白豆蔻-白苣胜挥发油提取工艺及抗失眠药效学研究

萨础拉，呼日乐巴根，阿拉坦敖日格乐，董 玉

(内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)



白豆蔻-白苣胜挥发油提取工艺及抗失眠药效学研究

萨础拉，呼日乐巴根，阿拉坦敖日格乐，董 玉

(内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)

目的：研究白豆蔻-白苣胜挥发油的提取工艺，观察其对小鼠的镇静催眠作用。方法：采用L9(34)正交表设计实验，优化提取条件，考察药材粉碎粒度、提取时间、液料比对白豆蔻-白苣胜挥发油得率的影响。观察挥发油对小鼠自主活动以及催眠剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的影响。结果：根据极差分析可知，3种因素对白豆蔻-白苣胜挥发油提取率的影响大小为粉碎粒度>提取时间>液料比。挥发油最佳提取工艺为粉碎粒度20目，提取4h，液料比为12倍。白豆蔻-白苣胜挥发油可减少小鼠走动时间及小鼠前肢上抬次数，缩短戊巴比妥所致小鼠入睡的潜伏时间，延长睡眠持续时间。结论：采用水蒸气提取法提取白豆蔻-白苣胜中的挥发油成分简便可行，适合工业化生产，所提取的白豆蔻-白苣胜挥发油具有镇静催眠作用。

白豆蔻-白苣胜；挥发油；镇静；催眠；水蒸气提取法

苏格木勒-3汤是蒙医临床常用方剂，由白豆蔻 15g、白苣胜 10g、荜茇 5g三味蒙药组成，具有抑赫依的功效，临床主治失眠[1]。白豆蔻为姜科植物白豆蔻AmomumkravanhPierreexGagnep和爪哇白豆蔻AmomumcompactumSoland.exMaton的果实，味辛、苦，性温，可祛肾寒、镇赫依、温中消食，主治肾赫依病、失眠、消化不良等，收载于2010版《中华人民共和国药典》[2]，其有效成分和质控指标性成分均为挥发油。白苣胜为菊科植物莴苣LactucasativaL.的种子，味微甘，性平，可清肺热、消食开胃、抑赫依，主治肺热咳嗽、失眠、消化不良等，有效成分为挥发油[3]。为研究苏格木勒-3汤的药效物质基础，并为该方的深入开发利用提供科学依据，本研究对白豆蔻-白苣胜挥发油的提取工艺进行优化并观察其对小鼠的镇静催眠作用，现报道如下。

1 材料与动物

1.1 试药

白豆蔻与白苣胜均购自当地药房，经内蒙古医科大学蒙医药学院图门巴雅尔教授鉴定为真品。白豆蔻为姜科植物白豆蔻AmomumkravanhPierreexGagnep和爪哇白豆蔻AmomumcompactumSoland.exMaton的果实，其挥发油含量符合《中华人民共和国药典》2010年版的相关要求。将药材粉碎，分别过20、40、60目筛，备用。白苣胜为菊科植物莴苣LactucasativaL.的种子。阿普唑仑片(北京市燕京制药厂生产，批号：020901，实验前采用蒸馏水配制成0.006mg/mL的混悬液)；生理盐水；戊巴比妥(Sigma公司)。

1.2 仪器

挥发油测定器(符合2010年版中国药典一部附录XD挥发油测定器的相关标准)；98-1-B型电子调温电热套；T-200型电子天平；FW135型中草药粉碎机；药用筛。

1.3 动物

ICR种雄性小鼠，体重18～20g，由内蒙古大学实验动物中心提供，合格证编号：SCXK(蒙)2002-0001。

2 方法与结果

2.1 白豆蔻-白苣胜挥发油提取工艺研究

2.1.1 白豆蔻-白苣胜挥发油提取方法 根据《中国药典》2010版一部附录XD，采用水蒸气蒸馏法进行挥发油的提取。首先将白豆蔻、白苣胜药材粉碎过筛，分别精密称取白豆蔻、白苣胜药材粉末30g、20g，置于同一圆底烧瓶中，加入相应倍数的水振摇混匀，浸泡，缓缓加热至沸，并保持微沸至规定时间，后停止加热，放置冷却，接收挥发油，精密测定挥发油体积，计算挥发油得率。

