1728例手足口病病原学检测结果分析及临床意义

谢海珍，祝晓静，陆红云

(宜春市疾病预防控制中心检验科，江西 宜 春336000)

手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)属丙类传染病，由多种肠道病毒引起的常见传染病，病原体20多种。主要病原体为肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16),以5岁以下儿童发病为主。临床特征为发热和手、足、口腔等部位皮疹或疱疹，少数患儿可出现中枢神经、呼吸系统损害，引发脑炎、急性弛缓性麻痹、脑水肿和心肌炎等，病情严重者可致死亡[1，2]。为掌握宜春市手足口病的流行规律，为制定有效的防控措施提供依据，对2011年1月-2013年12月宜春市手足口病病原学进行监测，并对结果进行统计分析报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本来源 辖区各县、市、区疾病预防控制中心负责采集、送检及上报患者基本信息到市疾控中心手足口PCR检测实验室。标本采集方法、储存、运送、处理按中华人民共和国卫生部《手足口病预防控制指南(2009年版)》执行。标本是宜春市各县、市、区报告的HFMD病例的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液。

1.2 方法与试剂 采用德国QIAGEN公司提供的试剂对RNA进行核酸提取,采用广州中山大学达安基因股份有限公司提供的肠道通用、EV71和柯萨奇病毒A16型Real-Time PCR(PCR-荧光探针法,PCR-Fluorescence Probing)试剂盒进行检测。

1.2.1 标本处理 咽拭和疱疹液直接提取核酸。粪便和肛拭子加入相应Hank’s液振荡混匀制成悬液，2000r/min×5min,离心吸取上清液进行核酸提取。

1.2.2 病毒RNA提取 按照Viral RNA mimi Ex-traction Kit操作说明提取病毒RNA，提取RNA立即进行逆转录。

1.2.3 Real-Time PCR对肠道病毒通用型、肠道病毒71型、肠道病毒A组16型鉴别诊断。提取的病毒RNA按照达安基因试剂公司提供的试剂盒说明配置反应体系，经45℃反转录25min，94℃变性3min,再按 95℃×15s→55℃×45s，循环 40 次。 反应体系为25μl。荧光通道检测选用FAM通道。

1.2.6 结果判断 扩增曲线呈典型S型扩增曲线且Ct值≤34.8判为阳性，无典型S型扩增曲线且Ct值＞34.8判为阴性。

1.3 统计处理 采用SPSS17统计软件。率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 手足口病例标本检测阳性率及构成 2011年1月-2013年12月共检测手足口病例标本1728例，检出EV71型、CA16型以及EV通用型阳性数共计1062例，阳性率为61.5%，各型阳性率见表1。 三年共计检出EV71型413例，阳性检出率为23.9%，阳性构成比为 38.9%(413/1062)；CA16型263例，阳性检出率为15.2%，阳性构成比为24.8%(263/1062)；EV通用型 386例，阳性检出率为22.3%，阳性构成比为36.3%(386/1062)。

表1 手足口病例标本检测阳性率[n(%)]

2.2 手足口病例标本检测重症和监测病例情况分析 1728份手足口病病例中，重症标本222例，阳性数148例，阳性率为66.7%，监测标本1506例，阳性数912例，阳性率为60.7%。其中2011年检测重症病例218例，2012年4例，2013年无重症病例。重症病例标本以EV71阳性为主,非重症病例标本中EV71、CA16及其他肠道病毒阳性率相近。具体检测情况见表2。

表2 手足口病检测重症和监测病例情况分析[n(%)]

2.3 疑似手足口病不同类型标本分布 1062例阳性病例中，以咽拭子检测数最多，粪便、肛拭子、疱疹液、咽拭子的阳性检出率分别为83.3%、75.0%、65.7%、59.9%。经SPSS统计软件χ2检验，各种标本的检出率差别无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 手足口病例不同类型标本分布标本类型 检测数 阳性数 阳性率(%)粪便肛拭子疱疹液咽拭子合计64 53 431 1287 1728 283 771 1062 83.3 75.0 65.7 59.9 61.5

2.4 手足口病病原体核酸检测阳性病例性别分布1062例阳性病例中，男性672例，占63.3%(672/1062)，女性 390例，占 36.7%(390/1062)。男性患者明显高于女性。但是经SPSS统计软件χ2检验，EV71、CA16及其它通用型肠道病毒的检出率在男女性别间的差别无统计学意义(P>0.05)，具体性别分布见表4。

表4 手足口核酸检测阳性病例性别分布[n(%)]

2.5 手足口病原体核酸检测阳性病例年龄分布阳性病例中，年龄最小的2个月，最大的48岁，以1岁~3岁以下幼儿咽拭子标本的阳性数最多，占总数的82.7%(878/1062)。具体年龄分布见表5。

表5 不同年龄患者肠道病毒的检出情况[n(%)]

3 讨论

宜春市自2011年1月至2013年12月，收到手足口病标本1728例，检出阳性数1062例，阳性率为61.5%，这与周边地市比较接近[3]，宜春市从2011年到2012年手足口病例出现小幅上升，但到2013年明显回落；EV71阳性率差异明显,从2011年的41.1%降到2013年的4.7%，EV71感染率呈逐年下降趋势。在1062例阳性病例中，有386例为既非EV71也非CA16的其它肠道病毒引起。2011年广州市HFMD病原谱分析也发现，除EV71和CA16外，广州市存在CA6等多种肠道病毒，这些肠道病毒也可引起HFMD的流行[4]，因此建立多种HFMD病原谱监测系统对防控HFMD有重要意义。重症病例多由EV71型引起，与报道一致[5-6]，重症病例发病人数在逐年降低。非重症病例标本中EV71、CA16及其他肠道病毒阳性检出率相近。手足口病例标本中以粪便检出率最高，但各种标本的检出率差别无统计学意义。由于粪便标本较难采集[7],特别是发病人数较多的暴发疫情,标本量的不足往往不能真实反映疫情的流行病学信息。而咽拭子标本的采集不但简便易行,且从理论上讲,咽部是手足口病相关病毒最早感染繁殖的部分,能够最早采集到病毒[8]，所以通常会以咽拭子标本为主。男性患者明显高于女性，可能是男孩好动。但病原体的各种型别分布在两性间无差异。0~5岁的儿童是手足口病的高发人群，以1岁~3岁年龄组最为常见。这可能与该年龄段血清保护性抗体和免疫力相对较低，而幼托机构儿童聚集性强，幼儿本身卫生防护意识较差，手足口病相互传染性更大有关[9]。

2012年手足口病发病数、重症数和死亡数较2011年同期上升明显。卫生部要求各地相关部门进一步做好手足口病等重点传染病防控工作。2013年我市手足口病也得到了很好的控制。但是手足口病尚无安全有效的疫苗进行预防，发病以后无特效治疗药物，主要采用综合性的防治措施。因此，对手足口病原体的流行病学分析有助于做好手足口病的防控工作。加强对公共场所及托幼机构卫生的监测力度，实行早发现、早诊断、早报告、早隔离治疗、早处理疫点[10]，坚持加强手足口病的疫情监测与标本检测,重点加强暴发疫情与重症病例的监测,对可能出现的聚集性发病异常信息及时组织核实、排查、全面落实应急处理措施,从而掌握其流行规律，为疾控部门的干预和决策提供及时而准确的实验室依据。充分利用各种媒体,广泛开展手足口病防治知识的宣传教育。做好个人生活卫生如勤洗手等，防止病从口入。提高居民的防控意识和水平，以便更好地预防和控制手足口的流行和暴发。

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