HPLC法测定沙枣中槲皮素和异鼠李素的含量

宋海龙， 赵 璐， 杨海燕

(1新疆农业大学食品科学与药学学院， 乌鲁木齐 830052； 2新疆中药民族药研究所， 乌鲁木齐 830002；3新疆师范大学化学化工学院， 乌鲁木齐 830054)

HPLC法测定沙枣中槲皮素和异鼠李素的含量

宋海龙1,2， 赵 璐3， 杨海燕1

(1新疆农业大学食品科学与药学学院， 乌鲁木齐 830052；2新疆中药民族药研究所， 乌鲁木齐 830002；3新疆师范大学化学化工学院， 乌鲁木齐 830054)

目的 建立测定沙枣中槲皮素和异鼠李素含量的高效液相色谱法(HPLC法)。方法 色谱条件：C18色谱柱，甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)，检测波长370 nm。结果 槲皮素在0.016～0.032 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，异鼠李素在0.025～0.075μg(r=0.999 9) 范围内线性关系良好；槲皮素和异鼠李素的平均加样回收率分别为99.08%和100.07%；RSD分别为1.36%和0.98%(n=6)。结论HPLC法可快速准确地测定沙枣中黄酮类物质的含量，为沙枣黄酮类物质的进一步开发提供了可靠的依据。

沙枣； 高效液相色谱法； 槲皮素； 异鼠李素； 含量测定

沙枣(ElaeagnusangustifoliaL.)属胡颓子科(Elaeagnaceae)胡颓子属(ElaeaglltsL.)植物的干燥成熟果实，含有果糖、葡萄糖、蛋白质等多种成分。果实中含有鞣质、黄酮类、维生素、不饱和脂肪酸等生物活性物质[1]。沙枣原产于西亚，在新疆分布较为广泛，主要生长于平原、盐碱沙地、沙漠、山地和荒地。沙枣果实具有一定的药物用途和很高的营养价值[2]，具有抗炎、抗肿瘤、补虚、安神、固脱收敛、强壮镇静、健胃止泻等功效，被称作 “百树宝”[3]。近年来，黄酮类化合物的研究是一个热点[4]。许多黄酮类化合物具有止咳、祛痰、平喘、抗菌的活性。沙枣的枝、叶及花均含有黄酮类化合物，但对沙枣果实中所含黄酮类化合物含量的研究报道较少[5]。本研究采用HPLC法测定分析沙枣果实中槲皮素和异鼠李素含量，旨在为进一步有效地开发沙枣中黄酮类成分的药用价值提供可靠依据。

1 材料与试剂

1.1 材料与仪器沙枣果实采自新疆昌吉及新疆哈密，去除种子，粉碎，过40目筛，备用。分别为1号、2号样品。AB104-N电子天平(上海MettlerToledo公司)，KQ5200DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公市)，玻璃仪器气流烘干器(郑州长城科工贸有限公司)，粉碎机(天津泰斯达公司)，1220液相色谱仪(美国Agilent公司)， 1220二极管阵列检测器(美国Agilent公司)，HH-S6数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)。

1.2 试剂槲皮素(YA0806YB13)、异鼠李素(MUST-12112001)购置于上海源叶生物科技有限公司，甲醇(赛默飞世尔色谱纯)，水为超纯水，其他所用试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件WondaSilC18Superb色谱柱(250mm×4.6mm，5μm，100A)，流动相：0.1%磷酸溶液-甲醇(42∶58)，检测波长370nm，柱温25℃；体积流量1.0mL/min；进样量10μL。供试品中槲皮素、异鼠李素在此色谱条件下具有较好的分离效果，与其他成分分离效果较好，满足含量测定要求，见图1～3。

1：槲皮素；2：异鼠李素

图1 混合对照品色谱图 1：槲皮素；2：异鼠李素

图2 昌吉地区沙枣样品色谱图 1：槲皮素；2：异鼠李素

图3 哈密地区沙枣样品色谱图

2.2 对照品溶液制备精密称取2mg槲皮素和异鼠李素对照品，加入体积分数为80%的甲醇，置于10mL的容量瓶中，定容，分别制成含200μg/mL的槲皮素和异鼠李素溶液。精密量取槲皮素和异鼠李素对照品溶液各5mL，置10mL容量瓶中，制成含有异鼠李素与槲皮素混合对照品溶液，浓度为100μg/mL。

2.3 供试品溶液制备精密称取约1g供试品粗粉，置于锥形瓶中，精密加入50mL体积分数为80%的甲醇，加热回流30min，放冷，摇匀，过滤。精密量取滤液25mL，于具塞锥形瓶中，加入10mL体积分数为25%的盐酸溶液，摇匀，水浴加热回流30min，立即冷却，转移到50mL的容量瓶中，用适量的体积分数为 80%的甲醇洗涤锥形瓶，洗液合并倒入容量瓶中，加入体积分数为80%的甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。2批沙枣均用此方法制得，分别为1号、2号。

2.4 标准曲线制备精密称取异鼠李素与槲皮素对照品各2mg，分别置于10mL的容量瓶中，用体积分数为80%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取槲皮素对照品溶液8、10、12、14、16μL置于10mL容量瓶中，加入体积分数为80%的甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，取10μL进样测定峰面积。以槲皮素对照品峰面积Y为纵坐标，相对应的对照品的质量X(μg)为横坐标，计算得槲皮素的回归方程为：Y=7 272.5X—1.76，r=0.999 8，线性范围为0.016～0.032μg；精密量取异鼠李素对照品溶液10、15、20、25、30μL置于10mL量瓶中，加入体积分数为80%的甲醇稀释至刻度，摇匀，即得， 取10μL进样测定峰面积。以异鼠李素对照品峰面积Y为纵坐标，相对应的对照品的质量X(μg)为横坐标，计算得异鼠李素的回归方程为Y=1 419.2X—4.02，r=0.999 5，线性范围为0.025～0.075μg。

