四川省钩端螺旋体病高发县报告病例的准确性调查研究

曾林子，曾义学，刘学成,袁 伟,张立杰,2,祁 腾，周兴余,2

四川省钩端螺旋体病高发县报告病例的准确性调查研究

曾林子1，曾义学1，刘学成1,袁 伟1,张立杰1,2,祁 腾1，周兴余1,2

目的 了解四川省钩端螺旋体病高发地区报告钩体病例准确性，为进一步控制钩体病流行提供科学依据。方法 采集2012年钩体病高发地区报告临床诊断病例血清进行钩体菌培养，血清学诊断，对钩体病检测结果为阴性的标本进行乙脑、出血热和立克次体检测。结果 共采集87例报告病例的血清标本，培养出4株钩体菌，钩体菌培养阳性率为4.6%。采集64份病例急性期和恢复期双份血清进行钩体病检测，其中54例阳性，阳性率为84.4%，采集23份病例单份血清，其中6份钩体菌检测阳性，阳性率为26.1%。对27份钩体检测阴性标本进行乙脑ELISA检测，阳性1例，出血热、立克次体检测结果均为阴性。结论 四川省钩体病高发地区临床诊断钩体病准确性较高，但依然需要加强病例双份血清采集和检测。

钩端螺旋体病;高发;准确性调查

钩端螺旋体病简称钩体病，是由致病性钩端螺旋体引起的动物疫源性传染病。近年来，全国发病率和死亡率有所下降，但四川省的发病率和死亡率仍居于全国前列。因此钩端螺旋体病的研究和防治仍然是四川省的重点防治工作之一。四川省钩体病疾病监测系统显示，2006年至2011年共报告1 015例钩体病病例，实验室诊断病例仅占5.6%(57/1 015)，其余均为临床诊断。确诊病例所占比例低的原因之一是由于很多病例未采集血清标本检测，在1 015例报告的钩体病病例中，只有15%(150/1 015)的病例采集了血清标本，而且主要以单份血清为主，采集到双份血清的病例占全部报告病例的4.9%。而四川省钩体病发病率最高的县(仪陇县)2010年和2011年报告的120例病例均为临床诊断，无实验室确诊病例。低采样率对钩体病的诊断造成很大影响，导致无法证实目前监测系统中报告的临床诊断钩体病病例是否为钩体病，因此对于钩体病的整体流行病学特征难以作出判断。为了解四川省疾病监测系统报告的钩体病病例诊断的可靠性，特开展本研究，以明确监测系统报告病例的可靠程度，为进一步完善钩体病监测系统提供参考。

1 材料和方法

1.1 标本采集 选取近3年来四川省钩体病报告病例最多的3个县：仪陇县、乐至县和安岳县，于2012年钩体高发季节采集临床诊断钩体病例急性期和恢复期双份血清。

1.2 方法 就诊医院采集病例急性期血液进行钩端螺旋体病原培养，并将剩余血液分离血清，56 ℃水浴灭活30 min,置低温冰箱备检并将离心后血清和血块冷冻保存。待病例发病3～4周后，由县疾病预防控制中心(CDC)专业人员入户采集病例恢复期血清，送至四川省CDC实验室进行钩体病，乙脑、出血热检测，对急性期离心分离的血块进行普氏和莫氏立克次体检测。

1.2.1 钩体病原培养、分离 在无菌操作条件下将病例急性期血液分别接种EMJH培养基中，置28 ℃培养，每周用暗视野显微镜观察1次，阳性者转种，菌种生长良好后，进行血清分群鉴定。培养分离出的钩体菌株按中国药品生物制品检定所的菌株检定程序进行鉴定，标准血清购自中国药品生物制品检定所。

1.2.2 血清学实验 按照《WS 290-2008钩端螺旋体病诊断标准》[1]对钩体抗体检测为阴性的标本进行乙脑、出血热快速检测；对急性期离心分离的血块按照《WS215-2008流行性和地方性斑疹伤寒诊断标准》进行普氏和莫氏立克次体检测[2]。

1.2.3 钩体标准菌株 国内15群15型钩端螺旋体标准代表株由卫生部药品生物制品检定所提供。

2 结 果

2012年3个钩体高发县共报告病例87例，完成87例病例采血,其中采集64例病例双份血清，23例病例单份血清。

2.1 钩体病原培养、分离 从87份病例急性期血液中培养出4株钩体菌，阳性率为4.6%。其中仪陇县分离出3株阳性菌株为七日热群，安岳县分离出1株阳性菌株为澳洲群。

2.2 钩体血清学检测 对患者恢复期血清较急性期血清抗体效价有4倍及4倍升高，或单份血清效价≥1∶400，判断为阳性。64份双份血清阳性率为84.4%(54/64),23份单份血清阳性率为26.1%(6/23)，见表1。

表1 四川省3个钩体病高发县2012年血清抗体检测结果

2.3 群型分布 60份阳性血清，共计4个血清型。其中以黄疸出血群为主38份，其次为秋季群14份，七日热群和澳洲群分别为6份和2份。

2.4 其它检测 对27份钩体检测阴性标本(双份10份，单份17份)开展立克次体(普氏和莫氏)、乙脑、出血热检测，从仪陇县1例病例双份血清中查出乙脑双份血清抗体IgG 4倍增高，出血热快诊检测仪陇县和乐至县各1名IgG阳性，既往感染过出血热，见表2。

