iASPP、ASPP2在宫颈癌中表达意义及与HPV16/18相关性研究

徐杰 孟运莲

摘要：癌基因过度表达与抑癌基因功能对其抑制的异常是导致宫颈癌发生与发展的最终结果及重要因素。本文通过检测宫颈癌、宫颈良性瘤以及正常宫颈组织中iASPP、ASPP2基因和HPV16/18 DNA的表达水平，旨在探讨HPV16/18感染和iASPP、ASPP2表达异常与宫颈癌发生、发展的关系，结果显示iASPP、HPV16/18在宫颈癌组织中表达明显增高但是ASPP2表达明显降低，iASPP、HPV16/18的表达与宫颈癌癌的侵袭和淋巴结转移有关，iASPP、ASPP2、HPV16/18的异常表达可能是宫颈癌发生和发展的重要因素。

关键词：iASPP;ASPP2;HPV16/18;宫颈癌

高危HPV HPV16/18是宫颈癌主要致癌因子^【1】。研究证实HPV中的E6、E7蛋白调控p53抑制了细胞周期的阻滞及细胞凋亡导致细胞增殖和凋亡之间不平衡而致宫颈病变，同时iASPP在正常组织细胞转化为恶性细胞时起着极其重要的促进作用^【2】。其中ASPP2與p53结合后可增强p53的促细胞调亡的功能，发挥抑制肿瘤的作用。

本研究重点检测宫颈癌、宫颈良性瘤以及正常宫颈组织中HPV16/18 DNA和iASPP、ASPP2基因的表达水平，为宫颈癌的临床诊断和治疗提供客观依据。

一、资料与方法

1.资料来源 收集本院2013年1月-2015年1月妇科住院治疗的宫颈疾病患者手术切除的宫颈组织85例，其中宫颈癌45例，宫颈良性瘤20例，正常宫颈组织组织20例。全部为女性，临床病历资料完整，所有病例均术后常规病理检查确诊，术前均未化疗、放疗及免疫治疗。简单随机划法分为A组45例（宫颈癌组织）、B组20例（宫颈良性瘤组织）、C组20例（正常宫颈组织），采用免疫组化方法检测三组组织中iASPP、ASPP2 、HPV16/18表达水平进一步分析三者的表达与宫颈癌临床病理特征的关系。各组患者年龄差异无统计学意义。（P<0.05）

2.方法

2.1 标本取材   每例标本同时取材2块，一块中性福尔马林固定，石蜡包埋用于免疫组织化学检测、病理确诊、组织分型等;一块备用将石蜡块制成4um厚的组织切片，经脱錯-脱苯-水化后，通过免疫组织化学法检测ASPP2、iASPP的表达水平。一抗为兔抗人iASPP、ASPP2抗体（稀释度为1：200），以PBS代替一抗作为阴性对照。

2.2  iASPP、ASPP2免疫组化及检测方法  载玻片经过预处理，将组织连续切片，厚度约为4nm，将蜡片平铺于水浴箱的水面上，自然展开后用防脱载玻片将醋片捞出，展开后室温干燥、编号置于40℃恒温烤箱中烤干备用。将组织切片按照XX方法进行免疫组化染色、复染和封片。

iASPP、ASPP2的阳性颗粒在细胞核，细胞核中出现棕黄色颗粒即为阳性细胞。综合染色强度和阳性范围，对iASPP、ASPP2蛋白的表达进行临床病理评分。染色强度：基本未着色、染色与背景相似者为0分，着色浅、略高于背景者为1分，中度着色明显高于背景者为2分，强染、着色深棕色者为3分;阳性范围：<10%为0分，10%-24%为1分，25%-49%为2分，50%-75%为3分，>75%为4分。染色强度和阳性范围相加，≥2分为阳性。

2.3宫颈组织HPV16/18 DNA检测  用试剂盒抽取各组HPV样本 DNA，用HPV16/ 18引物扩增片段，216bp左右处出现DNA条带为HPV16/18 DNA阳性。

3. 统计方法

使用SPSS11.5统计软件进行分析，所有计量资料的数据以均数士标准差（X±s）表示，计量资料比较用t检验，计数资料比较用X2检验， 采用Spearman等级相关的方法，对相关性进行分析，P<0.05为差异有显著性。

二、结果与分析

1 iASPP、ASPP2在宫颈癌、宫颈良性瘤和正常宫颈组织中的水平表达比较见表1及图1。

表1 iASPP、ASPP2在宫颈癌、宫颈良性瘤和正常宫颈组织中的水平表达比较[n，（%）]

组别    例数

iASPP                  ASPP2

阳性数   阳性率（%）     阳性数   阳性率（%）

A组     45         40      95.55%          2       4.0%

B组     20         11      55.0%           14      70%

C组     20          1      5.0%            18      90.0%

圖1 iASPP、ASPP2在宫颈癌、宫颈良性瘤和正常宫颈组织中的水平表达

注： iASPP、ASPP2在宫颈癌、宫颈良性瘤和正常宫颈组织中的水平表达，A组分别为95.55%（40/45）、4.0%（2/45）;B组55.0%（11/20）、70.0%（14/20）;C组5.0%（1/20）;90.0%（18/20），P均<0.05，具有显著性差异。

