2012～2014年尿液标本病原菌的分布特征及耐药性分析*

罗文英，吴显劲，麦 奇，林 湛，许蓝月(广东医学院附属医院检验科，广东湛江 524001)



·论 著·

2012～2014年尿液标本病原菌的分布特征及耐药性分析*

罗文英，吴显劲，麦 奇，林 湛，许蓝月(广东医学院附属医院检验科，广东湛江 524001)

目的 探讨该院尿路感染患者的临床分布和耐药性特征，为临床诊治尿路感染提供参考依据。方法 收集2012～2014年该院住院或门诊患者的尿液标本中分离培养获得的菌株数据进行统计分析。结果 该院尿路感染患者不同年份男女性别比较差异有统计学意义(P<0.05)。以泌尿外科、肾病内科、神经内科、颅脑外科居多，致病菌主要以革兰阴性菌为主，分离菌以大肠埃希菌居首位。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物厄他培南、亚胺培南的耐药率最低，其耐药率为0.0%～25.9%，但在2014年耐药率相对于前2年均有升高表现。有些致病菌在2014年的耐药率低于2012、2013年。结论 该院尿路感染患者呈逐年递增趋势，每年感染菌株种类有所不同，开展耐药机制研究对临床合理、规范用药及防治泛耐药或全耐药菌株很有帮助。

尿路感染； 细菌培养； 耐药

尿路感染是临床常见的感染性疾病之一，由于广谱抗菌药的广泛使用和临床抗菌药物的不合理应用，尿路感染病原菌的耐药性也越来越显著，导致尿路感染治愈难度加大。为了解本院尿液标本的临床分布特征和耐药性变迁，为临床诊治尿路感染提供参考依据，回顾性分析本院2012～2014年尿液标本病原菌的临床分布特征和耐药性特征，现将有关情况报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2012～2014年本院住院或门诊患者的尿液标本中分离培养获得的菌株，剔除同一患者同一部位重复分离菌株。

1.2 标本采样及菌株鉴定 严格按照《全国临床检验操作规程》3版及《临床微生物尿道感染实验室操作规范》进行[1]。

1.3 仪器与试剂 应用法国生物梅里埃公司VITEK2 COMPACT全自动细菌鉴定及药敏分析系统进行菌株鉴定及药敏试验，部分手动药敏试验采用K-B纸片扩散法，参照美国临床实验室标准化委员会2011～2013年版标准判断药敏试验结果。念珠菌采用显色平板鉴定和K-B法药敏试验。药敏纸片购自英国Oxoid公司，哥伦比亚血琼脂平板购自江门市凯琳公司，M-H琼脂平板购自上海科玛嘉公司，酵母菌鉴定试剂盒(比色法) 购自华鑫科技有限公司。

1.4 质量控制 以金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希菌ATCC 25922及铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制。

1.5 统计学处理 所有数据用WHONET5.6软件及SPSS13.0进行分析，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般资料 2012～2014年尿液标本分离病原菌的性别分布状况显示，2012年男74例，女54例；2013年男211例，女239例；2014年男791例，女720例。不同年份之间性别分布数经χ2检验差异有统计学意义(χ2=6.309,P=0.043)。2012、2013、2014年平均年龄分别为60.92、60.02、61.90岁，最小年龄分别为0、1、1岁，最大年龄分别为92、93、95岁。

2.2 不同科室病原菌分布情况 2012～2014年病原菌在不同科室的分布情况显示，不同年份不同科室间分离菌株经非参数检验具有明显差异(χ2=128.362，P=0.000)。3年共分离病原菌2 748株，泌尿外科分离病原菌最多(704株，构成比为25.62%)，肾病内科其次(256株，构成比为9.32%)，神经内科第3(233株，构成比为8.48%)，颅脑外科第4(218株，构成比为7.93%)。

2.3 病原菌的分布特征 2012～2014年尿液标本不同年份分离病原菌的变化趋势显示，3年从临床送检的尿液标本中共分离培养出2 748株病原菌，其中革兰阴性(G-)杆菌合计2 342株(构成比为85.23%)，革兰阳性(G+)球菌合计307株(构成比为11.17%)，白色念珠菌合计为99株(构成比为3.23%)。主要菌株株数及构成比为：大肠埃希菌1 359株(构成比为49.45%)；肺炎克雷伯菌355株(构成比为12.92%)；铜绿假单胞菌212株(构成比为7.71%)，粪肠球菌172株(构成比为6.26%)，奇异变形杆菌135株(构成比为4.91%)，鲍曼不动杆菌145株(构成比为5.28%)，屎肠球菌94株(构成比为3.42%)，白色念珠菌99株(构成比为3.60%)，阴沟肠杆菌56株(构成比为2.04%)，摩根菌摩根亚种34株(构成比为1.24%)，弗劳地柠檬酸杆菌32株(构成比为1.16%)，金黄色葡萄球菌27株(构成比为0.98%)，表皮葡萄球菌14株(构成比为0.51%)，黏质沙雷菌黏质亚种14株(构成比为0.51%)。2014年病原菌分离数量均高出其他2年每年分离菌株数。黏质沙雷菌黏质亚种仅在2014年分离出。弗劳地柠檬酸杆菌及白色念珠菌仅在2013、2014年分离出，奇异变形杆菌及阴沟肠杆菌在2012年未分离出。

