飞燕草“北极光”无菌播种技术研究

张左悦　纪力　熊亚琴

摘 要：飞燕草“北极光”的商品化栽培通常采用播种繁殖，但存在出苗迟缓、增殖率低，且种子繁殖的后代易发生分离等问题。该试验通过在培养基中添加外源激素对不同处理的种子进行播种试验，为其进一步进行快速繁殖技术研究提供前提保障。

关键词：飞燕草“北极光” 无菌播种 种子灭菌条件

中图分类号：S79 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2015）12（a）-0254-03

飞燕草为毛茛科飞燕草属的多年生草本植物，原产于南欧之北半球温带区。盛开时宛如一只只燕子，因而得名。F1代“北极光”（Delphinium AuroraF1）是飞燕草因其柔和的花色和整齐的花序成为高档切花市场的宠儿。以往在对飞燕草属花卉繁殖的研究中，主要以播种、扦插和分株3种方式。而商品化栽培通常采用播种繁殖，但出苗迟缓，增殖率低，且有种子繁殖后代发生分离等问题。且该试验引进的飞燕草“北极光”品种由于种子价格较高，所以，并不适合这种繁殖方式。因此，实生苗的无菌培养成为工厂化生产该品种飞燕草的一条重要途径，而这方面的报道也较少。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验中所用飞燕草“北极光”种子于2014年购于南京虹彩花卉种苗公司，是日本TAKII的种子。

1.2 试验方法

1.2.1 无菌播种技术研究

将飞燕草“北极光”的种子在流水中冲洗浸泡2 h，备用。采用L9（32）2因素3水平的全组合正交试验，在无菌条件下[1，2]，先用75%酒精分别浸泡15 s（A1）、30s（A2）、45s（A3），无菌水冲洗3～4次，然后用加了2滴吐温-80的0.1%升汞溶液分别浸泡2 min（B1）、4min（B2）、6min（B3），无菌水冲洗7～8次，重复3次。在整个灭菌过程中可稍许震荡，让种子得到充分地灭菌以及彻底地清洗。因王金发等利用大花飞燕草（Delphinium grandiflorum）种子在1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L[3]上播种，该试验通过对比不同灭菌处理的种子在1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L（单位：下同）培养基上的萌发情况，来统计其污染率及出苗率，10天统计污染率，30天统计出苗率。

1.2.2 不同激素对切段种子脱分化能力的研究

将飞燕草“北极光”的种子用最佳灭菌方式进行处理，而后在超净工作台上对无菌种子进行横向切成两段处理，然后再分别接入到含有不同激素的培养基上（表2）进行脱分化试验。重复3次。

2 结果与分析

2.1 种子灭菌条件的研究

从表3可看出正交组合9个处理中，以处理2（A1B2），即用75%酒精处理15 s，再用0.1%升汞处理4 min。得到的初代培养外植体污染数最少，无菌率达到96.67%；且其出苗率也较高，达到80%，是所有处理中最高值。

2.2 不同激素对切段种子脱分化能力的研究

从表4可看出，在一定范围内，愈伤组织的形成会随着激素的浓度增加而增加。在该试验所设计的浓度梯度中，在含有1/2MS+6-BA 0.5+IAA 0.05的培养基上，愈伤形成数量较少，诱导率较低（33.3%），生长速度也较缓慢，形成的愈伤透明成水样化（图1）。随着激素浓度的增加，切段种子形成的愈伤组织逐渐增多，且类型逐渐转为半透明的瘤状愈伤组织（图2），当激素组合为1/2MS+6-BA 2.0+IAA 0.20时，形成大量半透明的瘤状愈伤组织，诱导率高达90%。继续增加激素浓度，在激素组合为1/2MS+6-BA 2.5+IAA 0.25时，虽然诱导率仍可保持在75%以上，但形成的愈伤组织为浅绿色且较致密和结实（图3）。在适合的分化培养基上，水样化的透明的愈伤组织分化出的芽数较少（图4）；而半透明的瘤状愈伤组织均能分化出不定芽，且数量较多（图5）；致密、结实的愈伤组织虽也可100%分化出不定芽，但平均每个外植体分化出的芽数较半透明的瘤状愈伤组织要少，不过，长出的小苗叶色更浓绿、植株更健壮（图6）。

3 讨论

飞燕草“北极光”因它柔和的花色和整齐的花序，成为鲜切花市场的新宠，具有较高的观赏价值和经济价值。但由于其种子价格较贵，且在自然播种繁殖过程中性状易发生分离的缺点，使得离体繁殖技术成为其产业化生产实现的必要前提。但迄今为止，国内外尚未有其组培成功的报道。我们从现有的外植体资源即飞燕草“北极光”的种子作为主要试验材料，进行了广泛的试验和探索，从种子灭菌到愈伤形成以及出芽分化，为摸索出一整套较为成功的飞燕草“北极光”的组织培养方法奠定了基础。

参考文献

[1] 朱广廉.植物组织培养中外植体灭菌[J].植物生理学通讯，1996，32（6）：444-449.

[2] 朱广廉.植物组织培养中灭菌和无菌操作的几个问题[J].植物生理学通讯，1995，31（5）：375-384.

[3] 王金发，何小玲，何炎明.大花飞燕草的组织培养及再生体系建立[J].热带亚热带植物学报，2000，8（4）：315-318.