2.5 精密度试验重复进样混合对照品溶液5次，每次10μL进样量，测定峰面积。结果得到异鼠李素与槲皮素的峰面积的RSD分别为0.36%、0.67%。

2.6 稳定性试验取1号供试品溶液，分别于0、1、2、3、4、5h各进样10μL，依次测定峰面积。结果槲皮素峰面积RSD为1.65%(n=6)，异鼠李素峰面积RSD为1.26%(n=6),说明供试品溶液在5h内稳定。

2.7 重复性试验取1号药材5份，按“2.3”项下方法制备供试品，进样量为10μL。根据槲皮素和异鼠李素的峰面积计算得RSD分别为 0.86%、0.93%，表明该方法的重复性较好。

2.8 加样回收试验精密称取0.5g已知含量的样品，分别精密加入一定量的槲皮素及异鼠李素对照品，按“2.3”项下方法制备供试品，进样量为10μL，测定峰面积并计算回收率，结果槲皮素的平均回收率为99.08%，RSD为1.36%(n=6)，异鼠李素的平均回收率为100.07%，RSD为 0.98%(n=6)。结果表明该方法的准确性较好。

2.9 沙枣中槲皮素和异鼠李素的含量测定精密称取供试品1号、2号粉末各1g，按照“2.3”项下方法制备样品，进样量为10μL，分别测定槲皮素和异鼠李素的峰面积，重复测定3次，含量取平均值。

表1 沙枣中槲皮素和异鼠李素的含量测定

3 结论

高效液相色谱法(HPLC)已广泛应用于中药及制剂中有效成分或生理活性成分的含量测定[6-7]。本研究通过采用高效液相色谱法测定沙枣中黄酮类成分的含量，将370nm作为检测波长，在流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)的色谱条件下，异鼠李素和槲皮素分离较好，建立了沙枣中槲皮素和异鼠李素含量测定方法，经方法学考察，均符合中药质量标准要求，此方法简便准确、专属性强、精密度好、回收率高，为沙枣黄酮类物质的进一步开发提供了可靠的依据。

[1] 杜瑞芳,王雨梅,刘卫东,等.高效液相色谱法同时测定沙枣中槲皮素和异鼠李素的含量[J].时珍国医国药,2008,19(4):831-832.

[2] 新疆生物土壤沙漠研究所.新疆药用植物志[M].乌鲁木齐:新疆人民出版社,1981:76.

[3] 王雅,孙翠,陈丽琼,等.沙枣多糖的研究进展[J].中国食品工业,2015,(3):54-55.

[4] 何艳熙,李炳奇,刘红,等.沙枣中黄酮类化合物提取工艺条件的研究[J].中国中医药信息杂志,2008,15(7):57-58.

[5] 岳庆磊,郭效杰,罗宗铭,等.黄酮类化合物抗氧化机理及其在医药中的应用[J].广州化工,2003,31(2):10-12.

[6] 何效平.杨琼芳.王贤英.等.高效液相色谱法测定雪胆中雪胆甲素的含量[J].川北医学院学报,2007,22(3):264-266.

[7] 李岩,孟庆勇,赵欣,等.HPLC法测定天仙子东莨菪碱和莨菪碱的含量[J].新疆医科大学学报,2015,(1):64-66.

(本文编辑 施洋)

Determination of quercetin and isorhamnetin inElaeagnusangustifoliaL. by HPLC

SONG Hailong1,2, ZHAO Lu3, YANG Haiyan1

(1CollegeofFoodScienceandPharmacy，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China；2XinjiangChineseandMinorityNationalityMedicineReseaechInstitute，Urumqi，830002，China；3CollegeofChemistry，XinjiangNormalUniversity，Urumqi830054，China)

Objective To determine the content of quercetin and isorhamnetin inElaeagnusangustifoliabyhighperformanceliquidchromatography. Methods The separation was performed on C18column and the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution (58:42), quercetin and isorhanmetin was detected at 370 nm. Results The standard curve was linear within the concentration range of 0.016～0.032 μg for quercetin and 0.025～0.075 μg for isorhamnetin, respectively. The recovery was 99.08% for quercetin and 100.07% for isorhanmetin, respectively. RSD was 1.36% for quercetin and 0.98% for isorhanmetin (n=6). Conclusion This study provides a fast and accurate method to determine the content of flavonoids substances inElaeagnusangustifolia,providesthereliablebasisforthefurtherdevelopmentofflavonoidssubstancesinElaeagnusangustifolia.

ElaeagnusangustifoliaL.; HPLC; quercetin; isorhamnetin; determination of content;

新疆维吾尔自治区科技厅公益性科研院所基本科研业务资助项目(KY2015133)

宋海龙(1973-)，男，在读硕士，实验师，研究方向：食品加工与安全。

杨海燕，女，教授，博士，博士生导师，研究方向:食品安全，E-mail:2633165222@qq.com。

R

A

1009-5551(2015)12-1510-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.12.014

2015-09-16]