雌激素受体、肺耐药蛋白和胸苷酸合成酶在乳腺癌的表达及临床意义

张晓丽 李春雷 肖国锋 李 泽 赵雪聪 (河北北方学院生命科研究中心，河北 张家口 075000)

据资料统计，乳腺癌发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%，40～60岁之间、绝经期前后的妇女发病率较高，仅约1% ～2%的乳腺患者是男性〔1〕。近来研究表明，乳腺癌与雌激素受体、肺耐药蛋白、胸苷酸合成酶的表达有很大的关系〔2～5〕。虽然目前乳腺癌诊断研究进展有很大提高，但是对如何准确评估乳腺癌的预后及为临床治疗方案提供可靠的依据仍不够理想。因此，本实验通过检测乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、肺耐药蛋白(LRP)、胸苷酸合成酶(TS)的表达水平，分析它们在乳腺癌组织中表达水平与乳腺癌患者年龄、发生部位、病理组织学类型、是否发生淋巴结转移的相关性，探讨联合检测ER、LRP和TS对乳腺癌诊断、治疗和判断预后的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集河北北方学院附属医院和张家口市第一医院外科自2003～2010年乳腺癌手术切除肿瘤标本130例，全部为女性，术前未做放化疗，病理诊断明确。患者平均年龄50.5(30～79)岁，中位年龄44岁。病理分型:非浸润性癌28例，浸润性小叶癌31例，浸润性导管癌71例。其中有淋巴结转移的72例，无淋巴结转移的58例。

1.2 标本处理 取10 cm×10 cm×3 cm的新鲜标本固定于10%中性甲醛内(24 h)，常规石蜡包埋，切片厚度4μm。裱片后37℃保存，待染。

1.3 免疫组化染色 兔抗LRP、ER多克隆抗体和TS单克隆抗体，SP免疫组织化学试剂盒和DAB显色试剂盒(均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)。染色程序严格按照试剂盒要求进行，阳性对照用已知的ER、LRP、TS阳性切片，阴性对照用PBS代替Ⅰ抗。

1.4 结果判断 阳性物质呈棕黄色。ER和LRP阳性部位主要集中在细胞核，TS阳性部位在近胞膜处。根据整视野中阳性细胞占全部细胞的比例，以10个高倍镜视野中阳性细胞＞15%者为阳性病例，否则为阴性病例。

1.5 统计学处理 采用SPSS14.0软件行χ2检验，相关性分析采用四格联列表法。

2 结果

LRP和TS在乳腺腺瘤中的阳性表达低于乳腺癌(P＜0.05)，ER在乳腺腺瘤和乳腺癌中的表达无显著性差异(P＞0.05)。在非浸润性乳腺癌内LRP、TS阳性率高于浸润性乳腺癌，但是只有TS有显著性差异(P＜0.05)，而ER阳性率低于浸润性乳腺癌(P＜0.05)。有淋巴结转移的患者LRP和TS表达率高于无淋巴结转移患者(P＜0.05)，而ER的表达率与淋巴结是否转移无明显相关性(P＞0.05)。这3种基因表达与乳腺癌患者年龄和位置无明显相关性(P＞0.05)。LRP、ER和TS的表达与乳腺癌生物学特性的关系见表1。

表1 LRP、ER和TS的阳性表达与乳腺癌生物学特征的关系〔n(%)〕

3 讨论

乳腺癌的发生是遗传与环境等多因素参与的复杂过程，目前主要认为大多数肿瘤的发生可能涉及不同的基因突变或转录表达异常等，原癌基因激活、抑癌基因失活、细胞凋亡及细胞周期调节基因失调等多基因参与的分子事件，启动并促发了乳腺癌的发生。

目前乳腺癌的治疗以手术治疗为主，内分泌治疗作为辅助治疗。雌激素受体(ER)是存在于正常乳腺上皮细胞胞核内的甾体激素受体，调节乳腺细胞的增殖和分化，其分子上有激素结合区及DNA结合区〔5〕。乳腺细胞癌变后仍能保持其激素依赖性生长，临床上激素依赖性乳腺癌约占全部乳腺癌的50%～60%〔6〕。随着肿瘤细胞分化变差，受体表达降低，肿瘤对激素的依赖性生长随之降低，导致激素对肿瘤生长的调控作用也降低。研究表明ER率高患者，对各种治疗有效尤其是对内分泌治疗敏感性高，可使肿块缩小，癌细胞凋亡〔7〕。本实验显示ER阳性表达的乳腺癌术后5年生存率明显高于阴性者，且术后复发和远处转移较少。检测ER表达程度对判断预后，指导内分泌治疗具有一定的指导意义。

