氟苯尼考与多西环素合用对鸡大肠杆菌的抑菌试验

杜永庆

[中图分类号] S858 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2015）10-0167-02

前言：近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养殖业的最为危害之一。 目前细菌性疾病的防治主要依靠抗菌素和疫苗制品，但由于细菌血清型差异变化较大、抗菌素长期超大剂量使用、耐药菌株产生等原因，导致细菌性疾病的防治效果下降，因而在临床上需不断选取敏感性药物才能达到防治细菌性疾病的目的增多腹膜，有灰白色渗出物。目前大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，氟苯尼考与多西环素连用对鸡大肠杆菌进行体外抑菌试验观察其，联合应用的抑菌效果，为临床应用提供了依据。

1 方法

1.1 细菌分离

无菌采集死鸡的肝脏，肺脏等组织。接种到普通琼脂平板上在温箱中37℃培养20h。涂片革兰氏染色后镜检。挑取表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明的单个小菌落划线接种于麦康凯琼脂平板，于37？℃培养20？h。

1.2 生化试验

将纯培养物分別接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖等生化试验管内37℃培养20h种到普通肉汤当中放进温箱37？℃培养20h，涂片，用革兰氏染色后镜检，挑观察结果

1.3 菌液制备

将分离出来菌钓取单个菌落接种到营养肉汤中，37℃培养20h放到4℃冰箱保存备用。

1.4 药敏试验

1.4.1用天枰称取0.07g氟苯尼考原粉放入小玻璃瓶中用无菌蒸馏水稀释后放入滤纸片并浸湿。贴上标签放入恒温箱留作配用。

1.4.2称取0.07g多西环素原粉放入小玻璃瓶中用无菌蒸馏水稀释后放入滤纸片并浸湿。贴上标签放入恒温箱留作配用。

1.4.3称取氟苯尼考多西环素各0.07g放入小玻璃瓶中用无菌蒸馏水混匀稀释后放入滤纸片并浸湿。贴上标签放入恒温箱留作配用。

1.4.4将培养皿清洗干净用牛皮纸包好放在高压灭菌锅里灭菌15min，取出后放入干燥箱内干燥，放入恒温箱备用。

1.4.5制作营养琼脂平板： 称取蛋白胨10g、牛肉膏5g、Nacl 5g、琼脂15g、500ml的蒸馏水放入烧杯中，放入微波炉里直至溶解，取出牛皮纸封口用绳扎紧放在高压锅内灭菌15min。灭菌后取出将琼脂倒入培养皿中，轻轻摇动使其均匀，琼脂凝固后涂病料。

1.4.6接种： 取出接种环烧去多余菌体，待接种环冷去挑取鸡大肠杆菌的单个菌落稍稍打开培养皿从接种细菌的部位从左向右轻轻划线，划线完毕皿盖。在已接完种的平板底壁中心及四周贴上标签写上药物名称，在用镊子夹取制备好的药片贴在琼脂平板的上与所写药名的位置对应，最后放入恒温箱中20h后观察.

药敏判定标准：抑菌圈直劲， 15 mm≤d<20 mm为高敏， 10 mm≤d<15 mm为中敏， d<10 mm为低敏。

2 最小抑菌浓度测定

2.1 氟苯尼考体外抑菌

2.1.1 药物原液稀释

用电子天平称取0.07g药物，用无水乙醇滴加震荡至完全溶解，以蒸馏水容到50ml，无菌操作将药物溶解稀释1280ug/ml。

2.1.2 稀释菌液

用营养肉汤做1：100倍稀释，然后在8支无菌加塞试管中加入稀释后的菌液，在第一个管中加入稀释后的菌液1.8ml其余各管均加入1ml。

2.1.3 加入抗菌药物

做2倍递进稀释，将灭菌后的试管放在试管架上进行试验操作，在第一试管内加入抗菌药物原液0.2ml，混合后用移液管吸出1ml加入第2个试管中，用同样的方法依次稀释至第7个试管中弃去1ml。第8管为生长对照37℃培养箱中培养18小时后观察结果凡无肉眼可见的细菌生长的最低药液浓度为该药单用时的MIC。

2.2 多西环素体外抑菌

2.2.1 药物原液稀释

用电子天平称取0.08g药物，用无水乙醇滴加震荡至完全溶解，以蒸馏水容到50ml，无菌操作将药物溶解稀释1280ug/ml。

2.2.2 稀释菌液

用营养肉汤做1：100倍稀释，然后在8支无菌加塞试管中加入稀释后的菌液，在第一个管中加入稀释后的菌液1.8ml其余各管均加入1ml。

2.2.3 加入抗菌药物

做2倍递进稀释，将灭菌后的试管放在试管架上进行试验操作，在第一试管内加入抗菌药物原液0.2ml，混合后用移液管吸出1ml加入第2个试管中，用同样的方法依次稀释至第7个试管中弃去1ml。第8管为生长对照37℃培养箱中培养18小时后观察结果凡无肉眼可见的细菌生长的最低药液浓度为该药单用时的MIC。

2.3 联合用药

2.3.1 药物原液稀释

分别称取两种药物原粉，用蒸馏水混合定容到50ml。

2.3.2 稀释菌液

用营养肉汤做1：100倍稀释，然后在8支无菌加塞试管中加入稀释后的菌液，在第一个管中加入稀释后的菌液1.6ml其余各管均加入1ml。

2.3.3 加入抗菌药物

分别将两种药液0.2ml加入第一个试管中，用二倍递进稀释法，直到稀释至第7个试管中弃去1ml。第8管为生长对照37℃培养箱中培养18小时后观察结果凡无肉眼可见的细菌生长的最低药液浓度为该药单用时的MIC。

3 实验结果

药敏试验结果： 氟苯尼考对鸡大肠杆菌的敏感度比多西环素敏感度高。联合用药时为高度敏感.氟苯尼考与多西环素合用对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度为1ug/ml表示两药合用为累加作用。

4 讨论

鸡大肠杆菌是一种条件性病原微生物，当机体抵抗力下降，特别是应急的情况下细菌的致病性即可表现出来使感染的鸡发病。本病常成为某些传染病的并发病或继发病。

单药的体外抗菌活性试验结果表明，大肠杆菌对氟苯尼考已经出现耐药性这说明如果在生产中继续使用单药，将很难起到杀菌作用，而且会使细菌耐药性进一步增强。治疗需要，当敏感菌低水平耐药后必须增大用药剂量，如果用药不规范就会造成药物在体内大量蓄积。药物蓄积浓度越高，细菌产生耐药性的速度越快，治疗时用药量就越大，这样就形成恶性循环，氟苯尼考与多西环素合用呈累加作用. 两药联合可大大减少氟苯尼考的用量减少了用药成本，同时大幅度增强杀菌效果。

药敏实验表明氟苯尼考与多西环素合用对大肠杆菌敏感度为高度敏感。测得单药的最小抑菌浓度与联合用药的最小抑菌浓度表明，联合用药为累加作用。联合用药组的抑菌作用比单独用药高。