2.1.2 单因素试验 以挥发油得率为考察指标，采用单因素法考察提取时间、液料比对挥发油提取率的影响。

(1)提取时间对挥发油得率的影响 按照“2.1.1”项下方法提取挥发油，固定液料比(10倍)、药材粒度(40目)，考察不同提取时间(2、10、20、30min、1、2、4、6、8、10h)对挥发油得率的影响，每个实验重复3次。结果见图1。

由图1可知，在2min至1h提取时间范围内，挥发油得率随着提取时间的增加而迅速提高，但在1h之后挥发油得率没有任何变化。

(2)液料比对挥发油得率的影响 按照“2.1.1”项下方法提取挥发油，固定提取时间(1h)、药材粒度(40目)，考察不同液料比(6、8、10、12倍)对挥发油得率的影响，每个实验重复3次，得出液料比为12倍时，挥发油提取率最高，结果见图2。

2.1.3 正交设计法优化白豆蔻-白苣胜挥发油提取工艺 以粉碎粒度(A)、提取时间(B)、液料比(C)为实验因素，以挥发油得率为考察指标，进行L9(34)正交设计实验，因素水平见表1。精密称取白豆蔻、白苣胜药材粉末15g、10g，按照“2.1.1”项下方法提取挥发油，并计算提取挥发油得率，结果见表1、表2。

图1 不同提取时间对挥发油得率的影响

图2 不同液料比对挥发油得率的影响

水平因素粉碎粒度(A)/目提取时间(B)/h液料比(C)/倍1200.58240210360412

表2 正交试验结果

由表2极差分析可知，3种因素对白豆蔻-白苣胜挥发油提取率的影响大小为A>B>C，即粉碎粒度>提取时间>液料比；最佳挥发油提取工艺为A1B3C3，即粉碎粒度为20目，提取时间为4h，液料比为12倍。

2.1.4 单因素验证试验 为结合生产实际，验证实验结果，精密称取白豆蔻、白苣胜药材粉末30g、20g，采用正交试验最佳工艺提取挥发油，计算挥发油得率，重复3次，平均得率为3.4%，RSD<3%。

2.2 白豆蔻-白苣胜挥发油治疗失眠的药效学研究[4]

2.2.1 白豆蔻-白苣胜挥发油对小鼠自主活动的影响 将60只小鼠随机分为空白组、苏格木勒-3组、阳性对照组、白豆蔻-白苣胜挥发油高剂量组、白豆蔻-白苣胜挥发油低剂量组5组，灌胃给药，1次/日，连续给药5天。给药前将小鼠投入活动箱中适应5min，给药后60min记录2min内小鼠的走动时间和前肢向上抬举次数，结果见表3。与空白组比较，各剂量白豆蔻-白苣胜挥发油组小鼠走动时间及前肢上抬次数均显著降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。

组别剂量走动时间(s)前肢向上抬(次)空白组-111.54±12.2940.50±8.21阿普唑仑组0.12mg/kg77.73±24.37**22.87±6.70**白豆蔻-白苣胜挥发油高剂量组0.5mL/kg84.44±20.86**18.56±6.67**白豆蔻-白苣胜挥发油低剂量组0.3mL/kg83.80±20.30**17.70±4.88**苏格木勒-3汤组2g/kg69.00±28.04**24.64±7.71**

注：与空白组比较**P<0.01。

2.2.2 白豆蔻-白苣胜挥发油对催眠剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响 动物分组及处理同上。末次给药1h后，每只鼠腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg，观察记录入睡潜伏期(翻正反射消失时间)和睡眠持续时间(翻正反射消失至恢复的时间)，结果见表4。与空白组比较，各剂量白豆蔻-白苣胜挥发油均可缩短小鼠入睡潜伏时间，延长小鼠睡眠持续时间。

组别剂量入睡潜伏时间(min)睡眠持续时间(min)空白组-5.38±0.5212.67±1.75阿普唑仑组0.12mg/kg4.53±1.30*20.27±6.24**白豆蔻-白苣胜挥发油高剂量组0.5mL/kg4.00±0.58*17.43±5.26*白豆蔻-白苣胜挥发油低剂量组0.3mL/kg3.50±1.76*15.67±2.94*苏格木勒-3汤组2g/kg4.31±1.03*18.79±7.93*

