肠道病毒71型IgM抗体在手足口病诊断中的临床应用价值研究

潘锦华，罗建辉，杨国清，卢楷华，许洁明

(花都区新华社区卫生服务中心，广东 广 州510800)

手足口病是一种由肠道病毒感染所致急性传染性疾病，多见于婴幼儿，患儿主要表现为发热以及手足口等部位疱疹，部分患者可发生无菌性脑膜炎、肺水肿、心肌炎以及呼吸衰竭等严重并发症而致死[1，2]。引发手足口病的肠道病毒种类较多，主要有肠道病毒71型 (EV71)以及柯萨奇病毒A16型(COA16)两种类型。其中，EV71感染是导致手足口病患儿死亡最主要的原因之一[3]。早期检测EV71感染、尽早诊断、隔离和食疗是改善临床预后的关键。ELISA法检查具有可操作性强、快速、准确等优点，在实验室血清病毒抗体检测中应用广泛[4]。本研究分析了EV71 IgM抗体检测对于手足口病早期诊断的价值，以为临床工作提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2012年1月至2014年5月期间，我院收治的手足口病患者41例，均符合《手足口病诊疗指南(2012年版)》[5]中关于手足口病的诊断标准，均经临床检查确诊。其中，男25例，女16例，年龄在6个月~10岁之间，平均为(2.5±0.9)岁；患儿均具有出疹及发热等症状，患儿家属均签署了知情同意书。

1.2方法 所有患儿均在入院后第1~6d每日清晨采集空腹未抗凝外周静脉血2ml以及第6d咽拭子标本。血液标本经离心分离以后，置于-80℃条件下保存，用ELISA法进行EV71 IgM抗体检测；咽拭子标本采用Real time RT-PCR检测特异性核酸和EV通用型核酸。所有操作均严格按照试剂说明书进行。

1.3 统计学分析 计算两组阳性率，采用四格表进行资料统计，数据经统计学软件SPSS18.0进行分析，以率(%)表示计数资料，组间比较经χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IgM抗体阳性率统计 本组患儿入院后第1d表现出抗体转阳，阳性率为56.1%(23/41)，入院第2d累计阳性率为58.5%(24/41)，入院第4d累计阳性率为78.0%(32/41)，入院第5d累计阳性率为92.7%(38/41)，入院第6d累积阳性率为92.7%(38/41)。患儿入院后抗体累计转阳率呈逐渐升高的趋势，并在发病第5d达到最高水平，第6d趋于平衡。

2.2 稳定期EV71 IgM抗体与核酸阳性率比较ELISA检测的EV71 IgM抗体阳性率累计为92.7%(38/41)，而Real time RT-PCR检测EV71的特异性核酸阳性率仅为73.2%(30/41)，前者显著高于后者(χ2=4.136，P<0.05)，详见表 1。

表1 Real time RT-PCR检测EV71特异性核酸与ELISA法检测EV71 IgM抗体比较(例)

2.3 Real time RT-PCR检测EV通用型核酸与ELISA法检测 EV 71 IgM抗体比较 Real time RT-PCR检测EV通用型核酸阳性率与ELISA法检测EV 71 IgM抗体阳性率依次为78.0%(32/41)和92.7%(38/41)，两组对比差异，无统计学意义(χ2=2.465，P>0.05)，详见表 2。

表2 Real time RT-PCR检测EV通用型核酸与ELISA法检测EV 71 IgM抗体比较(例)

