正交试验法确定金莲花中总黄酮最佳提取工艺

张黎黎++胡雪芬++王秀丽

摘 要：目的 研究金莲花提取工艺。方法 采用正交试验法对金莲花中总黄酮进行提取，以出膏率和紫外分光光度法测定的总黄酮得率为指标，考察乙醇浓度（A）、回流时间（B、回流次数（C）、料液比（D）4个因素。检测波长为500 nm。结果 优化的金莲花提取条件为A2B1C3D2。结论 采用65%乙醇，料液比为1∶10，回流3次，每次2小时为最佳工艺，其中回流次数为显著性因素。黄酮最高含量为15.74%，最高出膏率为45.72%。

关键词：金莲花 总黄酮 紫外分光光度法 正交试验法

中图分类号：S859 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2015）02（a）-0001-02

金莲花为毛茛科植物金莲花属植物金莲花的干燥花，又名旱金莲、旱地莲、金芙蓉等，为多年生草本植物。在我国金莲花有着悠久的药用历史，史载于清代。主要分布于东北、华北、西北，野生资源十分丰富[1]，具有清热、解毒、抑菌作用。赵学敏所著《本草纲目拾遗》，其谓“金莲花出五台山，又名旱地莲，一名金芙蓉，色深黄，味滑苦，无毒，性寒，治口疮喉肿，伏热牙宣，耳痛目痛，明目，解岚瘴，疔疮，大毒诸风”。可见金莲花药理作用广泛，其临床主要用于治疗上呼吸道感染、咽炎、扁桃腺炎等疾病[2]。金莲花所含成分主要有荭草苷、牡荆苷等黄酮类化学物及Trollioside、2"-O-（2"-methylbutyry1）isoswertisin等有机酸类成分[3]。目前的研究多数认为黄酮类化合物是金莲花主要抗菌消炎的有效活性成分之一，因此高效率地提取金莲花中的黄酮类成分、确定最佳的提取纯化方法，是人们研究的焦点[4]。该文采用正交试验对金莲花进行提取并以芦丁（因芦丁母核与荭草苷相似）为对照品对提取物中总黄酮进行测定，依据黄酮类化合物含量及提取物出膏率确定最佳提取工艺。

1 样品、仪器与药品

1.1 样品

金莲花采自大兴安岭地区，经大兴安岭药检所鉴定确定为正品金莲花。

1.2 样品

UV-260紫外可见分光光度计（日本岛津）；SC202-00型电热恒温干燥器（上海医疗器械五厂）；超级恒温水浴锅（江苏金坛环宇科学仪器厂）JPCQ0628型超声波清洗机（超声波频率28 kHz，武汉嘉鹏电子有限公司）。

1.3 标准品

芦丁购自中国药品生物制品鉴定所。

1.4 药品

所用试剂亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝均为分析纯。

2 提取方法

2.1 标准曲线的制定

2.1.1 标准液的配制

精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准品13.0 mg，置于100 mL容量瓶中，加30%乙醇适量，微热，使芦丁溶解，冷却后用30%乙醇定容至刻度，摇匀，备用。

2.1.2 芦丁标准曲线的绘制

精密吸取芦丁的标准液0、0.50、0.75、1.00、1.5、2.0 mL置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇补充至5 mL，再分别加入5%NaNO2溶液0.3 mL、摇匀放置6 min，再加入10%Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀放置6 min，加入4%NaOH溶液2 mL，此时溶液呈红色，摇匀，加入30%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以0号为空白，以500 nm波长处测定吸光度值[5]，得数据图1所示。

由图1得标准曲线方程为：Y=2.5198X

-0.0049；相关系数r=0.9998，标准品在0～0.26 mg/mL范围内呈良好线性关系。可按标准曲线法进行定量分析。

2.1.3 稳定性

用与绘制吸收曲线配制相同的方法配制的样品进行稳定性实验，结果表明：样品放置30 min，测得其吸光度值几乎不变。

2.2 正交试验工艺优化

2.2.1 因素水平表的制定

以乙醇浓度、回流时间、回流次数、料液比为考察因素，每个因素设定三水平安排正交试验，见表1。

根据表1因素水平表制定L9（34）正交表，进行9次试验，为保证实验重现性，每次实验平行3次，确定最佳提取工艺。

2.2.2 样品液的制备

精密称取100 ℃恒温干燥至恒重的金莲花药材5 g，用万能粉碎机打成20目左右的粗粉，置于圆底烧瓶中，取适量所用浓度的乙醇溶液浸泡1 h，按规定时间回流，过滤得提取液。将提取液浓缩至50 mL，取1 mL，置50 mL容量瓶中，定容，取1 mL按照2.1.1方法操作，得数据如表2所示。

3 结果与讨论

由表3可以看出，实验4的黄酮含量最高，经方差分析得出回流次数影响最显著，最佳工艺为A2B1C3D2，即采用65%乙醇，料液比为1∶10，回流3次，每次2小时为最佳工艺，其中回流次数为显著性因素。在本实验中黄酮含量最高可达15.74%，远高于药典标准；同时在9次试验中，煎煮时间对出膏率影响最大，最高可达45.72，也高于药典标准。通过本实验可为金莲花总黄酮最佳提取工艺提供理论依据，同时说明大兴安岭地区野生金莲花总黄酮含量高，药效佳，大兴安岭地区野生金莲花具有巨大的开发价值。

参考文献

[1] 北京师范大学生物系.北京植物志（下册）[M].北京出版社，1993：224.

[2] 王平.金莲花冲剂治疗上呼吸道感染疗效观察[J].中成药，1996，18（3）：50.

[3] 李胜银，蔡金娜，刘江云等.金莲花化学成分研究[J].亚太传统医药，2008，4（7）：18.

[4] 王建萍，陈治宇.不同提取纯化工艺对金莲花总黄酮含量的影响[J].承德医学院学报，2008，25（4）：356.

[5] 谭晓虹，方秀梅.金莲花中总黄酮含量的测定[J].张家口医学院学报，2002，19（6）：37.endprint