胃癌及结直肠癌患者外周血CD45RA+和CD45RO+T细胞变化特征

王 巍 宋玉国 张付喜 (北华大学附属医院，吉林 吉林 132011)

CD45分子作为众多的人类白细胞表面抗原之一，至少有5种亚型，CD45RA分子和CD45RO分子是其中2种较有意义的亚型。未致敏的T细胞表面选择性高表达的是CD45RA，而CD45RO则是活化T细胞及记忆T细胞的表面标志。因此对两种表型的检测可以间接地反映出T细胞的免疫功能状态。而T细胞介导的细胞免疫在肿瘤免疫中发挥着最为重要的作用。本文旨在研究外周血中T细胞表面两种分子的表达与胃癌及结直肠癌的发病及进展程度的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年4～11月我院普通外科收治的胃癌及结直肠癌病人共50例作为试验组，年龄38～84岁，平均(60.8 ±11.0)岁，男性34例，女性16例，胃癌24例，结直肠癌26例。按照国际最新TNM分期标准分为:Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期20例。所有病人术前均经过胃镜或肠镜检查及病理活检明确诊断，术前检查无其他重大疾病，未经过放化疗或免疫治疗。TNM分期均经手术及术后病理证实。另选择我院体检中心体检健康人26例作为对照组，年龄40～79岁，平均(61.4±10.2)岁，男17例，女9例，两组年龄性别比较无显著差异(P＞0.05)。

1.2 仪器与试剂 仪器:美国Beckman公司EPICSXL型流式细胞仪。试剂:CD45RA-FITC，CD45RO-PE，美国 Beckman公司;溶血剂 A:甲酸1.2 ml，加 H2O至1 L;溶血剂 B:碳酸钠6.0 g、氯化钠14.5 g、硫酸钠31.2 g，加 H2O 至 1 L。

1.3 外周血中CD45RA+T细胞和CD45RO+T细胞的测定在患者知情同意的情况下，于晨起后空腹状态下进行肘部静脉采血1 ml，放于EDTA-K2抗凝管内混匀备检。取一只流式细胞仪专用试管，加入 CD45RA-FITC 20 μl、CD45RO-PE 20 μl、抗凝全血100μl，室温避光标记20 min;加入溶血剂A 600μl，放在振荡器上振荡8 s，立即加入溶血剂B 260μl，混合后加入4 ml磷酸盐缓冲液(PBS)，1 000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入1 ml PBS，应用流式细胞仪检测分析。

2 结果

胃癌和结直肠癌病人的外周血T细胞CD45RA、CD45RO及CD45RA/CD45RO比值与对照组比较均无差异(P均＞0.05)。与Ⅰ～Ⅱ期患者比较，Ⅲ～Ⅳ期患者的CD45RA升高，CD45RO降低，CD45RA/CD45RO比值升高(P＜0.05)。与对照组相比，Ⅲ ～Ⅳ期患者的 CD45RA升高，CD45RO降低，CD45RA/CD45RO比值升高(P＜0.05)。胃癌及结直肠癌组外周血T细胞CD45RA、CD45RO及CD45RA/CD45RO比值均无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

表1 各组的CD45RA、CD45RO及二者比值比较(±s)

表1 各组的CD45RA、CD45RO及二者比值比较(±s)

与Ⅲ～Ⅳ期组比较:1)P＜0.05

组别 n CD45RA(%)CD45RO(%) RA/RO 比值试验组50 45.3±10.7 41.4±9.9 1.20±0.54胃癌组 24 48.0±10.6 39.6±7.8 1.28±0.45结直肠癌组 26 42.7±10.3 43.0±11.5 1.12±0.61Ⅰ～Ⅱ期 30 41.5±9.41) 45.4±9.01) 0.96±0.341)Ⅲ～Ⅳ期 20 50.9±10.7 35.3±8.2 1.55±0.61对照组26 43.9±6.6 40.9±7.2 1.13±0.36

3 讨论

对于胃癌和结直肠癌患者外周血中肿瘤标记物的研究一直是热点。除了常用的对CEA、CA19-9、CA125的检测，近些年还有关于 MG7-Ag、M2-PK、CA72-4、中期因子(MK)检测的报道。根据报道证实，人们还没有找到一种在特异性、敏感性方面都十分理想，并能确切的符合病人病情发展程度的指标〔1，2〕。肿瘤患者的免疫状态也是研究的热点。

