氨氯地平联合辛伐他汀对高脂饮食兔肝脏高密度脂蛋白受体的影响

庞 栋 李晓燕 王 辉

·实验研究·

氨氯地平联合辛伐他汀对高脂饮食兔肝脏高密度脂蛋白受体的影响

庞 栋 李晓燕 王 辉

目的 探讨高脂饮食及氨氯地平、辛伐他汀对兔肝脏高密度脂蛋白受体的影响。方法 日本长耳兔50只随机分为对照组、模型组、氨氯地平组、辛伐他汀组、联合用药组, 各10只。分别给予普通饲料及高脂饲料并加用药物。于实验开始、24周末测血脂水平, 测定肝脏高密度脂蛋白受体(HDLR)的表达。结果 模型组兔血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01)。氨氯地平组TC、TG、LDL-C高于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.01)。辛伐他汀组TC、TG、LDL-C降低, 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高, 较模型组差异具有统计学意义(P＜0.01)。联合用药组TC、LDL-C、TG降低, HDL-C升高, 较对照组差异有统计学意义(P＜0.05), 较模型组差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论 氨氯地平不影响血脂水平, 增加肝脏HDLR表达；辛伐他汀可明显调节血脂, 增加肝脏HDLR表达；辛伐他汀、氨氯地平联合应用较单药更明显增加肝脏HDLR表达。

高脂血症；氨氯地平联合辛伐他汀；高密度脂蛋白受体

作为临床多发病, 高血压、高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因素且常合并存在, 如何选择药物以更好的控制病情, 预防并发症的发生尤其重要。大规模临床试验证实氨氯地平联合辛伐他汀对改善预后有协同作用, 具体机制不明。本文就氨氯地平联合辛伐他汀对高脂饮食兔肝脏HDLR的作用进行研究, 为高血压合并高血脂患者临床用药提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 实验动物为日本长耳兔(雄性)50只, 体重2.0～ 2.5 kg, 购自山东大学实验动物中心。

1.2 仪器与试剂 主要仪器：美国罗氏日立生化仪Modular DPP；WMK-08型电热恒温培养箱, OLYMPUS BH-2型光学显微镜。主要试剂：HDL-C、LDL-C、TC、TG检测试剂盒,购自四川省迈克科技有限责任公司；兔抗HDLR, 生物素化山羊抗兔IgG, SABC免疫组化试剂盒, DAB显色试剂盒, 均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 动物分组与处理 50只日本长耳兔随机分为五组,分别为对照组、模型组、氨氯地平组、辛伐他汀组及联合用药组, 每组10只。对照组给予普通饲料；模型组及药物组(氨氯地平组、辛伐他汀组及联合用药组)给予高胆固醇饲料, 12周后改为普通饲料12周。药物组中12周后氨氯地平组给予氨氯地平5 mg/(kg· d)；辛伐他汀组给予辛伐他汀2 mg/(kg·d)；联合用药组给予氨氯地平5 mg/(kg·d)+辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃, 自由饮水。

1.3.2 血脂 实验前后禁食, 后耳缘静脉取血, 测HDL-C、LDL-C、TC、TG浓度。

1.3.3 肝脏HDLR表达 抗原修复, 3%H2O2、封闭液孵育,加一抗4℃过夜, 加二抗37℃ 孵育, DAB显色。按Fromowitz阳性细胞半定量分级法［1］观察结果。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 兔血脂水平比较 对照组兔血脂实验前、后比较差异无统计学意义(P＞0.05)。实验前模型组与药物组兔血脂与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。实验末, 模型组兔血浆TC、TG、LDL-C高于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.01)。氨氯地平组TC、TG、LDL-C高于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.01)。辛伐他汀组TC、TG、LDL-C降低, HDL-C升高, 较模型组差异具有统计学意义(P＜0.01)。联合用药组TC、LDL-C、TG降低, HDL-C升高, 较对照组差异有统计学意义(P＜0.05), 较模型组差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 五组兔血浆脂质水平检测指标比较(, mmol/L)

表1 五组兔血浆脂质水平检测指标比较(, mmol/L)

