米槁精油对半夏镰刀菌的抑制作用研究

张 娜，武孔云

(1.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002；2.贵阳学院，贵州 贵阳 550005)



米槁精油对半夏镰刀菌的抑制作用研究

张 娜1，武孔云2

(1.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002；2.贵阳学院，贵州 贵阳 550005)

目的：明确米槁精油对半夏镰刀菌的抑制作用。方法：以半夏镰刀菌为供试菌种，采用生长速率法测定不同浓度米槁精油的抑菌活性。结果：米槁精油对半夏镰刀菌有较好的抑制作用，其作用大小与精油的浓度相关，浓度越大，抑制作用越强。结论：米槁精油在较低浓度下对半夏镰刀菌有较高的抑制作用，可将其作为新型植物源生物农药的来源。

米槁精油；抑菌活性；半夏镰刀菌；生长速率法

米槁(CinnamomummigaoH. W. Li)为樟科(Lauraceae)樟属木本植物，药用部位为其干燥成熟果实，为中国贵州省苗族、布依族民间习用药材[1]。有关文献资料证明米槁果实的挥发油具有明显的体外体内抗菌、抗病毒、杀虫等功效[2]，并证实该挥发油中不含对人体有害的黄樟醚[3]。目前，对于米槁体外抗菌作用的研究一般以金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和致病性大肠杆菌等为供试菌种，而对于植物病原真菌抑制作用的研究较少。本课题以半夏镰刀菌[4]为供试菌种，测定其对半夏镰刀菌的抑菌活性，期望找到新的抗病资源，为植物源杀菌剂的开发提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试药材：米槁果实购于贵州宏宇药业有限公司，并由贵阳学院武孔云教授鉴定。供试菌种：半夏镰刀菌(Fusariumsp.)由贵州省农业科学院中药材研究所曾令祥老师提供。培养基：采用马铃薯琼脂固体培养基[5]。试剂：吐温-80，50%多菌灵可湿性粉剂，纯化琼脂粉，葡萄糖，无菌水。仪器：烘箱，手提式粉碎机，恒温培养箱，高压灭菌锅，个人无菌操作台，分析天平(感量0.1mg)，基础实验器材。

1.2 实验方法

1.2.1 精油制备 采用水蒸气蒸馏法[6]提取米槁精油，经无水亚硫酸钠干燥后置于棕色瓶中备用。

1.2.2 试液配制 取一定体积的精油与等体积的吐温-80均匀混合后，用无菌水定容至一定体积，配制成200mL/L的溶液，然后采用倍比稀释法将其依次用无菌水稀释成100mL/L，50mL/L，25mL/L，12.5mL/L浓度梯度的溶液，备用。依相同方法配制相同系列浓度的吐温-80溶液为阴性对照。用无菌水配制系列浓度(800mg/L，400mg/L，200mg/L，100mg/L，50mg/L)的多菌灵溶液为阳性对照。

1.2.3 抑菌试验 采用菌丝生长速率测定法[7]测定各试液对半夏镰刀菌的抑制效果。将配制好的系列浓度的精油溶液、吐温-80溶液和多菌灵溶液分别加至已接种好且已知直径的菌落上，完全覆盖菌丝，3次重复，并以无菌水为空白对照，26℃恒温培养，待空白对照菌落接近培养皿边缘时，以十字交叉法测定菌落直径，计算抑制率。按公式计算抑制率：

菌丝生长抑制率=(对照菌落菌丝生长量-处理菌落菌丝生长量)/对照菌落菌丝生长量×100%

2 结果与分析

2.1 3种试液的抑菌效果

采用生长速率法分别测定米槁精油、多菌灵和吐温-80对半夏镰刀菌的室内抑制作用，结果见表1。由表1可知，不同浓度下的米槁精油和多菌灵对半夏镰刀菌均有抑制作用，并且抑制率随浓度的增加而增加；而吐温-80对半夏镰刀菌没有明显抑制作用。

表1 3种药剂对半夏镰刀菌菌丝生长的抑制效果

2.2 抑制作用与药剂浓度的相关性分析

用SPSS17.0软件对药剂处理结果进行统计分析，计算抑制率和回归方程，统计结果如表2所示。由表2可知，多菌灵与米槁精油的回归方程的相关系数均在0.95以上，说明抑制作用与药剂浓度呈正相关。

表2 米槁精油与多菌灵的回归方程

3 讨论

本研究结果显示，米槁精油对半夏镰刀菌有较好的抑制作用，且在浓度为12.5ml/L时，抑制率为58.74%，说明其低浓度下也表现出较好的抑制作用。然而，本研究只是对米槁精油的粗提物进行了室内抑菌活性的测定，其具体的抑菌活性成分有待明确。同时，本研究对于半夏镰刀菌的抑制作用只着眼于对菌丝的抑制效果，其作用机制也需做进一步研究。根据研究结果，有必要进行针对性的深入研究，为充分、合理利用植物资源以及进一步开发植物源杀菌剂提供依据。

[1] 赵立春, 邱明华, 邱德文, 等. 苗药大果木姜子果实挥发油化学成分研究[J]. 西北药学杂志, 2009,24(5):353.

[2] 陈达, 杨佃志. 大果木姜子不同组方提取物体外抗菌试验研究[J]. 中国民族民间医药, 2010,19(18):42- 44.

[3] 李天祥. 米槁精油提取与分离及其化学成分的研究[D]. 天津：天津大学, 2004.

[4] 曾令祥, 李德友. 贵州地道中药材半夏病虫害种类调查及综合防治[J]. 贵州农业科技, 2009,15(1):92-95.

[5] 赵永强, 张成玲, 张薇, 等. 4种杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内毒力测定[J]. 中国烟草学报, 2009,37(1):49.

[6] 国家药典委员会. 中国药典[M]. 一部.北京: 化学工业出版社, 2005:136-137，143， 附录: 57-58.

[7] 吴文君. 植物化学保护实验技术导论[M]. 西安: 陕西科技出版社, 1998：3.

(责任编辑：宋勇刚)

Study on the Inhibition Effect of Essential Oil of Cinnamomum Migao Pinellia Fusarium

Zhang Na1, Wu Kongyun2

(1 Guiyang College of Traditional Chinese Medicine ,Guizhou 550002,China; 2 Guiyang University, Guizhou 550005, China)

Objective:The study aimed to determine the inhibition effect of essential oil extracted from Migao on Fusarium sp. in Pinellia ternate(Thunb.)Breit.Methods:The antifungal activity of essential oil in different concentration extracted from Migao against Fusarium sp. in Pinellia ternate(Thunb.)Breit was determined by growth rate methods.Results:Essential oil extracted from Migao showed significant inhibition effect on Fusarium sp. in Pinellia ternate(Thunb.)Breit. Its antifungal effect was positively correlative with its concentration, and the antifungal effect was stronger with the increasing concentration.Conclusion:The essential oil extracted from Migao at low concentration could play higher inhibition function, which could be used as the good resource of new botanical bio-pesticides.

Essential Oil; Antifungal Activity; Fusarium sp.; Growth Rate Methods

2014-09-06

张娜(1989-)，女，贵阳中医学院硕士研究生，研究方向为天然产物化学。

R285.5

A

1673-2197(2015)01-0015-02

10.11954/ytctyy.201501008