CD45RA分子和CD45RO分子是白细胞分化抗原CD45的两种亚型，其形成是由于CD45分子肽链胞外区氨基端外显子的不同剪接，T细胞在发育成熟的过程中表达不同的亚型〔3〕。在外周血中，T细胞在接触抗原而被活化后，细胞膜表面的CD45RA表达减弱或消失，CD45RO表达增强。CD45RA+T细胞称为纯真性T细胞，不能发挥较强的免疫功能;CD45RO+T细胞称为活化/记忆性T细胞，表现为辅助免疫、免疫杀伤和免疫记忆功能〔4〕。因此将两种分子标志作为区分初始T细胞和效应T细胞、记忆T细胞的检测标志之一，其数量的改变可反映机体细胞免疫功能的变化情况。近年来有关两种分子在病毒感染性、过敏性疾病病人外周血中表达的研究可见报道〔5～7〕，在胃癌及结直肠癌病人外周血中表达情况的研究并不多见。

分析Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ患者检测结果与张国庆等〔8〕对大肠癌外周血中淋巴细胞表型报道的变化趋势相符合，病人在肿瘤的相对早期，由于肿瘤对免疫系统的激活，机体对肿瘤进行以T细胞免疫为主的免疫反应，试图对异常变异的肿瘤细胞进行清除，使得表达CD45RA的初始T细胞被活化成为效应T细胞及记忆T细胞，故CD45RA表达下降，而CD45RO表达增强。随着肿瘤的进展，一方面可能是由于肿瘤细胞通过分泌抑制性因子等机制对机体进行免疫抑制，干扰阻碍T细胞的转化。或肿瘤细胞的大量、快速生长超过了机体的免疫效应能力，机体出现所谓免疫枯竭，出现了对肿瘤细胞的“漏逸”。另一方面，外周血中的活化的免疫细胞可能向肿瘤组织局部进行浸润转移。对直肠癌肿瘤微环境的研究表明，肿瘤组织中的淋巴细胞数量明显高于正常组织〔9〕。这或许造成了外周血中免疫细胞的减少，有关外周血中及肿瘤组织微环境中免疫细胞的变化趋势的相互关系尚需要进一步研究。由于上述机制使得两种抗原的表达趋势出现倒转。

本文结果说明两种消化道肿瘤在抗原表达上可能具有共性，分析健康组与试验组检验结果原因与对照组比较，Ⅰ～Ⅱ期病人与Ⅲ～Ⅳ期病人的呈现相反的变化趋势，故平均后使得病人总体的检测结果与对照组检测结果无显著差异。在一定程度上说明检测CD45RA及CD45RO本身并不具有诊断价值，尚不能将其作为特异性指标进行肿瘤筛查。对于已经诊断明确的胃及结直肠肿瘤患者，对两种分子的检测对评估病人的病情进展有着一定的参考价值。

由于肿瘤免疫的复杂性，有关胃癌及结直肠癌病人外周血中T细胞亚群CD4+T细胞及CD8+T细胞表面CD45RA及CD45RO的表达情况的报道研究亦不多见，是否与T细胞总体表达情况相同，结论亦不统一。在下一步的研究中，将继续观察胃癌及结直肠癌病人术后外周血中T细胞表面CD45RA及CD45RO表达情况的变化趋势。

1 杨 倩，郑 青.胃癌血液肿瘤标记物研究进展〔J〕.胃肠病学，2011;16(9):569-71.

2 曲 杰，黄 敏，许 方，等.胃癌和结肠癌患者血清MK的定量检测及其临床意义〔J〕.中国实验诊断学，2011;15(2):234-6.

3 Fujii Y，Okumnra M，Inada K，et al.CD45 isoform expression during T cell development in the thymus〔J〕.Eur J Immumol，1992;22(7):1843-50.

4 Clement LT，Vink PE，Bradley GE.Novel immunoregulatory functions of phenotypically distinct subpopulations of CD4+cells in the human neonate〔J〕.J Immun，1990;145:102-8.

5 席允平，钱存荣，孔宪涛，等.CD45RA在肝炎和肝癌患者中的表达变化及其意义〔J〕.中华肝脏病杂志，2005;13(11):865-6.

6 罗 鸿，余 晔，沈 莹，等.常年性持续性变应性鼻炎患者外周血单个核细胞CD45RA及CD45RO表达〔J〕.中国耳鼻咽喉头颈外科，2011;18(5):260-2.

7 赵 瑜，薛海燕，毛海英，等.CD4+T淋巴细胞表面CD4+CD45RA和CD4+CD45RO在支气管哮喘患儿外周血中的表达〔J〕.实用儿科临床杂志，2008;23(4):277-8.

8 张国庆，焦顺昌，温新宇，等.大肠癌患者与正常健康人淋巴细胞表型差异分析〔J〕.细胞与分子免疫学杂志，2012;28(7):735-7.

9 朱兴国，虞敏晶，袁 寅，等.直肠癌患者肿瘤原位免疫与外周血T淋巴细胞亚群及肿瘤分化程度的相关性〔J〕.苏州大学学报(医学版)，2011;31(5):764-8.