TGF-β1和PAI-1在老年IgA肾病患者中的表达及意义

樊 平 梁新华 邹 川 刘旭生

(广州中医药大学第二临床医学院肾病科，广东 广州 510120)

IgA肾病是最常见的一种原发性肾小球疾病〔1〕，老年人发生IgA肾病的比例约为1.7%，且其发病率正在逐年升高〔2～4〕。然而目前研究并没有发现老年IgA肾病典型的病理特点，这给老年IgA肾病的诊断带来一定的困难。目前关于老年IgA肾病患者转化生长因子(TGF)-β1和纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1水平变化的研究较少。本研究观察TGF-β1和PAI-1在老年IgA肾病患者肾脏组织、血液及尿液中的水平，为老年IgA肾病诊断提供一定的科学依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取2012年1月至2013年1月在我院住院的老年IgA肾病患者30例，男15例，女15例;年龄60～71岁，平均(64.5±5.3)岁。选取同期在本院住院的青少年IgA肾病患者30例〔男16例，女14例，年龄15～30岁，平均(24.8±11.2)岁〕以及门诊体检健康的青少年〔男15例，女15例，年龄15～30岁，平均(25.4±12.3)岁〕、老年人〔男15例，女15例;年龄60～70岁，平均(65.1±4.9)岁〕各30例，作为血液和尿液TGF-β1和PAI-1水平检测的对照组。另选取5例〔男性3例，女性2例，年龄19～65岁，平均(38.6±22.1)岁〕脑死亡的尸体肾组织作为肾组织TGF-β1和PAI-1水平检测的对照组，肾组织取材时间均在离体后12 h内，经光镜及免疫荧光检查均未见异常。所有IgA肾病患者均经B超引导肾穿刺活检术证实为原发性IgA肾病，入选者均未使用过激素、细胞毒药物等免疫抑制剂，并排除系统性红斑狼疮、过敏性紫癜及各型肝病所致的继发性IgA肾病。根据老年IgA肾病患者24 h尿蛋白定量，将其分为 I组(尿蛋白＜25 mg·24 h－1·kg－1)、Ⅱ组(尿蛋白 25 ～ 50 mg· 24 h－1·kg－1)和 Ⅲ 组 (尿 蛋 白 ＞50 mg·24 h－1·kg－1);根据 Lee 组织学分级系统〔5〕将老年 IgA肾病患者分为Ⅰ～Ⅴ级。

1.2 样品采集 清晨空腹抽取所有研究对象外周静脉血3 ml，3 000 r/min离心20 min，收集上层血清置于－80℃冰箱中备用。采用尿杯留取清洁中段晨尿，置于15 ml离心管中，3 000 r/min离心20 min，收集上清置于－80℃冰箱中备用。留取30例老年IgA肾病患者活检组织标本备用。

1.3 血液及尿液 TGF-β1和 PAI-1水平检测 血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平检测的ELISA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司，严格按试剂盒说明书操作。

1.4 免疫组织化学检测 小鼠抗人TGF-β1单克隆抗体(1∶200)及兔抗人PAI-1多克隆抗体(1∶100)均购自Santa Cruz公司。具体免疫组织化学染色步骤参见文献〔6〕报道。结果采用CMIAS医学图像分析系统进行定量分析。

1.5 统计学方法 采用SPSS15.0软件，计量资料采用x±s表示，两两比较采用t检验，多组比较采用方差分析。

2 结果

2.1 肾脏组织TGF-β1和PAI-1水平分析 与健康青少年(A组)和健康老年人(B组)相比，青少年IgA肾病患者(C组)及老年IgA肾病患者(D组)肾脏组织TGF-β1和PAI-1表达水平均显著升高(P＜0.05)，且老年IgA肾病患者肾脏组织TGF-β1和PAI-1水平显著高于青少年IgA肾病患者(P＜0.05)。A组和B组相比，肾脏组织TGF-β1和PAI-1水平差异无统计学意义(P＞0.05)。见图 1。

图1 各组肾组织TGF-β1和PAI-1表达

2.2 血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平分析 与A组和B组相比，C组及D组血液及尿液TGF-β1和PAI-1表达水平均显著升高(P＜0.05)，且D组血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平显著高于C组(P＜0.05)，A组和B组血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 4组血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比较 (pg/ml，x±s，n=30)