2.4 产ESBLs细菌检出率 2012～2014年大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株检出情况显示，2012年290株大肠埃希菌检出产ESBLs菌104株，检出率为35.86%；89株肺炎克雷伯菌检出产ESBLs菌32株，检出率为35.96%。2013年258株大肠埃希菌检出产ESBLs菌129株，检出率为50.00%；64株肺炎克雷伯菌检出产ESBLs菌45株，检出率为70.31%。2014年811株大肠埃希菌检出产ESBLs菌413株，检出率为50.92%；202株肺炎克雷伯菌检出产ESBLs菌104株，检出率为51.49%。

2.5 主要病原菌的药敏结果 尿液培养主要分离细菌的耐药率见表1～3。

表1 主要肠杆菌科对常用抗菌药物的耐药率(%)

注：-表示未检测。

表2 主要非发酵菌对常用抗菌药物的耐药率(%)

注：-表示未检测。

表3 主要G+菌对常用抗菌药物的耐药率(%)

注：-表示未检测。

3 讨 论

正常尿液是无菌的，尿路感染病原菌常于患者机体免疫力低下时侵入泌尿生殖系统引起原发或继发性尿路感染。本研究分离出2 748株病原菌，病房以泌尿外科分离病原菌最多(共704株，构成比为25.62%)，肾病内科其次(共256株，构成比为9.32%)，神经内科第3(共233株，构成比为8.48%)，颅脑外科第4(共218株，构成比为7.93%)。由此可见，尿路感染患者主要来自于泌尿外科手术患者、长期卧床需要导尿患者或者原发性尿路感染患者，这与相关文献报道相符[2-3]。因此，对于外科手术患者或需要长期导尿患者，需定时清洁消毒导尿工具，以防发生继发性院内感染。本研究中，2012～2014年尿液分离标本性别分布差异具有统计学意义(P<0.05)，男性稍高于女性，这与其他文献报道女性高于男性有所不同，考虑可能本院尿路感染原发性感染患者较少，主要为继发性感染患者所致[4-5]。

2012～2014年分离病原菌主要以G-杆菌为主，构成比为85.23%，G+球菌构成比为11.17%，白色念珠菌构成比为3.23%。弗劳地柠檬酸杆菌及白色念珠菌仅在2013年及2014年分离出，奇异变形杆菌及阴沟肠杆菌在2012年未分离出，随着时间变化，本院尿路感染患者致病菌也发生了改变。尿路分离菌以大肠埃希菌排在首位，与文献[6-7]报道类似。排在第2、3位的为肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌，与文献[4-5]报道又有所区别。可见，本院尿路感染患者大多以快速生长G-杆菌为主。粪肠球菌与鲍曼不动杆菌分别位居第4、5位。目前国内文献大多限于尿路感染患者病原菌的临床分布情况，但对于尿路致病菌的致病机制报道较少，尚有待于进一步探讨。本研究中分离菌株逐年增加，一方面可能由于本院住院患者逐年增加，另一方面可能由于临床医生对合理用药认识水平增加，尿液标本送检率增加所致。2012年尿路标本中未分离出白色念珠菌，真菌分离率逐年升高，主要为白色念珠菌，对于日益增多的真菌感染，考虑主要原因是由于广谱抗菌药物大量使用，造成人体菌群失调，免疫力下降，条件致病菌大量繁殖所致，本研究中真菌对常用抗真菌药物仍有很高的敏感性。

本院根据药敏报告，若菌株对药物耐药率大于75.0%，建议临床对此菌感染不宜选用上述各类抗菌药物；若菌株对药物耐药率超过50.0%，提示应参照药敏结果选用；若耐药率超过40.0%，提示要慎重经验用药；耐药率超过30.0%，提示预警信号。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、头孢他啶、妥布霉素耐药率均小于30.0%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物厄他培南、亚胺培南、美罗培南的耐药率最低，但在2014年耐药率相对于前3年均有升高表现，这与国内外报道相符[8-10]。肠杆菌科细菌碳青霉烯类药物耐药的主要机制是产碳青霉烯酶，碳青霉烯酶能水解大部分β-内酰胺类，对碳青霉烯类药物水解率高，主要检测方法有改良Hodge试验，是检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的表型方法，能检测到活性较低的碳青霉烯酶，但该方法存在假阳性。而PCR方法则可更加准确地确证其产酶类型。及时开展耐碳青霉烯类菌株的耐药表型与基因型检测，对指导临床合理使用抗菌药物、延缓细菌耐药表型产生、有效控制耐药菌株播散具有十分重要的临床意义，本实验室有待于开展此类研究。本实验室在2014年对大肠埃希菌及阴沟肠杆菌提供了替加环素手动药敏试验，敏感率100.0%，它是一种新型静脉注射用甘氨酰四环素类抗菌药物。本研究中，大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株逐年增多，可能为此类菌株对β-内酰胺酶类药物耐药的原因之一，对于ESBLs菌株的出现“应避免长期应用第3代头孢菌素或同类间频繁更换”以减少细菌对ESBLs类抗菌药物耐药性的产生。本研究非发酵菌中，铜绿假单胞菌2012～2014年对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦类药物耐药率小于30.0%，对头孢吡肟、舒普深、妥布霉素、左氧氟沙星、阿米卡星及碳青霉烯类药物耐药率较低，但在2012～2014年相继出现有耐药率大于30.0%情况，提示要慎重使用此类药物。鲍曼不动杆菌对大多数药物耐药率超过75.0%，提示鲍曼不动杆菌大多为全耐或泛耐菌株。为了给临床提供更多药物选择，本院微生物室在2014年进行了舒普深、替加环素药敏试验，耐药率均小于30.0%。粪肠球菌对氨苄西林、呋喃妥因、利奈唑胺、青霉素G、万古霉素类药物耐药率均小于30.0%，尤其对利奈唑胺、青霉素G、万古霉素类药物敏感率为100.0%。屎肠球菌对利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀、替加环素、万古霉素耐药率小于30.0%。本研究中，有些致病菌在2014年的耐药率低于2012、2013年，考虑可能与本院加强耐药监测、临床不断规范抗菌药物使用有关。

