不同产地葛根HPLC指纹图谱研究

白而力

(山西药科职业技术学院，山西 太原 030031)



不同产地葛根HPLC指纹图谱研究

白而力

(山西药科职业技术学院，山西 太原 030031)

目的：比较不同产地葛根药材中葛根素的含量。方法：采用HPLC法，建立不同产地葛根的指纹图谱。结果：三个产地的葛根药材指纹图谱比较相似，各共有峰都存在，但色谱之间的相对峰面积并不相同，由此可以看出其内在质量是有差别的。结论：野葛与粉葛的指纹图谱差异较大，说明种间的成分差别较大，所以，生产过程中一定要使用同品种的原料，不同产地野葛的指纹图谱相似，各共有峰都存在，各峰面积及相对面积有差异。

葛根；HPLC；指纹图谱

葛根为豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi 或甘葛藤P.thomsoniiBenth. 的干燥根。含有葛根素(Puerarin) 、葛根素木糖甙(Pueraria2xyloside)、大豆黄酮(Daizein)、大豆黄酮甙(Daidzin)等异黄酮(Isoflavone)类物质，干物质中含量可达50mg/100g[1]。这些物质可显著改善高血压、动脉硬化患者的脑血流，增加冠状动脉血流量，调节血液循环，是一种较为常用的心肌保护物质[2]。此外，葛根中还含有较多淀粉，干物质含量达35%～40%(新鲜葛根中淀粉含量为20%左右)[3]，且这种淀粉质地洁白细腻，具有糊化温度低、淀粉糊透明度高、黏度稳定性强等特点。淀粉中还含有少量维生素和矿物质，是营养丰富的高级淀粉[4]。

本实验目的为寻找一种新的简单、快捷又有效的方法提取葛根中的主要成分，以建立其高效液相色谱指纹图谱，并能利用建立的HPLC指纹图谱鉴别不同产地葛根。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 高效液相色谱仪；依利特hypersil ODS2(4.6mm×250nm，5μm)色谱柱；DAD 二级管阵列检测器；HP1100 色谱工作站。试剂为分析纯：乙酸乙酯，无水乙醇，无水甲醇，苯(广州化学试剂厂)。甲醇为Fisher 色谱纯。水为超纯水。用于指纹图谱的葛根样品：云南(粉葛) ，安徽(野葛)，四川(粉葛)为药材市场所售商品药材。以上样品均经由山西药科职业学院中药教研室鉴定。

1.2 提取方法选择

本实验尝试了用水和乙醇进行提取，分别用加热回流和超声、微波等提取方法进行比较提取效果。由于以水做提取溶剂，提取液糖份含量较高，溶液黏稠，不利于进行HPLC检测；用加热的方法进行提取，耗时长，加热易不均匀，提取效果不佳。因此本实验采用微波破壁、超声提取的方法，提取葛根中的主要成分。

1.3 溶液制备

1.3.1 对照品溶液制备 取葛根素注射液20μL稀释至200μL，进样。

1.3.2 供试品溶液制备 称取各种葛根样品40～60目粉末20g，用超纯水浸泡24h。过滤后微波3min，再加入80%乙醇超声30min；过滤后将滤液浓缩至一定体积，用20mL苯萃取。将苯层旋干，水层蒸干，用10mL纯甲醇溶解，待测。

1.4 重现性测试

准确称取3份葛根样品40～60目粉末各5.000g，用超纯水浸泡24h。过滤后微波3min，再加入80%甲醇超声30min；过滤后上HPLC检测。

1.5 不同产地葛根HPLC指纹图谱比较

准确称取云南、安徽、四川葛根样品40～60目粉末各5.000g，用超纯水浸泡24h。过滤后微波3min，再加入80%甲醇超声30min；过滤后上HPLC检测。

2 结果和讨论

2.1 色谱及提取条件选择

色谱柱：hypersil ODS2 (4.6mm×250nm，5μm)，流动相为甲醇和水，柱温30℃，进样量为10μL，流速为1mL/min，检测波长为250nm。

通过用不同极性的溶剂对提取液萃取(见图1-图3)，得到提取液中不同极性物质的相对保留时间，从而设定洗脱梯度。梯度洗脱程序见表1。

图1 苯层-甲醇溶液HPLC图谱

图2 甲醇萃取溶液

图3 葛根素注射液

时间(min)浓度(%)0～2甲醇102～5甲醇10～205～10甲醇20～2515～20甲醇25～3020～50甲醇30～8050～70甲醇80～100

2.2 重复性试验

精密称取四川葛根样品6份，每份0.1g，按照供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件进样，结果表明，各色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值相当一致，RSD为0.02，表明该方法重复性良好。

2.3 不同产地葛根HPLC指纹图谱比较

从测定结果看(图4，表2)，三产地的葛根药材指纹图谱比较相似，各共有峰都存在，但色谱之间的相对峰面积并不相同，由此可以看出其内在质量是有差别的。指纹图谱正是通过这种内在的差异，达到鉴定不同批次、产地葛根的目的。

野葛与粉葛的指纹图谱差异较大，说明种间的成分差别较大，所以，生产过程中一定要使用同品种的原料，不同产地野葛的指纹图谱相似，各共有峰都存在，各峰面积及相对面积有差异。

图4 不同产地葛根指纹图谱

产地共有峰相对峰面积123456789101112131415云南0.130.030.010.021.000.060.140.070.030.020.050.020.260.230.06安徽0.060.000.020.151.000.070.130.070.010.030.020.030.140.020.00四川0.030.000.010.311.000.030.230.040.000.020.010.030.090.020.01

[1] 陈士林,陈四保,杨大坚, 等.葛根高效液相色谱的研究[J].中草药,2003,34(7)：661-663.

[2] 郑颖,吴凤锷.中药指纹图谱的研究进展[J].天然产物研究与开发,2003,15(1):55-60.

[3] 曹红,王国卫.现代仪器分析在中药指纹图谱研究中的应用[J].农垦医学,2003,25(3):162-164.

[4] 白海波,李波,宋子荣.葛根提取工艺的研究[J].中国实验方剂学杂志,2002,8(6):14-15.

(责任编辑：魏 晓)

2015-03-20

白而力(1982-)，男，回族，山西药科职业技术学院助教，研究方向为中药制剂。

R284

A

1673-2197(2015)13-0024-03

10.11954/ytctyy.201513010