2.3 老年IgA肾病患者不同水平24 h尿蛋白定量亚组TGF-β1和PAI-1在肾组织中的表达 随着老年IgA肾病患者24 h尿蛋白定量升高，其肾组织中TGF-β1和PAI-1表达水平逐渐升高(P＜0.05)。见图2。

图2 老年IgA胃病患者不同水平24 h尿蛋白定量亚组肾组织TGF-β1和PAI-1表达

2.4 老年IgA肾病患者不同水平24 h尿蛋白定量亚组血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比较 随着老年IgA肾病患者24 h尿蛋白定量升高，其血液及尿液TGF-β1和PAI-1表达水平逐渐升高(P＜0.05)。见表2。

表2 老年IgA肾病患者不同水平24 h尿蛋白定量亚组血液及尿液 TGF-β1、PAI-1水平比较(pg/ml，x±s)

2.5 老年IgA肾病患者不同组织学分级亚组TGF-β1和PAI-1表达分析 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级老年IgA肾病患者肾组织TGF-β1和PAI-1表达未见明显差异，Ⅳ、Ⅴ级老年IgA肾病患者肾组织TGF-β1和PAI-1表达未见明显差异;而Ⅳ、Ⅴ级老年IgA肾病患者肾组织TGF-β1和PAI-1表达水平显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级老年IgA肾病患者(P＜0.05)。见图3。

图3 老年IgA肾病患者不同组织学分级亚组肾组织 TGF-β1和PAI-1表达

2.6 老年IgA肾病患者不同组织学分级亚组血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比较 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级老年IgA肾病患者血液及尿液TGF-β1和PAI-1表达水平未见明显差异，Ⅳ、Ⅴ级老年IgA肾病患者血液及尿液TGF-β1和PAI-1表达水平未见明显差异;而Ⅳ、Ⅴ级老年 IgA肾病患者血液及尿液 TGF-β1和PAI-1表达水平显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级(P＜0.05)。见表3。

表3 老年IgA肾病患者不同组织学分级亚组血液及尿液 TGF-β1、PAI-1 水平比较(pg/ml，x±s)

3 讨论

本研究结果表明IgA肾病患者肾脏组织、血液及尿液中TGF-β1和PAI-1水平显著升高。文献报道，TGF-β1可抑制细胞外基质降解，促进肾脏组织纤维化的发生〔6〕。PAI-1表达上调可使肾小球内纤维蛋白沉积，抑制系膜基质的降低〔7〕，且PAI-1可促进肾小管间质纤维化〔8〕，参与IgA肾病的发生。

文献〔1〕报道老年IgA肾病患者与非老年IgA肾病患者相比，其24 h尿蛋白定量明显升高，且Lee组织学分级I级人数明显低于非老年IgA肾病患者，提示与非老年IgA肾病患者相比，老年IgA肾病患者的病情较严重。结合文献报道，本研究结果提示TGF-β1和PAI-1在老年IgA肾病患者疾病进展中发挥了重要的作用。

进一步对老年IgA肾病患者根据其24 h尿蛋白定量及Lee组织学分级进行分组，结果发现，随着老年IgA肾病患者24 h尿蛋白定量和组织学分级的升高，其肾脏组织、血液及尿液中TGF-β1和PAI-1表达水平逐渐升高。该结果进一步提示TGF-β1和PAI-1确实在老年IgA肾病患者疾病进展中发挥了重要的作用。

综上所述，老年IgA肾病患者肾脏组织、血液和尿液中TGF-β1和PAI-1表达水平均显著升高，且与疾病严重程度相关，可作为老年IgA肾病辅助诊断及判断疾病进展的手段之一。

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4 钟伟强，黄仲良，黄成文.中老年IgA肾病与青少年IgA临床病理特征对比分析〔J〕．中国老年学杂志，2013;33(16):4032-3.

5 Okada H，Suzuki H，Konishi K，et al.Histological alterations in renal specimens as indicators of prognosis of IgA nephropathy〔J〕．CIin Nephrol，1992;37:235.

6 周文华，孔丽丽，贾 冶，等.GSK3β抑制剂对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1和血清 PAI-1表达的影响〔J〕．中国实验诊断学，2013;17(4):634-8.

7 王海燕．肾脏病学〔M〕．北京:人民卫生出版社，2008:800-1．

8 王建中，陈香美，师锁柱，等.I型纤溶酶原激活物抑制物在IgA肾病肾小管间质损伤中的作用研究〔J〕．中华肾脏病杂志，2000;16(1):11-3.