3 讨论

EV71是一种小RNA病毒科肠道病毒，感染后存在2~7d左右的潜伏期，感染初期具有针对该类型病毒的免疫能力，故存在一定的隐性感染率，加之EV71的感染性极强，能够在短期内引起大范围流行，导致病情难以控制，给临床诊断与治疗造成了一定的困难[6，7]。早期检查EV71感染情况，及早筛查出隐性EV71感染对于改善临床预后具有重要意义。传统诊断手足口病的方法为分离和培养病毒，但操作较为繁琐，且假阴性率较高，影响临床诊断与治疗。有学者[8]将EV71的VPI基因原核表达作为抗原进行EV71感染的诊断，结果显示，以VPI蛋白作为目标检测抗原，不仅能够监测EV71感染患儿急性血清IgM抗体，同时还可检测到曾经感染EV71患儿的血清中分布的IgG抗体，且其余COA16抗血清之间无交叉免疫反应[9]。但到目前为止，国内尚缺乏针对人抗-EV71 VPI的高敏感性以及特异性检测试剂盒。FQ-PCR检测对于EV71感染具有较高的敏感性以及特异性，但需要应用较为昂贵的检测仪器，且对于实验室的条件要求比较高，临床应用受到限制。实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术是目前临床诊断EV71感染最为常用的方法之一，操作较为简便，但具有较高的假阳性率以及假阴性率，对于临床诊断与治疗均具有一定的影响。应用ELISA法检测血清EV71 IgM抗体对于现症感染的检查具有重要意义，且操作简便，对于检测设备的要求不高，适合在基层医院推广。

本研究应用ELISA法检测了41例手足口病患儿的血清EV71 IgM抗体以及咽拭子中EV与EV71核酸阳性情况，自发病起6d内进行监测。研究结果显示，患儿在发病首日即可检出EV71 IgM抗体，且阳性率较高，随着病情的进展，EV71 IgM抗体阳性率呈现快速增长趋势，在发病第5d即已达到峰值。导致EV71 IgM抗体阳性检出时间差异的原因可能是由于患儿个体差异，免疫功能差异致抗体产生的时间不同所致。结果显示，应用ELISA检测的EV71 IgM抗体阳性率累计达92.7%，相比于同期用Real time RT-PCR检测EV71的特异性核酸阳性率73.2%显著提高。提示采用ELISA法检测EV71 IgM抗体对于手足口病的诊断具有更高的灵敏度以及准确性。此外，ELISA法操作较为简便，通常4h左右即可获得判读结果，相比于PCR法更加节约成本以及人力，更具应用优势。

综上所述，手足口病发病早期血清中即存在EV71 IgM抗体，应用ELISA法检测血清EV71 IgM抗体对于手足口病的早期诊断具有重要价值，且操作简便、结果判读快速、成本低廉，具有较高的临床应用价值，值得推广应用。

[1]杜阳光,杨晋川,晏嘉璐,等.血清中EV71型IgM抗体检测对手足口病诊断的意义[J].中华全科医学,2011,9(10):1574-1575.

[2]李金明,熊德琴,齐晓彤,等.实时荧光定量PCR在手足口病病原体检测中的应用[J].实验与检验医学,2011,29(2):129-130.

[3]魏贯峰,周素华,胡强,等.肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型抗体筛查在手足口病中的应用及相关性 [J].中国医师进修杂志,2012,35(6):20-22.

[4]杜昆.不同方法检测肠道病毒71型IgM抗体在手足口病诊断中的意义[J].检验医学与临床,2014,11(3):328-329.

[5]商新梅,商慧,周安仁,等.982例手足口病患者EV71-IgM抗体检测结果分析[J].检验医学与临床,2013,10(9):1169-1171.

[6]黄建国,吴立文,骆志辉,等.手足口病肠道病毒EV71和CoxA16感染的检测分析[J].实验与检验医学,2011,29(3):328-329.

[7]Zhang A,Zhang M,Zhang H,et al.Development of a dot-immunoenzyme filtration assay for the detection of enterovirus 71 antigen in human serum via immunoglobulin M[J].J Int Med Res,2012,40(3):1122-1129.

[8]Chen S,Yang Y,Yan X,et al.Influence of vitamin A status on the antiviral immunity of children with hand,foot and mouth disease[J].Clin Nutr,2012,31(4):543-548.

[9]商新梅,商慧,周安仁,等.982例手足口病患者EV71-IgM抗体检测结果分析[J].检验医学与临床,2013,10(9):1169-1171.