不同施灸方法对模型大鼠衰老脾脏和胸腺指数以及学习能力、记忆力的影响研究

布仁图亚 斯钦图

(1赤峰市蒙医中医医院 内蒙古赤峰 024000;2内蒙古民族大学附属医院 内蒙古通辽 028000)

不同施灸方法对模型大鼠衰老脾脏和胸腺指数以及学习能力、记忆力的影响研究

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(1赤峰市蒙医中医医院 内蒙古赤峰 024000;2内蒙古民族大学附属医院 内蒙古通辽 028000)

目的：通过以胃穴为切入点，探讨不同施灸方法(正交实验L9(34))方法)对衰老大鼠模型筛选。方法：将110只SD大鼠随机分空白对照组、模型对照组和治疗组(1-9组)，采用D-半乳糖造模方法，观察和检测体重变化、脾脏和胸腺指数以及学习能力，记忆力等指标。结果：脾脏和胸腺指数以及体力、记忆力等相关指标的观察发现，治疗一、二、三、四、五、六、七、八、九之间的胸腺和脾脏指数、体力和记忆力等均无显著差异。结论：1.D-半乳糖衰老模型适用于不同灸疗法抗衰老筛选试验研究领域。2.阐明不同施灸方法抗衰老生物学方法的基础。为下一步多因素，多水平研究提供实验依据。

蒙医灸疗法;抗衰老;不同施灸方法

1.材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：110只纯种4月龄SD大鼠，体重为雄性(304±30)g、雄性(376±40)g、雌雄各半。

1.1.2 器材：755B紫外-可见分光光度机、固定热水盒、电子分析天平、高速冷冻离心机、4-20 0C和-80 0C冰箱、水迷宫、游泳盒。

1.1.3 试剂及施灸器：AUY120型电子天平、MORRIS水迷宫视屏跟踪分析机、D-半乳糖(上海楷洋生物技术有限公司，编号：T0047)、艾灸由北京中医医药大学提供。

1.2 方法

1.2.1 分组：将110只SD大鼠按体重随机分成11组。分别为正常对照组、模型对照组、治疗组(用正交试验L9(34)设计组为：第一、二、三、四、五、六、七、八、九组)。造模前将大鼠雌雄分开、在干净舒适环境中饲养。每天将更换颗粒资料饮水和窝垫。试验第六周开始分别对所进资料和饮水量进行记录。

1.2.2 造模：成正常对照组外均用D-半乳糖按每周体重每日150mg/kg的比例颈皮下注射［1］，正常对照组注射同等剂量生理盐水。在造模期间每周称一次大鼠体重，并观察大鼠运动举止和皮毛的颜侧色等外部特征。造模时间为6周。出现大鼠皮毛颜色变黄脱落，眼光变呆，动作缓慢，出现无精打采、驼背、怕冷，体重增加不明显等外部特征，与文献报道一致［2-5］，即造模成功。

1.2.3 施灸：从7周开始施灸，其中对照组和模型对照组只给固定条件，不做任何处理。对灸疗组参照文献在大鼠胃穴(在大鼠第12脊椎下凹处)剪去穴位周围鼠毛［6］，进行施灸。时间为5min、10min、15min，直径为0.1cm、0.2cm、0.3cm，灸垫为0.8cm、1.0cm、1.2cm，7天为一疗程，隔一天灸一次，共灸三个疗程。

1.2.4 水迷宫试验：灸疗结束前一周进行该试验用于大鼠记忆能力的检验，试验前进行培训。水深度37cm，水温度为26±℃，电脑系统只能认同红色标志，在大鼠的头上标红色，采用环形水池，水池的1/4中放入低于1cm左右的逃避平台。分A、B、C、D等四个区，每次不同的四个区开始放入水中开始训练，模型大鼠和空白对照组大鼠预先训练4天，然后开始正常试验，每支大鼠每天早晚各训练2次，每次120s或者当大鼠逃到水中的逃避平台时立即结束。检测指标：逃避时间每只大鼠从放入水中开始到逃到逃避平台时的时间(电脑系统自动记录时间)。

