不同产地、不同品种绞股蓝总黄酮含量比较研究

彭 亮,李诒光,2*,陈 杰*,饶 毅,季巧遇,魏惠珍

(1.江西中医药大学,江西 南昌 330006;2.江中药业股份有限公司,江西 南昌 330096)



不同产地、不同品种绞股蓝总黄酮含量比较研究

彭 亮1,李诒光1,2*,陈 杰1*,饶 毅1,季巧遇1,魏惠珍1

(1.江西中医药大学,江西 南昌 330006;2.江中药业股份有限公司,江西 南昌 330096)

目的：以绞股蓝中总黄酮含量为指标，建立绞股蓝总黄酮含量测定方法，并比较不同产地、不同品种绞股蓝中总黄酮含量差异，为考察药材内在质量提供依据。方法：采用紫外可见分光光度法，以芦丁为对照品，在波长401nm处对绞股蓝总黄酮进行含量测定。结果：芦丁在0.109 2～0.546 0mg 范围内与吸光度呈良好线性关系(R2=0.999 8)，平均回收率为98.13%，RSD为1.52 % (n=6)。结论：该方法简便可行、重复性好，适用于绞股蓝总黄酮含量测定。不同产地绞股蓝中总黄酮含量存在差异，且绞股蓝中总黄酮含量与绞股蓝品种无相关性，该结果可为绞股蓝药材质量控制提供参考依据。

绞股蓝；总黄酮；提取工艺；含量研究

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属多年生草本植物Gynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino.的根茎或全草[1-3]，又名七叶胆、天堂草、公罗锅底、遍地生根等。该属植物基源复杂、品种繁多，全世界约有16种和3变种，我国有14种和3变种[4]，广泛分布于陕西、湖北、安徽、福建、云南、广西等地。其味苦微甘，性凉；归肺、脾、肾经。具有清热解毒、化痰止咳、益气健脾、养阴生津、养心安神等功效[5]。现代研究表明，绞股蓝含有皂苷、多糖和黄酮类成分，此外还含有少量的氨基酸、维生素和微量元素等，其中黄酮类成分是绞股蓝的主要化学成分，具有抗氧化、清除自由基、抗癌防癌、改善心脑血管循环和调节血压等作用[6-7]。目前，关于绞股蓝的研究报道，无论是成分提取还是药效研究都主要集中在皂苷类成分上，而对于黄酮类成分的研究报道则相对较少[8]，且有关不同产地、不同品种绞股蓝总黄酮含量差异化研究也未见文献报道，为进一步研究绞股蓝药材，本文建立了绞股蓝中黄酮提取及含量测定方法，并比较了不同产地、不同品种绞股蓝中总黄酮含量差异，以期为绞股蓝药材质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-1800紫外可见分光光度计(日本岛津)；SK5200LH超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(Mettler Toledo上海衡器有限公司)；HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。

1.2 试药

绞股蓝药材经鉴定为葫芦科绞股蓝属多年生草本植物Gynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino的根茎或全草，药材来源见表1。芦丁对照品(批号为110827-200707，中国食品药品检定研究院)。石油醚、甲醇等其它试剂均为分析纯。

表1 绞股蓝药材样品来源

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

取干燥至恒重的芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成浓度为0.109 2mg·mL-1的对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备

取绞股蓝药材干燥粉末(过4号筛)约1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚( 60～90℃)适量，加热回流至提取液无色，弃去石油醚液，药渣连同滤纸挥干溶剂，将药渣移入具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50mL，回流提取2次，每次1.0h，过滤，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 统计分析

2.4 最大吸收波长

将显色后的对照品和供试品溶液于200～700nm 波长范围内扫描，对照品和供试品在401nm附近均有最大吸收。

2.5 标准曲线制定

精密吸取芦丁对照品溶液1、2、3、4、5mL，分别置于10.0mL具塞试管中，各加甲醇至5.0mL，加5%亚硝酸钠0.5mL，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝0.5mL，摇匀，放置6min，加4%NaOH溶液4.0mL，摇匀，放置15min，以空白溶剂校正零点，于401nm波长处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标Y，对照品量取样量(mg)为横坐标X进行线性回归，求得回归方程为：Y=1.201 5X-0.004 8，R2=0.999 8(n=5)。结果表明，芦丁在0.109 2～0.546 0mg范围内与吸光度成良好线性关系。

2.6 精密度试验

精密吸取同一份芦丁对照品溶液，按“2.5”项下方法操作，在同一条件下连续5次测得吸光度为0.259、0.255、0.261、0.257、0.263。结果RSD为1.22%，表明该方法精密度良好。

2.7 稳定性试验

取绞股蓝药材样品 (陕西平利-1)，按 “2.2”项下方法操作，分别在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h测得吸光度为0.403、0.398、0.408、0.396、0.412、0.414。结果RSD为1.82%，表明该方法稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批绞股蓝药材样品 (陕西平利-1) 5份，每份1.0g，按“2.2”项下方法制备，按“2.5”项下操作，在同一条件下分别测定吸光度，并代入回归方程计算样品中总黄酮含量分别为4.20%、4.16%、4.27%、4.13%、4.31%。结果样品中总黄酮平均含量为4.21%，RSD为1.77%，表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收试验