2.  iASPP、ASPP2的表达与宫颈癌临床病理特征的关系比较，见表2。

表2 iASPP、ASPP2的表达与宫颈癌临床病理特征的关系比较[n， （% ）]

病理特征   例数               ASPP2                     iASPP

阳性数      阳性率       阳性数        阳性率

年龄

<50       16          10        62.62           10           62.62

≥50       29          20        68.70           21           72.41

直径

<2cm      18           22        81.48           9           50.00

≥2cm      27           8         44.44           21          77.78

TNM

Ⅰ         10           4         40.0            6            60.0

Ⅱ         25           20        32.0           22           88.0

Ⅲ         10           1         10.0           10           100.00

淋巴转移

无         20           9        45.00             13         65.00

有         25           22       24.00^▲  21         84.00^▲ 

注：iASPP、ASPP2的表达与宫颈癌临床病理特征的关系比较，有淋巴结转移者iASPP表达明显高其它两组，ASPP2表达较其它两组明显下降（P <0. 05）;随着TMN分期及肿瘤大小的升高iASPP表達明显增加，ASPP2显著下降（P <0. 05） ，iASPP、ASPP2表达与年龄无关（P >0. 05）。

3.HPV16/ 18 DNA在宫颈癌、宫颈良性瘤和正常宫颈组织中的表达，见表3。

表3  HPV16/18 DNA在宫颈癌、宫颈良性瘤和正常宫颈组织中的表达  例

组    别

例  数

HPV16/ 18 DNA的表达

阳性数

阳性率（%）

A组

45

43

95.55^▲

B组

20

14

70.0

C组

20

2

5.0

注：宫颈癌组HPV16/18 DNA的表达率95.55%（43/45）明显高于宫颈良性瘤组70.0%（14/20）和正常宫颈组织组5.0% （1/20），差异有显著性（^▲P <0.01）。

4. HPV16/18 DNA的表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

45例乳宫颈癌组织中，有淋巴结转移者HPV16/18 DNA的表达率明显高于无淋巴结转移癌者（P <0. 05）;HPV16/18 DNA的表达率与年龄、肿瘤大小无关（P >0. 05）。

5.  HPV16/18 DNA与p53蛋白的相关性分析

在乳腺浸润性导管癌组织中，HPV16/18 DNA与iASPP  ASPP2的表达呈明显正相关（r_s = 0. 714、0.133， P <0. 05），见表4。

表4  HPV16/18 DNA与iASPP、ASPP2的相关性分析 （ 例）

HPV16/18    例 数           iASPP               ASPP2

阳性      阴性      阳性        阴性

阳性        43        39         4          0           38

阴性         2        1          1          2            0

三、讨论

大多数HPV能在宫颈扁平上皮中复制，使宫颈组织粘膜出现不典型增生直至恶变。本研究显示宫颈癌组HPV16/18 DNA的表达率95.55%（43/45）明显高于宫颈良性瘤组70.0%（14/20）和正常宫颈组织组5.0% （1/20），差异有显著性（^▲P <0.05），这正与文献研究相符。但仅仅感染病毒还不足以导致宫颈细胞的癌变，其他因素如：抑癌基因失活、癌基因的激活等在宫颈细胞癌变过程中同样起着极其重要作用。

研究证实HPV16/18可能通过iASPP、ASPP2导致p53蛋白突变来促进宫颈癌的发病、侵袭和转移。这与本研究结果相符iASPP、ASPP2的表达与宫颈癌临床病理特征的关系比较，有淋巴结转移者iASPP表达明显高其它两组，ASPP2表达较其它两组明显下降（P <0. 05）;随着TMN分期及肿瘤大小的升高iASPP表达明显增加，ASPP2显著下降（P <0. 05）。HPV16/ 18感染和iASPP、ASPP2表达异常造成P53等抑癌基因突变来共同参与宫颈癌的发生和发展，HPV16/18感染是在促进APSS-P53整合，在正常宫颈细胞转化成为恶性肿瘤的過程中ASPP2、iASPP发挥着重要的作用，这个结论与ASPP2、iASPP在其它肿瘤中的表达情况相同。iASPP、ASPP2 、HPV16/18与宫颈的癌发病和发展关系仍是一个值得进一步探讨的问题。

参考文献：

[1]苏胜发，卢冰，何常等.iASPP和ASPP2在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床特征的关系[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2010，17（2）：194-199.

[2]孟扬，丰义宽等.胰腺癌组织中iASPP和ASPP2的表达及其与临床特征的关系[J].潍坊医学院学报，2011，33（3）：170-172.