双冬胶囊鉴别方法研究

薛 静，黄 刚，吴再猛，刘仕静，蒲 兵，程吉祥

(贵州远程制药有限责任公司，贵州 贵阳 550018)



双冬胶囊鉴别方法研究

薛 静，黄 刚*，吴再猛，刘仕静，蒲 兵，程吉祥

(贵州远程制药有限责任公司，贵州 贵阳 550018)

目的：建立双冬胶囊鉴别方法。方法：采用薄层色谱法(TLC)对双冬胶囊中栀子、黄芪、麦冬、苦木进行定性鉴别。结果：TLC斑点清晰、分离度好、专属性强，阴性对照无干扰。结论：所建立的方法可用于双冬胶囊的质量控制。

双冬胶囊；薄层液相色谱法；栀子；黄芪；麦冬；苦木

双冬胶囊是由贵州远程制药有限责任公司生产的一种治疗下尿路感染的硬胶囊剂。其具有清热通淋、益气养阴的功效，用于减轻或缓解急性轻中度单纯性下尿路感染下焦湿热兼气阴两虚证出现的尿频、尿急、尿道灼热刺痛、尿黄等症状。处方由栀子、黄芪、麦冬、苦木等六味药材组成。参考相关文献[1-5]，通过试验制定了处方中栀子、黄芪、麦冬、苦木四味药材的定性检测指标，以控制本制剂的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

MettLer AE240 天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司)、ZWF三用紫外分析仪(上海兴亚仪器有限公司)；超声波清洗器(北京创新德超声电子研究所)。

1.2 试药

栀子苷对照品、栀子对照药材、黄芪甲苷对照品、黄芪对照药材、麦冬对照药材、苦木对照药材(中国食品药品检定研究院提供，批号分别为110749-200714、120986-200806、110781-200613、120974-200609、121183-201003、121017-200403)；硅胶(G、GF254)薄层板(青岛海洋化工有限公司)；双冬胶囊(批号：20130301、20130302、20130303)由贵州远程制药有限责任公司生产；本实验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 栀子的TLC鉴别

取双冬胶囊(20130301、20130302、20130303)内容物各2g，分别加甲醇(浓度为50%)20mL，超声40min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使其溶解，作为栀子TLC供试品溶液。另取栀子对照药材1g，加甲醇(浓度为50%)10mL，同法制成栀子对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成每1mL含4mg的对照品溶液。取不含栀子药材的阴性样品，同法制成不含栀子阴性对照溶液。按照TLC法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述六种溶液各2μL，分别点样于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙腈-甲醇-浓氨试液(7∶3∶2∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。结果显示，供试品色谱中，在与栀子对照药材色谱和栀子苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。栀子的TLC见图1。

1～3.供试品；4.栀子对照药材；5.栀子苷对照品；6.阴性对照

图1 栀子的TLC色谱

2.2 黄芪的TLC鉴别

取双冬胶囊(20130301、20130302、20130303)内容物各5g，分别加水30mL，超声处理15min, 水溶液连同残渣一起移置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20mL，分取正丁醇液(水液备用)，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，分取正丁醇液(水洗液与上次水液合并，留作“2.3”麦冬的TLC鉴别用)，蒸干，残渣加甲醇15mL使溶解，滤过，将滤液加入中性氧化铝柱(100～120目，10g，内径10～15mm)，用甲醇30mL洗脱，收集洗脱液，将收集的洗脱液滤过，滤液水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为黄芪TLC供试品溶液。另取黄芪对照药材3g，加甲醇20mL，加热回流1h，回流液滤过，将滤液加入中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)，用40%甲醇100mL洗脱，收集洗脱液，将收集的洗脱液于水浴上蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20mL，将2次提取的正丁醇液合并，再用正丁醇饱和的水洗涤合并正丁醇液2次，每次20mL，弃去水液，水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为黄芪对照药材溶液。取缺黄芪药材的阴性样品，照上法制成缺黄芪阴性对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述六种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，至显色清晰，置日光下及紫外光灯(365nm)下检视。结果显示，供试品色谱中，在与黄芪对照药材色谱和黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；阴性对照无干扰。黄芪的TLC日光下检视见图2，紫外光灯(365nm)下检视见图3。

1～3.供试品；4.黄芪对照药材；5.黄芪甲苷对照品；6.阴性对照溶液

图2 黄芪的TLC色谱(日光下检视)

1～3.供试品；4.黄芪对照药材；5.黄芪甲苷对照品；6.阴性对照溶液

图3 黄芪的TLC色谱(紫外光灯(365nm)下检视)

2.3 麦冬的TLC鉴别

取“2.2”项下下正丁醇提取后的水液，浓缩至约20mL，加盐酸1mL，加热回流1h，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20mL，分取三氯甲烷溶液，浓缩至约1mL，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，加乙醇20mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次提取用水饱和的正丁醇20mL，弃去正丁醇液，水液加盐酸1mL，照上法制成麦冬对照药材溶液。再取缺麦冬药材的阴性样品，同法制成缺麦冬阴性对照溶液。按照TLC法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述五种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，至显色清晰。结果显示，供试品色谱中，在与麦冬对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；阴性对照无干扰。麦冬的TLC见图4。

1～3.供试品；4.麦冬对照药材；5.阴性对照图4 麦冬的TLC色谱

2.4 苦木的TLC鉴别

取双冬胶囊(20130301、20130302、20130303)内容物各5g，研细，加甲醇30mL，浸渍过夜，滤过，滤液浓缩至约1mL，作为供试品溶液。另取苦木对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺苦木药材的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述五种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果显示：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；阴性对照无干扰。苦木的TLC见图5。

1～3.供试品；4.苦木对照药材；5.阴性对照图5 苦木的TLC色谱

3 讨论

双冬胶囊为中药六类新药，处方由栀子、黄芪、麦冬、苦木等六味药材组成。本实验采用薄层色谱法对处方中的栀子、黄芪、麦冬、苦木四味药材分别进行定性研究。实验中采用超声处理及加热回流两种方法提取药材中的有效成分，反复比较各种显色方法，最后筛选出正文的方法。结果表明，该方法灵敏度高，专属性强，斑点清晰，适用于双冬胶囊中栀子、黄芪、麦冬、苦木四味药材的薄层鉴别。

[1] 刘训红.中药材薄层色谱鉴别[M].天津：天津科学技术出版社，1990:150.

[2] 吴玛琍.中药饮片鉴别[M].天津：天津科学技术出版社，1992:136.

[3] 马广慈，唐任寰，郑斯成,等. 药物分析方法与应用[M].北京：科学出版社，2000：547.

[4] 孙立华，吴爱英，张春辉.康媛颗粒质量标准的研究[J].中国药品标准，2006,7(1)：66.

[5] 陈代贤，郭月秋等.中药真伪质量快速影像检定(上册)[M].北京：人民卫生出版社，2012：355.

(责任编辑：魏 晓)

2015-05-20

贵州省中药现代化科技产业专项项目(黔科合成字[2013]5010号)

薛静(1985-)，女，贵州远程制药有限责任公司工程师，研究方向为药品质量标准。

黄刚(1965-)，男，贵州远程制药有限责任公司总工程师，研究方向为药品生产和技术管理。

R284

A

1673-2197(2015)17-0030-02

10.11954/ytctyy.201517015