夏枯草注射液对大鼠的长期毒性研究

侯丽丽，程建国，米彦飞，晏永新

（1.山西省兽药监察所，太原030027；2.江西新世纪民星动物保健品有限公司，南昌330096）

夏枯草注射液对大鼠的长期毒性研究

侯丽丽1，程建国1，米彦飞1，晏永新2

（1.山西省兽药监察所，太原030027；2.江西新世纪民星动物保健品有限公司，南昌330096）

为了解长期使用夏枯草注射液对机体的毒性反应，通过给大鼠肌内注射夏枯草注射液，在给药4周和停药2周内，观察大鼠一般行为活动等情况，进行血液学、血液生化学和主要脏器病理学检查，考察夏枯草注射液的长期毒性。结果显示，各组大鼠在给药期间和恢复期内，大鼠一般情况行为活动和粪便等均无异常变化，血液学、血液生化学和主要脏器病理学检查，均无明显变化。因此，连续大鼠肌内注射夏枯草注射液未见明显毒性反应，说明夏枯草注射液具有较高的临床用药安全性。

夏枯草注射液；大鼠；长期毒性

夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效，主要用于目赤肿痛、乳痈和疮肿［1］。夏枯草在古典书籍中均有记载，是常用的清热泻火药，可用于治疗温病［2］。夏枯草主要含有三萜及其苷类、甾醇及其苷类、黄酮类、香豆素、有机酸、挥发油及糖类等成分［3－4］，现代药理研究表明，该药具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗过敏、降压、降糖及对免疫系统等作用［5－7］。陈壁锋等［8］研究了夏枯草浸膏的长期毒性，未见夏枯草注射液的长期毒性研究报道。因此，本试验拟研究夏枯草注射液对大鼠的长期毒性试验，以了解长期使用夏枯草注射液对机体的毒性反应，指导临床长期用药的安全性。

1 材料

1.1 试验动物 清洁级SD种大鼠80只，体重80～100 g，雌雄各半，由江西中医学院实验动物中心提供。

1.2 药品、试剂与仪器 夏枯草注射液（10 mL／支，2 g生药／mL），江西新世纪民星动物保健品有限公司，批号：20100501；血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea），济南希森美康医用电子有限公司；十万分之一电子分析天平（AB204－N，METTLER TOLEDO）；全自动生化分析仪（Sysmex chemix－180，日本 FURUNO ELECTRIC）；血细胞计数仪（SWELAB AC900＋，瑞典Boule Medical AB）。

2 方法

2.1 分组 将大鼠随机分为大、中、小剂量组及对照组，每组20只。试验组给药剂量为0.2 mL／100 g体重，每天1次肌内注射，连续给药4周，对照组给予等体积生理盐水。每天观察动物精神状态、行为、活动、毛色、二便等一般体征，每7 d称重1次，并依体重变化调整药量。给药结束后，每组取14只大鼠，禁食12 h，进行血液学指标检查、血液生化学指标检查，系统尸检和病理组织学检查。各组余下动物停药进行可逆性观察2周后，同前批动物一样进行处理［9］。

2.2 观察和检测指标

2.2.1 一般观察 每天观察并记录各组动物一般行为活动等情况。

2.2.2 血液学指标检查 大鼠尾静脉取血，用血细胞计数仪测定血红蛋白（HGB）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、白细胞（WBC）及分类。

2.2.3 血液生化学指标检查 大鼠采血，分离血浆，用生化分析仪测定血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）等指标。

2.2.4 系统尸检和病理组织学检查 对心、肝、脾、肺、肾进行称重及肉眼观察有无异常，分别计算每100 g动物体重的脏器比重量（g／l00 g体重）即脏器系数，并对上述脏器用10%福尔马林固定、切片厚5 μm、H·E染色，用200倍显微镜观察进行病理组织学检查。

2.3 统计学方法 采用SPSS 20.0进行统计分析。数据经过方差齐性检验，用均数±标准差表示，组间差异比较用独立样本t检验。

3 结果

3.1 一般观察 给药期间和停药2周内，各组大鼠精神、行为、活动、毛色、二便等一般体征均未见异常，也未出现因药物毒性而致死亡的情况。

3.2 体重 各给药组，给药4周与停药2周后的体重明显增长，经t检验，与对照组比较无显著变化（P＞0.05）（表1、表2）。

表1 夏枯草注射液对大鼠给药4周体重增长的影响结果表 （g）（±s）

表1 夏枯草注射液对大鼠给药4周体重增长的影响结果表 （g）（±s）

同列数据标注字母不同者差异显著，以下表同

组别 0周 1周 2周 3周 4周对照 97.32±3.24a 118.22±5.92a 128.62±5.50a 138.45±8.21a 156.53±19.32a小剂量 97.34±3.01a 113.26±5.64a 127.75±6.56a 135.26±7.58a 159.50±18.16a中剂量 97.35±3.62a 116.29±5.98a 130.38±6.37a 136.42±3.80a 156.72±16.32a大剂量 96.53±3.45a 110.98±5.23a 129.65±8.61a 133.39±6.91a 151.61±16.62a

