香卿止痛喷雾剂镇痛抗炎作用的药效学研究

武 涛，刘文雅，王 争，王曙东

0 引 言

香卿止痛喷雾剂(简称XQ 喷雾剂)是拟按中药五类研究的新药，由红茴香、徐长卿组成，具有止痛、消肿、抗炎等功能，可用于风湿性关节炎，跌打损伤，湿疹、皮炎、带状泡疹等皮肤病的治疗［1-3］。红茴香功能散瘀止痛，祛风除湿，用于风寒湿痹、关节痛、腰腿痛、跌打伤痛等。徐长卿功能祛风化湿，止痛止痒，用于风湿痹痛、胃痛胀满、牙痛、腰痛、跌打损伤、荨麻疹、湿疹等。本研究根据其功能主治，进行了镇痛、抗炎药效试验，为研制复方镇痛制剂及其临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物与试剂 XQ 喷雾剂(南京军区南京总医院制剂科自制，0.1 g/mL，批号:20120802)，云南白药气雾剂(85 g/瓶，云南白药集团有限公司，批号:2012006)，角叉菜胶(Sigma 公司，批号:9000-07-1)，二甲苯(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司，批号:050403)。

1.1.2 动物 健康雄性SPF 级大鼠，180 ～220 g，60 只，实验动物许可证号:SYXK(苏)2010-0027;健康SPF 级小鼠，雄性120 只，雌性60 只，18 ～22 g，由南京江宁青龙山动物养殖场提供，动物合格证号:SCXK(苏)2010-0026。动物饲养环境:温度(22±2)℃，湿度50%～60%，自由取食饮水，每日补充常规饲料，饮水为高温高压灭菌处理。

1.1.3 仪器 YLS-7B 大鼠足跖容积测量仪(济南益延科技发展有限公司)，YSD-4G 型药理生理多用仪(安徽蚌埠医学院无线电二厂)，ZH-YLS-3E 型电子鼠尾压痛仪(淮北正华生物仪器设备有限公司)，YLS-Q4 型鼠耳打孔器(济南益延科技发展有限公司)，FA1104N 型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 XQ 喷雾剂的镇痛作用试验 ①XQ 喷雾剂对电刺激致痛痛阈值的影响，小鼠置多用仪中(设置参数:连续B 脉冲、时间0.5 s、频率8Hz)，调节电压输出钮，记录小鼠发出第1 声嘶叫的电压值，作为给药前痛阈值［4-5］。随机挑选60 只小鼠，雌雄各半，分成6 组(n=10)，即空白A 组(等体积0.5%CMC-Na 溶液)、云南白药A 组(5 mL/足/kg)、XQ 喷雾剂低剂量A 组(0.125 g/足/kg)、XQ 喷雾剂中剂量A 组(0.25 g/足/kg)以及XQ 喷雾剂高剂量A 组(0.5 g/足/kg)。用微量注射器将药物涂抹于小鼠足部(仪器通过足部导电)，5 mL/足/kg，四足均涂上药物。分别于给药后15、30 min 测定出现小鼠尖叫的动物数和未尖叫的动物数(即镇痛动物数)，并计算镇痛百分率，公式如下:

镇痛百分率=［(镇痛动物数/动物数)×100%］

电压由低到高，测定小鼠出现第1 声尖叫的痛阈值(测2 次，每次间隔1 min，取均值)，计算Δ痛阈，公式如下:

Δ 痛阈=药后痛阈值-药前痛阈值

②XQ 喷雾剂对小鼠尾压痛痛阈值的影响，小鼠尾置压痛仪操作台上，施压时以引起小鼠嘶叫的最小压力值作为痛阈值，连测2 次，取平均值作为对照值［6］。随机挑选60 只小鼠，雌雄各半，分成6 组(n=10)，即空白B 组(等体积0.5%CMC-Na 溶液)、云南白药B 组(5 mL/kg)、XQ 喷雾剂低剂量B组(0.125 g/kg)、XQ 喷雾剂中剂量B 组(0.25 g/kg)、XQ 喷雾剂高剂量B 组(0.5 g/kg)。给药时用微量注射器将药物涂抹于小鼠尾部受压点，5 mL/kg，测定给药后15 min、30 min 痛阈值，计算Δ 痛阈。