化学治疗是乳腺癌术后常用的治疗手段，但是对化学治疗耐药是导致乳腺癌治疗失败的主要原因之一。肿瘤多药耐药是多基因多途径共同参与的结果。肺耐药相关蛋白是1993年Scheper等〔8〕在无P-糖蛋白表达的多种药物耐药的肺癌细胞株中最先发现的一种与MDR有关的蛋白。研究表明LRP可能参与了药物的核浆转运过程，阻止药物作用与其在核上的靶点，从而引起细胞对药物的耐受〔9〕。本研究结果提示LRP与乳腺癌的发生有关系，可作为化疗和预后的参考指标。

TS是叶酸代谢过程中的关键酶，是合成胸苷酸所必需的酶，在DNA合成与修复、细胞增殖与分化中有十分重要的作用。抑制此酶将阻止 DNA合成，即抑制细胞分裂，使细胞死亡。TS是临床广泛使用化疗药物的5-FU的主要作用靶点，通过与抗肿瘤药物结合，形成复合物而解毒，TS的过表达使得FdUMP不能完全抑制 TS的作用，肿瘤细胞对5-FU产生耐药〔10，11〕。本研究结果提示TS参与了乳腺癌的发生过程，在临床上进行检测可以提示乳腺癌的预后及耐药情况。

综上所述，ER、LRP和 TS和乳腺癌的发生、发展和转移有关，说明乳腺癌的形成过程是多基因相互作用和共同调节的结果，因此，在乳腺癌组织中进行多基因联合检测，对乳腺癌的进展和转移以及化疗药物的选择和预后判断都有重要意义。

1 南润玲，尚培中，王铁山.乳腺癌易感基因BRCA1的研究进展〔J〕.实用医学杂志，2011;27(12):2284-6.

2 桑 晶，韩玉贞，张志强，等.三阴性乳腺癌组织耐药蛋白GST-π和LRP及TopoⅡ表达的研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2011;18(7):521-3.

3 邓燕明，梁剑苗，冯卫能，等.非小细胞肺癌组织TS表达与培美曲塞治疗疗效相关性的研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2012;19(21):1637-9.

4 Zhang KG，Qin CY，Wang HQ，et al.The effect of TRAIL on the expression of multidrug resistant genes MDR1，LRPand GST-π in drug-resistant gastric cancer cell SGC7901/VCR〔J〕.Hepatogastroenterology，2012;59(120):2672-6.

5 刘卫梅，刘建民，封 琳，等.ER、PR及PS2基因在乳腺癌中的表达及其临床意义〔J〕.中国实用医药，2008;3(35):19-20.

6 Choi JE，Hur W，Jung CK，et al.Silence of 14-3-33 overexpression in hepatocellular carcinomainhibits tumor growth and enhances chemosensitiviy to cisdiammined dichloridoplatium〔J〕.Cancer Lett，2011;303(2):99-107.

7 Tewes M，Aktas B，Welt A，et al.Molecular profiling and predictive value of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer:an option for monitoring response to breast cancer related therapies〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2009;115(3):581-90.

8 Scheper RJ，Broxterman HJ，Scheffer GL，et al.Overexpression of a M(r)110，000 Vesicular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance〔J〕.Cancer Res，1993;53(7):1475-9.

9 Yasunami T，Wang YH，Tsuji K，et al.Multidrug resistance protein expression of adult T-cell leukemia/lymphoma〔J〕.Leuk Res，2007;31(4):465-70.

10 Wang X，Wang Y，Wang Y，et al.Association of thymidylate synthase gene 3'-untranslated region polymorphism with sensitivity of non-small cell lung cancer to pemetrexed treatment:TS gene polymorphism and pemetrexed sensitivity in NSCLC〔J〕.J Biomed Sci，2013;20(1):5.

11 Ohrling K，Karlberg M，Edler D，et al.A combined analysis of mismatch repair status and thymidylate synthase expression in stageⅡandⅢcolon cancer〔J〕.Clin Colorectal Cancer，2012;12(2):128-35.