补肾益智方对实验性阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆水平的影响

于 涛 赖世隆

(广东省中医院，广东 广州 510120)

阿尔茨海默病(AD)是一种以进行性的记忆和认知功能严重减退为主的老年期或老年前期发病的大脑变性疾病，中医在治疗此类疾病积累了丰富的理论和临床经验。补肾益智方是临床治疗AD的经验方，具有补肾填精、开窍益智的功效，本研究试通过该方对AD模型大鼠行为学的观察，来探讨其对AD模型大鼠学习记忆水平的影响，以期为临床应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 动物 Wistar大鼠，18～20月龄，雄雌各半，分笼饲养;自然照明。所有大鼠均由中山医科大学实验动物中心提供。

1.2 试剂、器材 脑立体定位仪(西安西北光电仪器厂)，Ibotenic acid(Sigma公司)，D-半乳糖 (上海试剂二厂)，补肾益智方(浓缩粉剂，6.44 g生药/g成药，广东省中医院制剂科，临用前分别配制成17.6 g成药/100 ml、8.8 g成药/100 ml两种浓度的液体)，石杉碱甲(上海红旗制药厂生产的双益平片，临用前配制成6 mg/100 ml液体)。

1.3 造模 造模大鼠给予腹腔注射以生理盐水配制的0.96%D-半乳糖(上海试剂二厂)，剂量为5ml/kg体重，老年正常组(简称:正常组)腹腔注射等比例的生理盐水，1次/d，连用6 w。第7周参照Paxins和watson大鼠脑立体定位图谱中Meynert基底核定位，按坐标为前囟后1.4 mm，旁开2.4 mm，深7.3 mm的无名质区定位，在麻醉后分别进行双侧无名质区注射Ibotenic acid 1μl(生理盐水配制，浓度为5μg/μl)造成AD模型。青年组和老年组在相同脑区注射等体积的生理盐水，过程同前。术后青霉素连续治疗3天，常规饲养。

1.4 分组、给药 术后1 w，将造模存活的大鼠随机分为模型对照组(记为MC);补肾益智方高剂量组(记为HD，剂量相当于5.6 g生药/kg体重);补肾益智方低剂量组(记为LD，剂量相当于2.8 g生药/kg体重);石杉碱甲对照组(记为HU，相当于0.3 mg/kg体重);对照组为老年正常组(记为SC)，用药剂量依据《药理实验方法学》第二版。

1.5 试验项目 大鼠灌胃完第二天进行Morris水迷宫行为学检测:(1)迷宫适应训练和游泳能力检验:第一天，撤去平台，选择池壁一固定点，让大鼠面向池壁入水，自由游泳2 min，并录下其游泳轨迹。对明显异常者予以剔除。(2)定向航行试验:历时5 d，从第二天起，每天分上、下午两段，每段训练4次，分别从南北(SW)、西北(NW)、东南(SE)和东北(NE)四个不同象限的池壁中点入水，每次大鼠游泳60 s，训练时任意选择一个入水点，测其在60s内寻找到平台所需的时间(逃避潜伏期)，如大鼠未能寻找到平台，则将其引上平台并记录其逃避潜伏期为60 s。(3)空间探索试验:用于测量大鼠学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的能力。即在第7天时撤除水平台，然后任选一个入水点将大鼠面向池壁放入水中，测其在120 s内在原象限的游泳时间及游泳距离占总距离的百分比。

1.6 统计方法 采用SPSS13.0软件进行方差分析。

2 结果

2.1 行为学检测结果 各组5天总平均逃避潜伏期:SC组(40.54±22.05)s，LD 组(37.17±22.75)s，HD 组(47.85±18.93)s，HU 组(46.11±20.13)s，MC 组(51.54±15.75)s。原平台象限游泳时间和游泳距离与总距离之比检测结果，见表1。

2.2 各组每天平均逃避潜伏期组间比较 见表2。

2.3 各组原平台象限以平台中点为中心40 cm环穿环时间和次数的比较 见表3。

表1 原平台象限游泳时间和游泳距离与总距离之比的百分数(x±s)

表2 各组每天平均逃避潜伏期比较(s，x±s)

表3 各组40 cm环穿环时间和次数比较(x±s)

3 讨论

学习和记忆功能是中枢神经系统中重要的高级功能，其基本过程可分为三个阶段，即获得、巩固和再现。Moris水迷宫主要用于学习记忆的神经生物学机制探讨和神经药理(包括中药药理)的研究。其中定位航行实验用于考察动物的学习能力，空间搜索检测其记忆能力。Morris能较全面地考察动物的认知过程，可排除尿液粪便等气味对实验结果的影响，客观反映其认知水平。操作简便，数据记录准确，误差小〔1〕。已经广泛用于学习记忆能力的测试，是目前此方面常用的实验方法〔2〕。

认知功能方面的减退是AD病人的重要临床表现。中医认为AD的认知功能方面减退主要与老年衰惫、肾精失充有关。近来研究表明，补肾类中药在延缓脑组织的衰老，提高神经递质和其受体水平，改善学习记忆障碍等的能力方面有着独特的优势〔3，4〕。

本文实验结果显示，该模型具有明显的学习记忆功能障碍，中药两个剂量组的学习记忆能力均有一定的改善，中药低剂量组改善更明显，优于石杉碱甲组中药高剂量组与石杉碱甲组无明显差异。

在原平台象限游泳时间和距离与总值比值的百分数、40CM环穿环时间和次数检测结果也显示中药低剂量组与模型组、石杉碱甲组比较具有明显的优势，且多数指标较正常老年组为优。而中药高剂量组与模型组、石杉碱甲组比较，优势不明显。Morris水迷宫检测结果提示:补肾益智方对AD模型大鼠的学习记忆功能障碍有非常明显的改善作用，效果优于对照药石杉碱甲。且补肾益智方改善作用的大小还与该药的用药剂量有很大的关系，其中的低剂量组的改善作用明显优于高剂量组，具体的量效关系尚待以后进一步的研究。

1 胡镜清，温泽淮，赖世隆，等.Morris水迷宫检测的记忆属性与方法学初探〔J〕．广州中医药大学学报，2000;17(2):117-20.

2 Goldman-Rakic PS.Working memory and the mind〔J〕．Sci Am，1992;267:73-9.

3 宫 斌，莫启忠，马 骏，等.补肾中药延缓老年小鼠脑功能衰老的机理研究〔J〕．中国老年学杂志，1996;16(3):170-2.

4 曹 娟，董联玲，冀俊虎，等.红景天对老年性痴呆大鼠行为学及海马区凋亡相关蛋白表达的影响〔J〕．中国中医急症，2008;17(11):1567-9.