1.2.2 XQ 喷雾剂的抗炎作用试验 ①对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响，随机挑选雄性小鼠，分为6组(n=10)，即空白C 组(等体积0.5%CMC-Na 溶液)、云南白药C 组(5 mL/kg)、XQ 喷雾剂低剂量C组(0.125 g/kg)、XQ 喷雾剂中剂量C 组(0.25 g/kg)、XQ 喷雾剂高剂量C 组(0.5 g/kg)。给药时用微量注射器将药物涂抹于小鼠左右耳廓，5 mL/kg。耳廓给药30 min 后，利用微量注射器将0.05 mL 二甲苯分别滴于右耳两侧，保证所滴位置一致，左耳作对照。按文献［7］方法求左右耳片重量之差作为肿胀度，与空白C 组比较组间差异。②XQ 喷雾剂对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响，取雄性大鼠，分为6 组(n=10)，即空白D 组(等体积0.5%CMC-Na溶液)、云南白药D 组(1 mL/kg)、XQ 喷雾剂低剂量D 组(0.125 g/kg)、XQ 喷雾剂中剂量D 组(0.25 g/kg)、XQ 喷雾剂高剂量D 组(0.5 g/kg)。于右后足踝关节处标记，利用足跖容积测量仪先测大鼠正常右后足跖体积。利用微量注射器将药物涂抹于右后足跖部，1 mL/kg［8］。足趾给药30 min 后，每只大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL，并于给角叉菜胶后30、60、120、240、360 min 再测大鼠右后足跖体积(mL)，并计算肿胀度，公式如下:

足跖肿胀度=给角叉菜胶后不同时间足跖体积

-给角叉菜胶前同侧足跖体积

1.3 统计学分析 采用SPSS 18.0 统计软件进行方差分析，实验数据以均数±标准差()表示，以P ≤0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 XQ 喷雾剂的镇痛作用试验

2.1.1 XQ 喷雾剂对电刺激致痛痛阈值的影响 与空白A 组比较，XQ 喷雾剂中、高剂量A 组，云南白药A 组对电刺激致痛痛阈值有显著的提高作用，在给药后15 min 和30 min 均能显著提高小鼠镇痛百分率(P ＜0.05)。见表1。与云南白药A 组比较，XQ 喷雾剂中、高剂量A 组致痛痛阈值差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表2。

表1 XQ 喷雾剂对电刺激镇痛百分率的影响(n=10)Table 1 Effects of xiangqingzhitong spray for analgesia percentage in electrical stimulation test(n=10)

2.1.2 XQ 喷雾剂对小鼠尾压痛痛阈值的影响 与空白B 组比较，XQ 喷雾剂高剂量B 组、于给药后15 min、30 min 均能显著提高小鼠尾压痛阈值，差异有统计学意义(P ＜0.05)。XQ 喷雾剂高剂量B 组对小鼠尾压痛阈值高于云南白药B 组(P ＜0.01)。见表3。

2.2 XQ 喷雾剂的抗炎作用试验

2.2.1 XQ 喷雾剂对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 XQ 喷雾剂中剂量C 组小鼠耳廓肿胀度［(4.41±4.55)mg］较空白C 组小鼠［(9.15±3.94)mg］减轻(P ＜0.05);云南白药C 组、XQ 喷雾剂高剂量C 组小鼠耳廓肿胀度［(3.68±2.62)、(3.59±2.25)、(3.62±3.56)mg］较空白C 组小鼠明显减轻(P ＜0.01)。XQ 喷雾剂低剂量C 组小鼠耳廓肿胀度较空白C 组差异无统计学意义(P ＞0.05)。

2.2.2 XQ 喷雾剂对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响 与空白D 组比较，XQ 喷雾剂高剂量D 组给药后30 min 可减轻大鼠足跖肿胀度(P ＜0.05);云南白药D 组于给药后240 min 可减轻大鼠足跖肿胀度(P ＜0.05)。与云南白药D 组比较，XQ 喷雾剂中、高剂量D 组对大鼠足跖肿胀度影响差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表4。

表2 XQ 喷雾剂对电刺激致痛痛阈值的影响(x±s，n=10)Table 2 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in electrical stimulation test，n=10)

表2 XQ 喷雾剂对电刺激致痛痛阈值的影响(x±s，n=10)Table 2 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in electrical stimulation test，n=10)

与空白A 组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

组别 给药前痛阈值 痛阈值给药后15 min Δ痛阈 痛阈值给药后30 min Δ痛阈空白A 组 73.50±12.48 74.50±6.85 1.00±11.25 71.50±10.01 -2.00±17.67云南白药A 组 69.00±8.76 91.00±14.87 22.00±14.38＊＊ 86.00±15.06 17.00±19.47*XQ 喷雾剂低剂量A 组 63.50±18.11 71.00±16.80 7.50±10.34 72.00±22.01 8.50±22.61 XQ 喷雾剂中剂量A 组 83.00±12.52 102.50±21.74 19.50±19.64* 105.50±22.29 22.50±23.60*XQ 喷雾剂高剂量A 组 66.50±7.84 93.50±21.35 27.00±17.98＊＊ 82.00±10.59 15.50±7.98*