注：与对照组比较,aP＜0.01,cP＜0.05；与模型组比较,bP＜0.01

组别 TC HDL-C LDL-C TG实验前 实验后 实验前 实验后 实验前 实验后 实验前 实验后对照组 1.65±0.40 1.68±0.38 0.87±0.28 0.90±0.25 0.61±0.11 0.60±0.14 0.85±0.26 0.87±0.22模型组 1.63±0.34 9.07±1.86a 0.83±0.13 0.89±0.16 0.64±0.28 7.96±1.78a 0.78±0.24 1.13±0.32a氨氯地平组 1.73±0.33 8.71±1.81a 0.77±0.16 1.07±0.25 0.79±0.19 7.42±1.55a 0.85±0.25 1.13±0.31a辛伐他汀组 1.67±0.24 2.28±0.34b 0.83±0.19 1.19±0.27b 0.68±0.11 0.86±0.27b 2.28±0.34 1.91±0.35b联合用药组 1.73±0.31 2.08±0.45bc 0.99±0.34 0.93±0.30bc 0.77±0.27 0.68±0.11bc 2.08±0.45 1.96±0.48bc

2.2 肝脏HDLR的表达 光镜下见胞浆内棕色颗粒。对照组阳性率90%, 强阳性率10%；模型组阳性率90%, 强阳性率30%, 较对照组增加, 差异具有统计学意义(P＜0.01)；氨氯地平组阳性率100%, 强阳性率40%, 辛伐他汀组阳性率100%,强阳性率30%, 均较模型组增多, 差异有统计学意义(P＜0.05)；联合用药组阳性率100%, 强阳性率50%, 较模型组增多, 差异具有统计学意义(P＜0.01), 与辛伐他汀组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)。

3 讨论

高密度脂蛋白主要在肝脏合成, 是机体胆固醇从肝外周组织逆向转运回肝脏的主要形式, 可能通过抗氧化应激作用、抗炎作用等［2］发挥抗动脉粥样硬化作用。肝内HDLR可能通过促进发生动脉粥样硬化部位胆固醇的流出, 并摄取高密度脂蛋白(HDL)中氧化胆固醇酯以形成保护体系从而发挥预防动脉粥样硬化的作用, 其表达受多种因素的影响［3］。

氨氯地平是常用的二氢吡啶类长效钙通道阻滞剂, 既往研究显示不仅可以平稳、高效的降压, 还可通过改善血管内皮功能来抑制动脉粥样硬化形成, 甚至逆转已形成的动脉粥样硬化, 更加显著的减缓颈总动脉内-中膜的增厚［4］。他汀类药物是作用极强的降胆固醇药物, 有抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移, 改善内皮依赖性血管舒张功能等非调脂作用［5］, 能有效减缓冠状动脉病变进展。Oqihara等［6］大规模临床试验显示, 氨氯地平联合他汀类药物在稳定斑块、治疗稳定性冠心病等方面有协同、叠加作用。

综上所述, 氨氯地平对兔血脂无明显作用, 但可影响肝脏脂蛋白受体表达；辛伐他汀能升高血浆HDL水平, 使兔肝脏HDLR的表达增加。氨氯地平与辛伐他汀联合应用对血脂有与辛伐他汀相似的作用, 但对肝脏脂蛋白受体表达的调节较单药明显, 提示两者联用可以更好的调节脂代谢。

［1］ Fromowitz FB, Viola MV, Chao S, et al.Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol, 1987, 18(12):1268-1275.

［2］ Lusis EJ.Atherosclerosis.Nature, 2000, 407(6801):233-241.

［3］ 付宝才, 杨林海, 李强, 等.脂蛋白受体与动脉粥样硬化相关关系研究进展.医学综述, 2005, 11(3): 208-211.

［4］ 陈良, 张梅, 萧亚伟, 等.超声技术评价美托洛尔和氨氯地平对易损斑块的作用.中华超声影像学杂志, 2007, 16(10):898-901.

［5］ Yamakawa T, Tanaka S, Kamei J, et al.Pitavastatin inhibits vascular smooth muscle cell proliferation by inactivating extracellular signalregulated kinases1/2.J Atheroscler Thromb, 2003, 10(1):37-42.

［6］ Oqihara T, Nakao K, Fukui T, et al.Effects of candesartan compared with amlodipine in hypertensive patients with high cardiovascular risks: candesartan antihypertensive survival evaluation in Japan trial.Hypertension, 2008, 51(2):393-398.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.28.206

2015-04-02］

250013 济南医院(庞栋 王辉)；荣成市人民医院(李晓燕)