取已知含量的绞股蓝药材样品 (陕西平利-1) 6份，每份0.5g，精密称定，每份分别精密加入一定量的芦丁对照品，按“2.2”项下方法制备，按“2.5”项操作，在同一条件下分别测定吸光度，计算回收率 (以芦丁计)。结果芦丁平均回收率为98.13%，RSD为1.52%，表明该方法回收率良好，见表2。

表2 绞股蓝药材中芦丁回收率测定结果 (n=6)

2.10 样品中总黄酮含量测定

分别取各产地药材1.0g，精密称定，平行2份，按“2.2”项下方法制备，按“2.5”项操作，在同一条件下分别测定吸光度，计算各产地绞股蓝中总黄酮含量，结果见表3。

2.11 不同产地绞股蓝黄酮含量比较

将收集到的绞股蓝样品以品种为分类依据，分别对七叶绞股蓝5个产地样本黄酮含量和五叶绞股蓝5个产地样本黄酮含量进行统计分析。结果，七叶绞股蓝5个产地样本 (陕西平利-1、湖北十堰、湖北神农架、广西桂林、福建古田) 黄酮含量差异显著，有统计学意义(P<0.01)，见表4；五叶绞股蓝5个产地样本 (陕西平利-2、陕西平利-3、陕西平利-4、云南昆明、安徽亳州) 黄酮含量差异显著，有统计学意义(P<0.01)，见表5。

表3 绞股蓝药材中总黄酮含量测定结果 (n=2)

表4 七叶绞股蓝5个产地样品总黄酮含量 (±s)

表5 五叶绞股蓝5个产地样品总黄酮含量 (±s)

2.12 不同品种绞股蓝黄酮含量比较

将收集到的绞股蓝样品以品种为依据分为七叶绞股蓝组和五叶绞股蓝组，两组进行比较分析。结果，五叶绞股蓝所含黄酮含量高于七叶绞股蓝，但无统计学意义(P>0.05)，见表6。

表6 七叶绞股蓝和五叶绞股蓝总黄酮含量 (±s)

注：*P<0.05或**P<0.01表示差异有统计学意义。

3 讨论

由表3可知，10个不同产地绞股蓝总黄酮含量在1.70%～7.95% ，不同产地绞股蓝黄酮含量差异较大，可能与产地生长环境有关。五叶绞股蓝总黄酮平均含量(5.17%)稍高于七叶绞股蓝(3.69%)，但无显著性差异 (P>0.05)，提示绞股蓝黄酮含量与品种无相关性。 考虑到绞股蓝药材中脂溶性成分对紫外测定干扰较大，故用70%甲醇提取药材前，先用石油醚进行脱脂处理，除去部分脂溶性成分，减少在紫外测定中的干扰。

[1] 何显忠,邱江沁.绞股蓝化学成分和药理作用研究进展[J].中国中医药信息杂志,2008(5):84.

[2] 孙万森,吴喜利,乔成林,等.绞股蓝总皂苷防治多脏器损伤的药理研究进展[J].中成药报,2009,30(2):241.

[3] 李金青,杨洪军.绞股蓝的药理作用研究进展[J].中国现代药物应用,2009,3(7):189-190.

[4] 丁树利,朱兆仪,李勇.绞股蓝及同属植物的生药学研究[J].中药学杂志,1994,29(2):79.

[5] 陈武,邹盛勤，吴晓春,等.绞股蓝无糖口含片的制备工艺研究[J].食品科学,2008,29(3):245-248.

[6] 杨静.绞股蓝化学成分的研究[J].陕西中医,2000,21(8):3771.

[7] 阴建.中药现代研究与临床应用[M].北京:中医古籍出版社,1999:524.

[8] 吴宗群,王艳.绞股蓝的化学成份和药理作用研究现状[J].中华全科医学，2011,9(1):116-117.

(责任编辑：余 婷)

Study of Total Flavounes Content inGynostemmaPentaphyllum(Thunb.) Makino From Different Producing Areas and Different Varieties

Peng Liang1,Li Yi-Guang1,2*,Chen Jie1*,Rao Yi1,Ji Qiao-Yu1,Wei Hui-Zhen1

(1.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330006,China; 2.Jiangzhong Pharmaceutical Corporation,Nanchang 330096,China)

Objective:Take the content of total flavounes as index,to establish a method for assaying the flavounes and compare the diversity of total flavounes content inGynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino from different producing areas and different varieties,to provide basis for the study of its internal quality.Methods:The UV spectrophotometry was used to determine the contents of total flavounes.The detection wavelength was 401 nm and rutin as reference substance.Results:Good linear relationship with absorbability occurred when rutin in the range of 0.109 2～0.546 0mg (R2=0.999 8),and the average recovery was 98.13% (RSD=1.52%,n=6).Conclusion:The established method is simple,accurate and can be used for the determination of flavounes content.The total flavounes content exist differences inGynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino from different producing areas,but the content of total flavounes have no correlation with varieties.The results can able to provide reference for quality control ofGynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino.

GynostemmaPentaphyllum(Thunb.) Makino;Total Flavounes;Extraction;Determination

2015-06-07

彭亮(1990-),男,江西中医药大学硕士研究生,研究方向为中药质量控制。E-mail:602982740@qq.com

李诒光,男,博士,江中药业股份有限公司主任中药师,研究方向为中药质量评价与开发。E-mail:lyg@jzjt.com

R284

A

1673-2197(2015)21-0033-03

10.11954/ytctyy.201521014