注：与空白组比较*P<0.05，**P<0.01。

3 讨论

本实验采用水蒸气蒸馏法对白豆蔻-白苣胜的挥发油成分进行了提取。水蒸气蒸馏法是指将含有挥发性成分的药材与水共蒸馏，使挥发性成分随水蒸气一并馏出，后经冷凝分离的浸提方法。该法适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的药材成分的浸提。该法稳定可靠、操作简单，适合于工业化生产。在白豆蔻-白苣胜挥发油的提取过程中，白豆蔻挥发油的含量较高，而白苣胜挥发油的含量较低，且在混合提取中，白苣胜会降低白豆蔻挥发油的提取量。未来本课题组将采用GC-MS法研究其有效成分及含量相互配伍后的变化情况。

采用水蒸气法提取白豆蔻-白苣胜挥发油时，提取量主要受药材粉碎粒度及提取时间的影响。药材粉碎粒度为20目时，白豆蔻-白苣胜的挥发油得率最高，且随着提取时间的延长，白豆蔻-白苣胜挥发油得率不再增加，趋于稳态。

本研究结果表明，白豆蔻-白苣胜挥发油的最佳提取工艺为粉碎粒度20目，提取4h，液料比为12倍。药效学实验表明，白豆蔻-白苣胜挥发油可减少小鼠的走动时间及小鼠前肢上抬次数，缩短戊巴比妥所致小鼠入睡的潜伏时间，延长睡眠持续时间。采用水蒸气提取法提取白豆蔻-白苣胜中的挥发油成分简便可行，适合工业化生产，所提取的白豆蔻-白苣胜挥发油具有镇静催眠作用。

[1] 内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准[M].赤峰:内蒙古科学技术出版社,1984:56.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:化学工业出版社,2010:156.

[3] 蒙古学百科全书编辑委员会《医学卷》编辑委员会.蒙古学百科全书医学卷[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,2002:196.

[4] 曹欣冬,范吉平,朱陵群,等.神安汤治疗失眠的药效学研究[J].中药药理与临床,2005,21(5):53.

(责任编辑：尹晨茹)

Extraction Process of the Essential Oil from Baidoukou-Baijusheng and Pharmacodynamics Research for the Treatment of Insomnia

Sa Chula,Hurilebagen,Alatengorgol,Dong Yu

(Inner Mongolia Medical University,Hohhot 010110,China)

Objective:To observe the pharmacodynamics for the treatment of insomnia Baidoukou-Baijusheng essential oil and To study the Extraction process of the essential oil from Baidoukou-Baijusheng.Methods:To observe the influence of autonomic activities and sleeping time of baidoukou-baijusheng essential oil at Hypnotic dose of sodium pentobarbital in mice. Using the L9(34) orthogonal experimental design，the extraction conditions were optimized. To investigate the influence of baidoukou-baijusheng essential oil receiving rate of the fineness of pulverization,extraction time and Liquid than.Results:The baidoukou-baijusheng essential oil were decreased the moving time and raise forelimbs,cut downed the latent time at Hypnotic dose of sodium pentobarbital in mice,extended the sleeping time.Based on the range analysis,The influence of three factor of the baidoukou-baijusheng essential oil receiving rate were the fineness of pulverization>extraction time>Liquid than.The Best Group of Extraction process of the baidoukou-baijusheng essential oil was 20 sieve mesh. The extraction time was 4 time. The Liquid than was 12 times. Conclusion:The baidoukou-baijusheng essential oil has a sedative and hypnotic effects. The extraction process of the essential oil from Baidoukou-Baijusheng was feasible and simple. Suitable for industrial production.

Baidoukou-Baijusheng;Essential Oil;Sedative;Hypnotic;Steam Extraction

2014-03-10

2013年内蒙古医科大学青年创新基金项目(YKD2013QNCX016)；内蒙古医科大学博士启动基金项目(YKD2013QNCX016)；2014年内蒙古医科大学“英才培育”项目

萨础拉(1984-)，女，博士，内蒙古医科大学讲师，研究方向为蒙(中)药复方有效物质基础及新药创制。E-mail:haisachula@126.com

R284.2;R285.5

A

1673-2197(2015)14-0008-03

10.11954/ytctyy.201514004