气相色谱法测定二十二烷酸含量

赵娇娇，刘 静，周益峰

（中国计量学院 生命科学学院，浙江 杭州 310018）

二十二烷醇是由Avanir公司开发的2000年世界首次上市的广谱抗病毒药物［1］.同年其乳膏剂被FDA批准用作非处方药治疗复发性口腔炎及面部疱疹［2］.目前我国正在开发研究二十二烷醇的合成工艺，常见的合成方法是原料二十二烷酸经酯化再进一步还原得到二十二烷醇，而国内市售的二十二烷酸纯度多为80%左右，将购买的二十二烷酸纯化是控制二十二烷醇质量的关键步骤.目前高级脂肪酸气相含量测定方法多采用衍生化法［3］，二十二烷酸不用衍生化的气相色谱法尚未见到相关文献报道，建立一个二十二烷酸不用衍生化的气相方法，可以快速有效地测定二十二烷酸含量，并且可避免衍生化不完全或副反应造成的定量不准确.此法操作简单，重现性好，计算简便，可有效控制产品质量［4］.

1 仪器与试剂

仪器：Agilent 6890N气相色谱仪；正二十二烷酸对照品（日本 TCI公司，CAS：12－85－6，含量99%）；样品由本实验室自制；色谱柱DB－530m×0.32mm×0.25μm（－60～325℃）毛细管柱；检测器FID；柱温200℃保持3min，10℃·min－1升温至300℃，保持15min；进样口温度320℃；检测器温度320℃；载气为N2；进样方式为分流进样；分流比1∶20；进样量1μL.

2 方法与结果

2.1 对照品储备液的制备

精密称取对照品1.0g，置于100mL容量瓶中，加DMF（N，N－二甲基甲酰胺）适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液.

2.2 供试品溶液的制备

精密称取样品0.06g，置于10mL容量瓶中，加DMF（N，N－二甲基甲酰胺）适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液.

2.3 线性关系考察

分别精密吸取对照品储备液2、4、6、8、10mL置于10mL容量瓶中，加入DMF稀释至刻度，摇匀，质量浓度分别为2、4、6、8、10mg·mL－1，将对照品溶液分别进样3次，记录色谱图，如图1.以对照品溶液质量浓度对二十二烷酸峰面积绘制标准曲线［5］ 如图2.计算得回归方程y＝578.7x－805.6，R2＝0.999.结果表明，二十二烷酸在2～10mg·mL－1范围内线性关系良好.

图1 二十二烷酸GC色谱图Figure 1 GC chromatogram of behenic acid

图2 对照品溶液标准曲线图Figure 2 Standard curve of the reference solution

2.4 进样精密度试验

取质量浓度为6mg·mL－1的供试品试液，连续进样6次，记录色谱图，计算RSD＝0.39%.

2.5 精密度试验

取质量浓度为6mg·mL－1的二十二烷酸对照溶液，连续进样6次，记录色谱图，计算RSD＝0.8%.

2.6 重复性试验

同一批号的样品（批号：20150506），依法“2.2”平行制备6份供试品溶液，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，算其平均含量为96.56%，RSD＝0.55%.

2.7 稳定性试验

精密称取同一批号供试品溶液（批号：20150506）分别于配制后0、1、2、4、6、8、10、12、24小时进样测定，测得二十二烷酸峰面积平均值为2499.920，RSD＝1.84%，表明供试品溶液在24h内基本稳定.

2.8 回收率试验

取“2.2”项下已测知含量的二十二烷酸样品3份，分别称取0.04g，0.06g，0.08g，精密称定，置于10mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，振摇使溶解，在上述色谱条件下进样测定，各进样三针［6］，测得量由公式得到，计算二十二烷酸的平均回收率为99.8%（RSD＝0.53%，n＝9），结果见表1和表2.

表1 对照品溶液峰面积Table 1 Peak areas of the reference solution

表2 回收率试验结果Table 2 Results of the recovery rate

2.9 样品分析

取3批样品（批 号：20150505，20150506，20150507），依“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别按以上色谱条件测试，记录色谱图，根据标准曲线计算样品中二十二烷酸的平均含量为96.56%，平行测3次，计算结果见表3.

表3 二十二烷酸含量测试结果Table 3 Analytical results of behenic acid

3 讨 论

常见的高级饱和脂肪酸检测方法有：方法一，蒸发光散射检测法（ELSD）.此方法灵敏度高，但稳定性受环境影响比较大［7］，且二十二烷酸溶解度差，难以找到适合流动相进行检测.方法二，滴定法.滴定法操作复杂，且难以直观了解纯化过程中其它杂质的变化情况［8］.方法三，气相色谱法.二十二烷酸作为高级饱和脂肪酸，沸点较高（305℃），一般的气相色谱多采用衍生化法［9］，如酯化、酰化或硅烷化.但衍生化反应存在难以反应完全、容易发生副反应等问题，以致影响检测结果.同时过量的衍生化试剂对毛细管柱也会产生损害.

所以，本文的检测采用非衍生化的气相色谱法，来避免上述弊端.二十二烷酸在气相色谱中响应良好，保留时间适宜.从回收率及样品测定结果来看，本方法具有准确、重现性好、简便易行的优点［10］.

二十二烷酸溶解度较差，超过一定浓度的二十二烷酸易结晶析出，影响检测，所以需要控制其质量浓度在一定响应范围（2～10mg·mL－1）.

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