1.3 标本收集及检测方法

采用断头取血方法，将取脾脏和胸腺，用生理盐水洗干净后进行称重。计算出脾(胸腺)指数公式为：脾(胸腺)=脾(胸腺)重量(mg)/体重(g)。

1.4 数据统计采用正交设计助手v3.1软件处理。

2.结果

2.1 造模状况

正常对照组与模型对照组比较，体重有明显的差异(P＜0.01)，表明造模后模型对照组体重增长变化缓慢，结果见表1。

造模后各灸疗组与模型组大鼠体重比较，各灸疗组大鼠体重增加比模型组快(P＜0.05)，说明造模成功后模型组大鼠体重增长受限，结果见表2。

表1 造模3周后正常对照组与模型对照组大鼠体重比较(X±S，n=10)

表2 造模后各灸疗组和模型对照组大鼠体重比较(X±S，n=10)

除此之外，我们还观察到，模型大鼠动作比正常对照组拜年迟缓，毛色枯黄，精神萎靡不振等外部特征。

2.2 试验方法

按照L9(34)正交表进行试验，并将测定结果填于表3中，结果见表3。

表3 胸腺和脾脏重量指数优化L9(34)表及实验结果

2.3 结果

从直观分析及方差分析可知：胸腺和脾脏重量优化。A、B、C各因素水平之间均无显著性差异，最佳胸腺条件为A2B2C2即为：用10min时间0.2cm灸垫1.0的直径。最佳脾脏条件为A2B1C1即为：用10min时间0.1cm灸垫0.8的直径。结果见表4。

表4 胸腺和脾脏重量指数方差分析标记n=2 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

2.4 试验方法

按照L9(34)正交表进行试验，并将测定结果填于表5中，结果见表5。

表5 游泳和水迷宫试验的优化L9(34)表及实验结果

2.5 结果

从直观分析及方差分析可知：体力和记忆力的优化，A、B、C各因素水平之间均无显著性差异，最佳体力的条件为A2B2C2即为：用10min时间0.2cm灸垫1.0cm的直径。最佳记忆力的条件为A1B2C3即为：用5min时间0.2cm灸垫1.2的直径。结果见表6。

表6 游泳和水迷宫试验的方差分析标记n=2 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

3.结论与讨论

结论：根据上述试验，不同施救方法对胸腺的重量最佳时间为10min灸垫为0.2cm直径为1.0cm，脾脏重量最佳时间为10min灸垫为0.1cm直径为0.8cm，体力最佳时间为10min灸垫为0.2cm直径为1.0cm，记忆力最佳时间为10min灸垫为0.2cm直径为1.0cm。

讨论：蒙医不同的灸疗法施灸后具有不同的提高免疫力功能。本实验通过正交设计对、胸腺和脾脏、游泳和水迷宫指数进行了优化，并多个因素、多个水平研究提供了试验依据。

［1］斯钦图，乌云格日乐."胃穴"，"火降穴"施灸对功能性消化不良大鼠的影响及其组穴原理［J］.针灸临床杂志，2008，3，(24)：163 -165.

［2］徐智，吴国明，钱桂生.大鼠衰老模型的初步建立［J］.第三军医大学学报，2003，4(25)：9-11.

［3］博·阿古拉.蒙医传统疗法大成［M］.赤峰：内蒙古科学技术出版社，2000，3：172-174.

［4］朱亚诊，朱虹光.D-半乳糖致衰老动物模型的建立及其检测方法［J］.针灸临床杂志，2010，3，(14)：160-161.

［5］斯钦图，博·阿古拉，于天源，等.蒙医灸疗法抗衰老二三穴组穴配伍规律试验研究［J］，2010，12(6)：48-49.

［6］乌云格日乐，斯钦图.蒙医灸疗的保健作用及其机理［J］.中国民族医药杂志，2007，4(4)：122-124.

R-332

B

1009-6019(2015)03-0016-02

布仁图亚，硕士，赤峰市蒙医中医医院蒙医高血压科住院医师

斯钦图，博士，内蒙古民族大学教授、主任医师