表2 夏枯草注射液对大鼠停药2周体重增长的影响结果表 （g）（±s）

表2 夏枯草注射液对大鼠停药2周体重增长的影响结果表 （g）（±s）

组别 0周 1周 2周对照 157.43±17.22a 170.13±16.13a 188.30±15.87a小剂量 159.15±16.25a 174.21±18.63a 189.60±18.32a中剂量 158.56±15.46a 173.14±20.65a 183.50±17.36a大剂量 156.21±16.53a 174.01±20.89a 185.53±11.99a

3.3 血常规指标变化 各给药组，给药4周后与停药2周后的红细胞（RBC）计数、白细胞（WBC）计数、白细胞分类（DC）、血红蛋白（HGB）含量的检测结果和凝血时间，经t检验，与对照组比较均无明显变化（P＞0.05）（表3）。

3.4 血清生化指标变化 各给药组，给药4周后与停药2周后AST、ALT、Crea、BUN的检测结果，经t检验，与正常对照组比较无明显变化（P＞0.05）（表4）。

表3 夏枯草注射液对血常规指标的影响结果表 （±s）

表3 夏枯草注射液对血常规指标的影响结果表 （±s）

指标 时间 n 对照组 小剂量组 中剂量组 大剂量组RBC／（1012／L）给药4周 14 8.56±1.87a 8.53±189a 8.25±1.23a 8.89±1.67a停药2周 6 8.54±1.12a 8.31±1.63a 8.64±1.26a 8.36±1.86aHGB／（g·L－1）PLT／（109／L）WBC／（109／L）L／%给药4周 14 118.30±12.22a 114.32±23.43a 117.32±16.35a 114.20±19.15a停药2周 6 116.55±12.78a 111.23±11.21a 117.74±35.56a 116.31±18.66a给药4周 14 556.5±42.44a 575.2±46.03a 599.0±55.13a 560.3±153.43a停药2周 6 654.3±88.45a 529.3±61.78a 598.3±191.75a 619.7±154.36a给药4周 14 6.97±1.24a 6.53±1.23a 6.54±1.56a 6.44±1.78a停药2周 6 6.75±1.68a 6.24±1.87a 6.53±1.51a 6.32±1.86a给药4周 14 90.01±3.91a 82.23±6.50a 83.54±2.52a 85.76±5.85a停药2周 6 90.52±4.35a 83.65±6.89a 90.30±4.56a 87.52±5.97aN／%给药4周 14 6.21±1.17a 7.35±3.52a 7.21±4.31a 7.54±2.85a停药2周 6 6.81±0.32ab 5.56±4.32b 6.98±7.95a 6.65±3.36ab

表4 夏枯草注射液对血清生化指标的影响结果表 （±s）

表4 夏枯草注射液对血清生化指标的影响结果表 （±s）

指标 时间 n 对照组 小剂量组 中剂量组 大剂量组ALT／（U·L－1）给药4周 14 45.52±6.56a 44.35±5.43a 46.44±1.33a 46.32±15.79a停药2周 6 53.43±3.32a 53.81±20.12a 49.23±8.50a 48.34±9.78aAST／（U·L－1）BUN／（mmol·L－1）给药4周 14 98.16±27.12ab 99.53±18.67a 96.65±10.23b 102.31±14.63ab停药2周 6 96.87±55.23a 105.21±19.23a 98.42±20.14a 101.65±13.87a给药4周 14 5.01±1.67a 6.78±1.34a 6.33±2.24a 6.44±2.10a停药2周 6 5.81±1.23a 6.32±1.31a 6.68±2.02a 6.64±1.65aCrea／（μmol·L－1）给药4周 14 51.87±3.47a 59.34±3.21a 58.83±5.62a 58.31±2.12a停药2周 6 54.91±3.23a 59.38±7.34a 59.75±6.62a 58.40±2.15a

3.5 系统尸检和病理组织学 给药30 d后与停药2周后，动物尸体解剖，肉眼逐个观察各脏器，未见异常变化。取大鼠心、肝、脾、肺、肾分别称重，计算出脏器系数，各组之间的脏器系数无明显变化（P＞0.05）（表5）。各脏器病理组织学检查未发现异常（图1）。

表5 夏枯草注射液对脏器系数的影响结果表 （±s）

表5 夏枯草注射液对脏器系数的影响结果表 （±s）

指标 时间 n 对照组 小剂量组 中剂量组 大剂量组心给药30 d 14 0.371±0.0430a 0.367±0.0213a 0.334±0.0252a 0.343±0.0659a停药2周 6 0.365±0.0532a 0.360±0.0451a 0.343±0.0879a 0.361±0.0443a肝 脾肺给药30 d 14 3.361±0.2045a 3.356±0.6150a 3.321±0.5922a 3.225±0.0198a停药2周 6 3.378±0.3442a 3.398±0.2654a 3.329±0.5632a 3.578±0.7643a给药30 d 14 0.370±0.3215a 0.329±0.3213a 0.340±0.2100a 0.332±0.0897a停药2周 6 0.371±0.1223a 0.368±0.2391a 0.345±0.2112a 0.334±0.0768a给药30 d 14 0.640±0.12357a 0.612±0.1321a 0.632±0.1766a 0.634±0.0754a停药2周 6 0.630±0.5467a 0.632±0.1124a 0.623±0.1543a 0.623±0.1236a肾给药30 d 14 0.632±0.48776a 0.632±0.658a 0.623±0.1279a 0.628±0.0974a停药2周 6 0.683±0.4334a 0.653±0.321a 0.654±0.1349a 0.670±0.1732a

