年代随着工业自动化的发展，计算机控制技术与模拟移动床技术的结合，实现了自动化精准控制，技术更加成熟，逐步走向规模化。模拟移动床技术经过50多年的发展，已成功应用于许多领域，如石油化工行业以及糖醇行业。近几年模拟移动床技术在生物大分子分离中也有新的进展。如采用模拟移动床技术能够在广泛条件下连续操作，分离纯化流感病毒，产率比多柱串联高3.8倍[42]。Piergiuseppe等[43]采用双柱分子筛模拟移动床分离腺病毒并进行中试实验，病毒回收率达86%。

与传统制备色谱相比，移动床分离技术具有连续化操作的优势，为进一步自动化提供了可能。同时，其产量大、效率高，大型模拟移动床设备在生产过程中每年产量可达百万吨级。

3.3 膜色谱

传统的色谱分离所用的吸附介质多为颗粒状吸附剂，存在刚性不够、处理速度低、有效配基的利用率低、吸附过程中色谱柱易堵塞和污染、只适合间歇操作和操作时间长等问题；而传统的膜分离技术虽然具有分离速度快、操作压力低、能耗低等优点，但由于其依靠筛分机理，无法将与目标产物分子量相近的组分进行分离。因此膜色谱技术(membrane chromatography)是色谱技术与膜分离技术的结晶，融合了两者之长，不但能特异性的分离纯化抗体[44]、蛋白质[45,46]、病毒以及质粒DNA[47,48]，而且能够对料液进行大规模处理，具有快速、选择性强、通透性好、接触面积大、易于放大等特点，在生物大分子[49,50]的分离与纯化中的重要性日益增加。

在传统的分离过程中，抗原组分的分离通常采用色谱三步纯化技术，如A型流感病毒一般采用阴离子交换色谱偶联分子排阻色谱。而流感病毒颗粒较大，具有复杂的分子表面，在色谱柱中扩散速率较低，不利于传质。Kalbfuss等[51]比较了强阴离子交换和弱阴离子交换膜色谱，将流感病毒的回收率提高至80%。Wolff等[52]采用硫酸化的纤维素膜亲和色谱，在分离纯化牛痘病毒发酵液中，一步即可去除发酵液中90%以上的杂蛋白和宿主DNA，其后用偶联疏水色谱，可去除99.9%的杂蛋白以及97.5%～99.99%的宿主DNA，杂质含量远低于世界卫生组织的标准。Vicente等[53]研究了乙二胺基配体密度对采用离子交换膜色谱分离纯化重组棒状病毒(rBVs)的影响。经过研究发现，配体密度的降低有利于rBVs在离子交换膜色谱上的吸附-解析，其原因主要为随着配体密度的降低，洗脱液中的宿主蛋白、双链DNA和非感染性的rBVs浓度也随之降低，因此rBVs的总回收率比目前标准值提高了大约20%。Tan等[54]采用金属亲和膜色谱技术，一步法分离了黄病毒属rDIII重组蛋白，如登革热病毒(DENV)。相比传统色谱，膜色谱的分离时间仅为其的三分之一不到，并发现登革热病毒与膜色谱的亲和力比传统色谱略高，能够高效特异性分离纯化黄病毒属rDIII重组蛋白。

4 展望

《中国药典》(2015)新增多糖结合疫苗、亚单位疫苗等疫苗品种，对部分标准不完善，临床不良反应多的生物制品品种加大了调整力度。这标志着新型疫苗生产技术在我国的应用和发展，同时对疫苗生产质量控制有了更严格的规定，也体现了分离纯化在疫苗制备和生产中的重要性。新型疫苗高纯度的生产标准增加了纯化技术路线的复杂性，对疫苗分离纯化技术提出了更高要求。然而，目前大多纯化技术均停留在实验室规模，尤其是被广泛采用的超速离心和亲和层析为间断性操作且造价较高，不适合规模化连续生产。此外，纯化中采用的蛋白酶抑制剂、洗涤剂等化学或生物试剂，能否彻底去除以及是否会对疫苗的生物活性和免疫原性产生不利的影响也是潜在的问题。因此，现有疫苗分离纯化技术并不能满足新型疫苗规模化生产的需要，并且目前尚无能单独承担疫苗分离纯化过程的独立技术，所以各种新老技术的组合，新技术与新技术的融合将成为疫苗分离纯化的新趋势。

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Overview of Current Scalable Methods for Vaccine Purification

ZHU Jun-ying, SUN Ye, JIANG Li-hua, QIU Yong-jun, ZHAO Li-ming*

StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering,R&DCenterofSeparationandExtractionTechnologyinFermentationIndustry,EastChinaUniversityofScienceandTechnology,Shanghai200237,China

With the development of the vaccine industry in our country and people’s deepening understanding of vaccine safety and side effects, extracted vaccine cannot satisfied the demand, therefore it is of vital importance to achieve high-purified vaccine. The review summed up the development of vaccine purification at present and its trend at home and abroad. Centrifugation and precipitation, as traditional methods, were widely used in vaccine production. Membrane and chromatography played a significant role in purification. Some novel methods, for instance, monolith, membrane chromatography and simulated moving bed, were highlighted and the work for future was discussed.

vaccine; purification; chromatography; membrane separation

2015-09-15; 接受日期：2015-10-15

国家863计划项目(2014AA021005)资助。

朱俊颖，硕士研究生，研究方向为分离提取技术。*通信作者：赵黎明，教授，博士生导师，研究方向为分离提取技术、食品加工技术。E-mail:zhaoliming@ecust.edu.cn

10.3969/j.issn.2095-2341.2015.06.01