3 讨 论

钩体病是由致病性钩体引起的一种全身性感染和免疫反应的临床病理过程，临床以早期钩端螺旋体败血症，中期的各器官损害和功能障碍，以及后期的各种变态反应并发症为特点。重症患者可发生肝肾功能衰竭和肺弥漫性出血，常危及患者生命，世界卫生组织曾估计20 世纪末时全球钩体病年发病数高达50万例[3]。

近年全国钩体病例主要分布在南方地区的四川、云南、贵州及沿海地区如广东和福建省[4]。四川省发病数在全国发病数位居第一，主要集中在仪陇县、安岳县和乐至县，而此3个县并非钩体病国家监测点。

仪陇县、乐至县、安岳县疑似钩体病人血清钩端螺旋体抗体检测结果表明，感染以黄疸出血群为主，阳性率为63.3%，其次为秋季群、七日热群，澳洲群，分别为23.3%，10%，3.3%，这与四川省钩端螺旋体病患者间主要流行菌群、主要宿主动物流行菌群基本一致[5-8]。因此，此3县易感人群应接种以黄疸出血群、秋季群和七日热群为主的多价疫苗，从而起到保护作用。

表2 3个县钩体病检测阴性其他鉴别诊断

Note: *fast diagnosis test, **ELISA test, ***PCR test.

从钩体菌培养结果来看，87份血液标本只分离培养出4株菌，原因可能在于病例发病初期症状不典型，在前往医院就诊之前已经使用抗生素。因此，疾控人员在钩体流行季节，应针对农村地区下田收割水稻人群进行健康宣传。菌株鉴定结果表明，仪陇县分离的3株菌均为七日热群，安岳县分离的1株菌株为澳洲群，与血清抗体检测结果一致。

从仪陇县2009-2012年报告的143例病例职业分布来看，农民占97.2%，高于全国或其他南方省份报告病例职业分布[4,9]，农民由于经济条件落后和自我防护意识差，收割农田时赤脚进入水田，极易接触到带菌动物的尿液。因此钩体病高发县在进行钩体病防治宣传时应强调放干稻田水再进行稻谷收割的重要性，加强群众防护意识，下田劳作时注意手脚的防护，建议穿筒靴下田，避免接触疫水。近几年来，由于钩体病发病率较低，群众防病意识逐渐淡漠，钩体疫苗副作用大，大多数群众不会主动接种钩体疫苗，免疫力下降，极易引起钩体病的流行。应加强健康教育工作，广泛地开展钩体病防治知识宣传，并在监测基础上对仪陇、乐至、安岳高发地区人群开展有针对性地钩体菌苗的全程预防接种。

通过此次调查，3个钩体高发县医疗单位医务人员对于钩端螺旋体临床诊断正确，与实验室诊断基本一致，诊断准确性较高，但是还需加强实验室检验能力，使得临床诊断与实验室诊断相辅相成，更快速地找准病原，及时进行治疗，保护人民身体健康。

[1]Standardization Administration of the People's Republic of China, WS 290-2008 Diagnostic Criteria For Leptospirosis[S].Beijing:People’s Health publishing House,2008. (in Chinese) 中华人民共和国国家标准委员会. WS 290-2008钩端螺旋体病诊断标准[S].北京：人民出版社，2008.

[2]Standardization Administration of the People's Republic of China WS 215-2008, Diagnostic Criteria For Epidemic Typhus And Endemic Typhus[S].Beijing:People’s Health publishing House,2008. (in Chinese) 中华人民共和国国家标准委员会. WS215-2008流行性和地方性斑疹伤寒诊断标准[S].北京：人民出版社，2008.

[3]Yan J. Leptospira epidemiology[M]. 3rd ed. Beijing: People’s Health Publishing House, 2006:323. (in Chinese) 严杰.钩端螺旋体病学[M].3版:北京,人民卫生出版社,2006:323.

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Accuracy investigation of the reported leptospirosis cases in high prevalence counties in Sichuan Province, China

ZENG lin-zi1,ZENG Yi-xue1,LIU Xue-cheng1,YUAN Wei1,ZHANG Li-jie2,QI Teng1,ZHOU Xing-yu1,2

(1.SichuanCenterforDiseaseControlandPrevention,Chengdu610041,China; 2.ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China)

To analyze the diagnosis accuracy of the reported cases in high prevalence counties in Sichuan province and to provide a scientific basis for prevention of leptospirosis, sera of clinical diagnosis cases in three high incident areas in 2012 were collected and examined by microscopic agglutination test (MAT). Pathogens were isolated from the samples and then cultured, and the strains were identified by MAT. Negative samples were conducted differential detection of Japanese encephalitis, haemorrhagic fever, and rickettsia. Results showed that 87 cases of leptospirosis were reported in three high prevalence counties in 2012. All cases sera were examined and cultivated for 4 strains ofLeptospira. Pathogens culture positive rate was 4.6%. Totally 64 cases of double serum were collected, of which 54 cases were positive for antibodies againstLeptospira, positive rate was 84.4%. A total of 23 cases of single serum were testes and 6 were positive, with the positive rate of 26.1%. The 27 negative serum samples were conducted Japanese encephalitis ELISA detection, and 1 was positive, and the haemorrhagic fever and rickettsia test results were negative. The diagnosis accuracy of the reported cases in high prevalence counties in Sichuan Province is high, but still need to strengthen collecting and testing of double serum for patient.

leptospirosis; high prevalence counties; accuracy investigation

Zhou Xing-yu, Email: zhouxingyu572@sina.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2015.12.024

周兴余，Email:zhouxingyu572@sina.com

1.四川省疾病预防控制中心，成都 610041; 2.中国疾病预防控制中心，北京 102206

R514.4

A

1002-2694(2015)12-1200-04

2015-05-07；

2015-08-04