表3 XQ 喷雾剂对小鼠压痛痛阈值的影响，n=10)Table 3 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in tail pain tenderness test，n=10)

表3 XQ 喷雾剂对小鼠压痛痛阈值的影响，n=10)Table 3 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in tail pain tenderness test，n=10)

与空白B 组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与云南白药B 组比较，#P ＜0.01

组别 给药前痛阈值 痛阈值给药后15 min Δ痛阈 痛阈值给药后30 min Δ痛阈空白B 组 1.42±0.35 1.47±0.16 0.05±0.36 1.55±0.30 0.12±0.20云南白药B 组 1.55±0.24 1.49±0.20 -0.06±0.40 1.67±0.19 0.12±0.25 XQ 喷雾剂低剂量B 组 1.49±0.08 1.83±0.33 0.34±0.32 1.62±0.14 0.13±0.12 XQ 喷雾剂中剂量B 组 1.62±0.23 1.86±0.23 0.24±0.19 1.81±0.11 0.19±0.27 XQ 喷雾剂高剂量B 组 1.37±0.11 1.94±0.15 0.58±0.17＊＊# 1.85±0.27 0.48±0.24＊＊#

表4 XQ 喷雾剂对大鼠足跖肿胀的影响，n=10)Table 4 Effects of xiangqingzhitong spray for paw edema in rats，n=10)

表4 XQ 喷雾剂对大鼠足跖肿胀的影响，n=10)Table 4 Effects of xiangqingzhitong spray for paw edema in rats，n=10)

与空白D 组比较，*P ＜0.05

组别30 min 60 min给药后不1同20时 mi间n肿胀度240 min 360 min空白D 组 2.54±1.28 2.42±1.32 2.27±1.73 3.08±1.92 2.30±1.61云南白药D 组 1.68±0.90 1.87±1.15 1.20±0.56 1.69±0.74* 1.51±0.88 XQ 喷雾剂低剂量D 组 2.21±0.74 1.55±1.23 2.36±1.12 2.57±1.35 2.80±1.19 XQ 喷雾剂中剂量D 组 2.05±0.81 1.88±1.30 1.77±1.01 2.06±1.09 1.66±1.17 XQ 喷雾剂高剂量D 组 1.19±0.94*1.79±0.90 1.85±0.72 1.69±1.32 1.96±1.07

3 讨 论

疼痛是机体受到不良刺激或损害的一种保护性反应，一般认为在伤害性刺激作用下，组织释放各种致痛因子，如H+、K+、组织胺等，刺激痛受体，在游离神经末梢产生痛觉传入冲动，冲动传至中枢神经系统而产生疼痛反应。理论上，阻断该过程的任一环节，均可产生镇痛效应。而炎症反应是多种疾病反应的病理表现，是具有血管系统活体组织对损伤因子所发生的防御反应，临床表现为病变局部的红、肿、热、痛和功能障碍以及间或伴有不同程度的全身性反应，并且炎症反应和疼痛常常相伴而生，互相影响。

XQ 喷雾剂具有止痛、消肿、抗炎等功能，本制剂中的红茴香镇痛活性成分为黄酮类化合物，文献报导红茴香具有改善局部组织的微循环得、加速渗出液的吸收，故而起到了消肿、止痛、散瘀作用［9］;红茴香还具有使损伤的局部炎症消退、组织粘连减轻作用，利于组织损伤的修复，预防瘢痕形成［10］。徐长卿镇痛有效成分主要为丹皮酚，其镇痛作用与影响脑内单胺递质，多巴胺系统与5-羟色胺系统功能有关，还对局部的微循环有促进作用，可使鼠肠系膜上微循环中的毛细血管管径增粗，血管内红细胞的流速增快［11］。故我们推测，由两者组方形成的“XQ 喷雾剂”可能综合了两种药物的作用特点，其镇痛、抗炎作用大大加强，但实际的作用机制仍待深入研究。

上述药理作用也在本实验中得到体现:XQ 喷雾剂中、高剂量A 组能显著提高小鼠电刺激痛阈值，高剂量B 组能显著提高小鼠尾压痛阈值，表明XQ喷雾剂对不同致痛模型显示了对抗作用，且其镇痛作用以大剂量为好，且镇痛效果与云南白药相当。另外，XQ 喷雾剂对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀有显著的抑制作用，提示该药对动物实验性炎症具有一定的抑制效应，且中、高剂量XQ 喷雾剂抗药效果与云南白药相当。综上所述，XQ 喷雾剂具有明显的镇痛抗炎作用，治疗针对性强，有较好的开发前景，本研究结果为该产品的临床应用提供了实验依据。

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