芍药苷对小鼠胶原诱导性关节炎抑制作用

刘芳兰,蒋 莹

(江西医学高等专科学校， 江西 上饶 334000)



芍药苷对小鼠胶原诱导性关节炎抑制作用

刘芳兰,蒋 莹

(江西医学高等专科学校， 江西 上饶 334000)

目的：探究芍药苷(Paeoniflorin，PAE)对小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的影响，并研究其作用机制。方法：构建Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型，采用YLS-7B足趾容积测量仪测量各实验组鼠免疫足足趾的体积，计算肿胀率，ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-6的水平。结果：PAE低、中、高剂量灌胃可减轻CIA小鼠关节炎症状，降低肿胀程度，降低血清中TNF-a、IL-6水平。结论：PAE对CIA小鼠有一定治疗作用，其机制可能与其调节CIA小鼠免疫功能有关。

芍药苷；胶原性关节炎；炎症

类风湿性关节炎是一种病因有待明确的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、关节外病变和多滑膜关节炎为主要临床表现的自身免疫炎性疾病[1]。我国传统中药具有不可比拟的优点。近年来，国内研究发现PAE具有抗自由基损伤，抑制细胞内钙超载及抗神经毒性等活性，且毒副作用较小[2]。本文利用经典的小鼠胶原诱导性关节炎模型，研究PAE对类风湿关节炎是否具有治疗作用，并初步探讨其作用机制。

1 材料

芍药苷(纯度>88%，上海一基实业有限公司，批号：20120205)；牛II型胶原(Sigma公司)；BCA蛋白定量试剂盒(Pierce公司)；弗氏不完全佐剂(美国Sigma公司)；小鼠TNF-α、IL-6ELISA检测试剂盒(德国Bender公司)；实验动物雄性DBA/1小鼠，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号SCXK(湘)2012-0016；倒置显微镜(XSZ-D 重庆光学仪器厂)。

2 方法

2.1 小鼠CIA模型制备[3]

牛II胶原200μg溶于0.05mol·L-1醋酸0.1mL中，再与等体积的弗氏完全佐剂充分混合，注射至小鼠尾根部皮下。初次致敏后第14 天，再次小鼠尾根部皮下同体积注射试剂。每日观察关节皮下结节、红肿程度、红斑等情况。评价标准：4分：全部足爪肿胀； 3分：踝关节以下的足爪肿胀；2分：足趾和趾关节有肿胀；1分：趾关节有红肿；0分：无红肿。

2.2 实验分组及给药方案

小鼠随机分为6组：正常组、CIA模型组、PAE低剂量组(25mg·kg-1)、PAE中剂量组(50mg·kg-1)、PAE高剂量组(100mg·kg-1)和阳性对照组(吲哚美辛10mg·kg-1)。各用药组于致炎后第14～28 天灌胃给药，每天1次，正常组和CIA模型组灌胃等容量的0.5%羧甲基纤维素钠。

2.3 足爪容积测定及病理检查

足爪仪测定致炎前每只小鼠左后足容积，自第14 天起，每4天测定1次相应足容积，肿胀度=(Vt-Vn)/Vn×100%，Vn指模型前足容积；Vt指模型后足容积。第28天处死小鼠后，剪取左踝关节制病例切片待查。

2.4 血清中炎性因子检测

第1次免疫后28天麻醉小鼠，摘眼球取血获得取血清，并按照ELISA试剂盒说明操作，检测血清中TNF-a、IL-6水平。

2.5 统计学处理

3 结果

3.1 PAE对CIA小鼠多发性关节炎指数影响

PAE可剂量依赖性地抑制CIA小鼠继发性足肿胀，其足爪肿胀度明显轻于模型组，结果具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。见表1。

表1 PAE对CIA小鼠多发性关节炎指数的影响

组别剂量(mg·mL-1)肿胀度(%)18天22天24天28天模型组30.5±5.742.3±6.156.0±7.970.6±6.6芍药苷2521.5±5.1*31.6±4.5*42.6±4.5*51.6±6.0**实验组5018.6±4.7**26.6±5.2**32.6±4.2**39.3±5.9**10012.9±5.2**22.1±5.0**23.6±4.8**28.2±5.3**吲哚美辛组1011.6±5.3**19.6±5.5**22.6±4.6**28.1±4.9**

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

3.2 各实验组大鼠免疫足局部改变

各实验组(除健康对照组)大鼠经CⅡ免疫后第1天，免疫足出现明显的红肿，足体积明显增大，具有明显红、肿、热、痛症状；第21天加强免疫后，次日观察发现免疫足出现比第1次免疫更为显著的红肿；PAE高、中、低剂量治疗组大鼠免疫足红肿程度减轻，足部关节未见明显增粗，表皮干燥现象也好转；而CIA模型组大鼠免疫足红肿程度仍严重，可见跖趾关节和近端趾间关节明显增粗(见图1)。

图1 各实验组大鼠足部外观情况

3.3 PAE对炎性因子表达影响

经ELISA法检测，相比于正常组，CIA模型组炎性因子TNF-α、IL-6的表达明显增加，而芍药苷可剂量依赖性地抑制促炎因子的表达(如表2所示)。芍药苷实验组与其他两组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。

表2 各组小鼠血清炎性因子水平 ±s，n=6)

注：与正常组比较*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较#P<0.05，##P<0.01。

4 讨论

在本研究中观察了PAE对各实验组大鼠体重的影响。经PAE治疗22天后，正常对照组、CIA模型组、CIA阳性对照组、及PAE高、中、低剂量组大鼠平均体重比较发现，各实验组两两比较平均体重均无显著性差异(P>0.05)，结果显示RES对SD大鼠无明显毒副作用。本研究中发现，已经出现关节炎症状的CIA大鼠使用PAE处理22天，其关节炎指数、足爪容积及滑膜组织病理评分与模型组相比较明显下降，与阳性对照药物布洛芬比较，下降稍缓，提示PAE可对CIA大鼠的关节炎有抑制作用，其作用强度不及吲哚美辛。

[1] CHERICA SE. The epidemiology of rheumatoid arthritis[J]. Rheum Dis Clin Noah Am,2001,27(9):269-282.

[2] 郑世存, 李晓宇, 欧阳兵,等. 芍药苷药理作用研究新进展[J].中国药物警戒, 2012,9(2):100-103.

[3] 李洪忠, 万敬员, 张力,等. 积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用[J].药学学报,2007,42(7):698-703.

(责任编辑：余 婷)

2015-04-20

刘芳兰，女，硕士，江西医学高等专科学校教师，研究方向为免疫生理学。

R285.5

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1673-2197(2015)17-0010-02

10.11954/ytctyy.201517005