图1 主要脏器组织病理切片结果图

4 讨论与小结

亚慢性毒性试验是指在试验动物部分生存期内，每日反复接触受试物后在一定时期内所引起的不良反应，目的是在估计和评价某种药物的毒性时，获得受试物急性毒性资料后，还需进行亚慢性毒性试验。通过该试验可获得一定时期内反复接触受试物后引起的健康效应、受试物作用靶器官和受试物体内蓄积能力资料，为临床设计动物用药剂量和一些观察指标提供参考依据［10－11］。 陈壁锋等［8］研究表明，给大鼠口服夏枯草浸膏90 d，其外观体征、粪便、尿液、行为、活动、步态均未出现异常，未出现动物死亡，体重、摄食量及食物利用率指标、血液学、血液生化学指标与对照组比较差异不显著性，肝、脾、肾、睾丸的重量及脏／体比值与对照组比较差异不显著，未见与受试物有关的病理改变，与本文研究结果一致。

试验所采集的数据包括健康状况、体重情况，以及血液学、血液生化学等参数。夏枯草注射液大鼠连续给药4周和停药2周后，大、中、小剂量组均未见明显的毒性反应。试验大鼠在健康状况、体重情况，以及可能的急性反应、血液学、血液生化学等参数指标与对照组相比无显著性差异，剖检和组织学观察主要内脏器官的形态、组织结构均未发现异常变化，故未发现夏枯草注射液明显的长期毒性。试验结果表明夏枯草注射液安全范围大，具有较高的临床用药安全性。

参考文献：

［1］中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二○一○年版二部［S］.

［2］刘钟杰，许剑琴.中兽医学（第三版）［M］.北京：中国农业出版社，2002：168.

［3］秦 蕊，陆 军.夏枯草的化学成分及药理作用的研究进展［J］.中国医药指南，2012，10（36）：435－436.

［4］杜 晖，王春雨.X－5型大孔树脂分离纯化夏枯草中两种五环三萜酸［J］.时珍国医国药，2008，19（6）：1416－18

［5］邓子煜，徐先祥，张小鸿，等.夏枯草药理学研究进展［J］.安徽医学，2012，33（7）：937－939.

［6］王放银，段林东，赵良忠.夏枯草抗菌成分的提取和抗菌效果的研究［J］.西南农业大学报，2004，26（6）：7743.

［7］马德恩，王竹梅，马爱英.夏枯草的抗炎作用及其对免疫器官影响的研究［J］.山西医药杂志，1983，12（2）：4－7.

［8］陈壁锋，赵 敏，杨国光，等.夏枯草急性和亚慢性毒性［J］.中国毒理学会第六届全国毒理学大论文，2013.

［9］陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社.2006：110－113.

［10］郭迎春，邸 静，杨 英，等.人参叶口服液对靶动物肉鸡的安全性试验［J］.中国兽医杂志，2011，47（5）：27－29.

［11］易金娥，袁 慧，袁莉芸，等.阿维菌素微囊对大鼠急性和亚慢性毒性试验［J］.动物医学进展，2008，29（2）：27－30.

（编 辑：陈 希）

Effects of Prunella Vulgaris Injection on the Long－term Toxicity of Rats

HOU Li－li1，CHENG Jian－guo1，MI Yan－fei1，YAN Yong－xin2
（1.shanxi Institute of veterinary Drug Control，Taiyuan030027，China；2.Jiangxi new century minxing animal health products co.，LTD，Nanchang330096，China）

In order to understand the toxic reaction and degree on organism of rats by long－term use of prunella vulgaris injection，so as to we can guide the longterm clinical medication safety.Rats were given prunella vulgaris injection by intramuscular route，at the end of 4 weeks and within 2 weeks，observing the general behaviour of rats，using techniques of hematology and biochemical experimental，investigating the long－term toxicity of prunella vulgaris injection.The results showed that the general conditions，activities and faeces of the rats that both in the dosing period and recovery period had no abnormal change，hematology，biochemical experiment and pathological examination of main organs had no obvious abnormal change.Therefore，continuous intramuscular injection of prunella vulgaris had no obvious toxicity，which showed the prunella vulgaris injection were safety.

prunella vulgaris injection；rats；long－term toxicity

2015－02－09

A

1002－1280（2015）04－0051－05

S853.74

侯丽丽，高级兽医师，从事中兽药检测及方法研究工作。E－mail：kyzp_090＠163.com