总之，本院尿路感染患者逐年增加，尿路感染主要致病菌是大肠埃希菌，每年感染菌株种类也有所不同，及时开展耐药机制研究对临床合理规范用药，防治泛耐药或全耐药菌株很有帮助。

[1] 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程[M]．3版．南京：东南大学出版社，2006:472-531.

[2]Laupland KB，Ross T，Pitout JD，et al．Community on seturinary tract infection：a population-based assessment[J]．Infection,2007,35(3):150-153．

[3]周正任,李凡,舒明星,等.医学微生物学[M].6 版.北京:人民卫生出版社,2006:47．

[4]李菁华,刘镇,周龙珍.尿路感染患者的病原菌及其耐药性探讨[J].中国当代医药,2014,21(6):177-181.

[5]赵静，陈光辉，王山梅.尿路感染患者病原菌分布及耐药性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志,2014,28(1):103-104.

[6]黄烈,林广城,聂署萍,等.尿液培养主要病原菌分布和耐药性分析[J].现代预防医学,2012,39(4):969-971.

[7]苏晓楠,张桂铭,王祥花,等.我院2012年住院患者尿液标本病原菌分布及药敏分析[J].青岛大学医学院学报,2014,50(5):448-451.

[8]Vatopoulos A.High rates of metallo-beta-lactamase-producing Klebsiella pneumoniae in Greece——a review of the current evidence[J].Eur Surveill,2008,13(4):1-6.

[9]Oteo J,Delgado-Iribarren A,Vega D,et al.Emergence of imipenem resistance in clinical Escherichia coli during therapy[J].Int J Antimicrob Agents,2008,32(6):534-537.

[10]Kaezmarek F,Dib-Hajj F,Shang W,et al.High-level carbapenem resistance in a Klebsiella Pneumoniae clinical isolate is due to the combination of bla(ACT-l)bcta-laetamase production,porin Ompk35/36 insertional inactivation,and down-regulation of the phosphate transport porin phoe[J].Antimicrob Agents Chemother,2006,50(17):3396-3406.

Distribution characteristics and drug resistance analysis of pathogenic bacteria in urine specimens during 2012-2014*

LUOWen-ying,WUXian-jing,MAIQi,LINZhan,XULan-yue

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang,Guangdong524001,China)

Objective To explore the clinical distribution and drug resistance characteristics of the patients with urinary tract infection in our hospital to provide the reference basis for clinical diagnosis and therapy of urinary tract infection.Methods The data of bacterial strains isolated from urinary specimens in hospitalized patients or outpatients from January 2012 to December 2014 were collected and statistically analyzed.Results The urinary tract infection in our hospital had statistical differences among different ages of male and female patients(P<0.05).The majority were in the departments of urology surgery,nephrology,neurology and craniocerebral surgery.Gram-negative bacteria and Escherichia coli were the main pathogenic bacteria.The resistance of Escherichia coli against ertapenem and imipenem was lowest，its resistance rates ranged 0.0%-25.9%．The drug resistance rate in 2014 presented an upward trend compared with the past two years.The drug resistance rate of some pathogenic bacteria in 2014 was lower than that in 2012 and 2013.Conclusion The patients with urinary tract infection in our hospital show an increasing trend year after year.The infection strains every year are different.Conducting the study of resistance mechanism is very helpful for the clinical reasonable and standard medication and prevention and treatment of pan-drug resistant strains.

urinary tract infection; bacterial culture; drug resistance

国家自然科学基金资助项目(81301478)；广东医学院博士启动课题(XB1325)。

罗文英，女，博士，主管技师，主要从事病原菌致病机制及耐药机制研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.18.002

A

1672-9455(2015)18-2650-04

2015-03-15

2015-04-24)