一种奥沙拉秦钠胶囊苯胺杂质考察方法

朱菊红 周宏艳 周东方 王 菁

一种奥沙拉秦钠胶囊苯胺杂质考察方法

朱菊红 周宏艳 周东方 王 菁

目的 建立奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质考察方法。方法 采用高效液相色谱（HPLC）法。色谱柱为Agilent C18（4.6×250 mm, 5 μm）, 流动相为甲醇：混合溶剂（含1.41 g/L磷酸二氢钾和0.47 g/L磷酸磷酸氢二钠二水化合物的混合溶液并用42 g/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0）15∶85, 流速1.0 ml/min, 检测波长为205 nm, 柱温为40℃, 进样量50 μl。结果 苯胺峰与相邻峰能够分离, 检测限为2.78×10-4μg。结论 本法可用于奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质考察。

高效液相色谱法；奥沙拉秦钠；苯胺杂质

奥沙拉秦钠胶囊为水杨酸类药物, 通过偶氮键连接两分子5-氨基水杨酸, 到达结肠部位后其偶氮桥在细菌作用下断裂, 分解为二分子5-氨基水杨酸并作用于结肠炎症黏膜,抑制前列腺素合成, 抑制炎症介质白三烯的形成, 降低肠壁细胞膜的通透性, 减轻肠黏膜水肿, 用于轻中度急慢性溃疡性结肠炎的治疗［1］。EP7.0美沙拉秦原料质量标准中对苯胺杂质检查控制, 苯胺杂质对人体健康能产生高铁血红蛋白血症、溶血性贫血和肝、肾损害, 由于奥沙拉秦钠含有二分子美沙拉秦［2］, 因此对苯胺杂质进行考察、控制。本文参考EP7.0美沙拉秦原料质量标准项下杂质K检查方法［3］, 建立了HPLC法测定奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质的含量, 方法专属性、灵敏度、耐用性等符合要求, 可以满足奥沙拉秦钠胶囊中苯胺杂质检查。

1 材料

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪（包括VWD检测器、G1311C自动调配泵、G1329B标准自动进样器、G1316A可调柱温恒温箱、Agilent色谱化学工作站等）；电子分析天平。

1.2 药品与试剂 苯胺对照品（99%, Aladdin Industrial Corporation）；奥沙拉秦钠胶囊（批号：110203、110206、110209）；甲醇（色谱级, 美国Tedia有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择和系统适用性试验 色谱柱：Agilent C18（4.6×250 mm, 5 μm）；流动相：甲醇：混合溶剂（含1.41 g/L磷酸二氢钾和0.47 g/L磷酸磷酸氢二钠二水化合物的混合溶液并用42 g/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0）15∶85；流速1.0 ml/min, 检测波长为205 nm；柱温为40℃；取苯胺盐酸盐对照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流动相溶解并稀释至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度, 作为对照品溶液, 进样量50 μl。对照溶液主峰信噪比至少为10。

2.2 有关物质检查 精密称取装量差异项下内容物的细粉适量（约40 mg）, 置于20 ml容量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液。取苯胺盐酸盐对照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流动相溶解并稀释至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度,摇匀过滤即得。

精密量取上述两种溶液各50 μl, 分别注入液相色谱仪。供试品中苯胺杂质峰不得大于对照品溶液中苯胺峰面积（10 ppm）。

2.3 方法的专属性 取苯胺盐酸盐对照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流动相溶解并稀释至刻度, 吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度, 吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度, 作为苯胺定位用溶液。精密量取50 μl, 注入液相色谱仪。

取奥沙拉秦钠胶囊装量差异项下内容物的细粉适量（约40 mg）, 精密称定, 置20 ml容量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度, 过滤, 取续滤液作为供试品溶液。精密量取50 μl,注入液相色谱仪。

图1 高效液相色谱图A：对照品；B供试品

在苯胺对照品溶液和奥沙拉秦钠样品色谱图中, 苯胺峰保留时间位置处无干扰峰。

2.4 检测限 对照品溶液：取本胺盐酸盐对照品27.8 mg,至100 ml容量瓶, 用流动相溶解并稀释至刻度, 再吸取0.2 ml至20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流动相稀释至刻度。精密量取对照品溶液10 μl进样。性噪比3时, 检测限［4］为2.78×10-4μg。

2.5 强制破坏试验

2.5.1 酸破坏 取奥沙拉秦钠样品约40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 滴加7 mol/L的盐酸5滴, 再加10 ml流动相溶解,室温下放置2 h后, 用2 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至中性,后加流动相稀释至刻度。

2.5.2 碱破坏 取奥沙拉秦钠样品约40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 滴加2 mol/L的氢氧化钠溶液10滴, 再加10 ml流动相溶解, 室温下放置2 h后, 用2 mol/L的盐酸调节pH至中性, 后加流动相稀释至刻度。

2.5.3 高温破坏 取奥沙拉秦钠样品约40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度, 后放置水浴中3 h。

2.5.4 光照破坏 取奥沙拉秦钠样品约40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度, 在光照（4500±500）Lx条件放置2 d。

2.5.5 氧化破坏 取奥沙拉秦钠样品约40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加入30%双氧水1 ml, 再加10 ml流动相溶解, 室温下放置2 h后, 后加流动相稀释至刻度。

分别取上述溶液各50 μl注入液相色谱仪, 均未检出苯胺杂质, 说明奥沙拉秦钠较为稳定, 在较为剧烈条件下未降解产生苯胺杂质。

2.6 溶液稳定性 取上述样品溶液, 分别于0、2、4、6、8 h进样50 μl注入液相色谱仪, 记录色谱图, 结果见表1。

表1 溶液稳定性试验结果

2.7 耐用性 将色谱条件中的参数作适度变化, 采用不同色谱柱、不同柱温、不同流速, 考察对测定结果的影响情况,性噪比均能达到10, 方法耐用性良好。

2.8 有关物质检查结果 对某制药企业111203、111206、111209三批按“2.2 有关物质检查”方法检查, 均未检出苯胺杂质。

3 小结

奥沙拉秦钠样品在酸、碱、高温、光照、氧化条件下破坏,均未检出苯胺杂质。EP7.0奥沙拉秦钠原料质量标准项下未将苯胺订入标准。但苯胺作为特定杂质, 奥沙拉秦钠含有美沙拉秦结构, 本法可作为奥沙拉秦钠可能含有苯胺杂质检查的检查方法。

为使奥沙拉秦钠在色谱系统中尽快洗脱, 可以在苯胺峰保留时间之后, 设定较高比例甲醇, 对奥沙拉秦钠等相关成分洗脱。

［1］ 范竹萍, 曾民德.国产奥沙拉秦钠胶囊治疗溃疡性结肠炎149例.中国临床药理学与治疗学, 1999, 4（1）:12-16.

［2］ 陈龙珠, 陈珏.奥沙拉秦钠胶囊溶出度测定.西北药学杂志, 2000, 15（3）:168.

［3］ 曾国明.柳氮磺胺吡啶片与奥沙拉秦钠胶囊对溃疡性结肠炎的治疗效果比较.医学信息旬刊, 2011, 24（7）:196-197.

［4］ 石晶波.奥沙拉秦钠胶囊和柳氮磺胺吡啶片在治疗溃疡性结肠炎中的疗效比较.吉林医学, 2012, 33（18）:168.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.10.192

2014-12-17］

323000 浙江众益制药股份有限公司（朱菊红周宏艳 周东方）；平邑县食品药品监督管理局（王菁）