一起羊化脓性链球菌病的诊断与防治

郝志香 刘海林

(河南省新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453003)

2015年9 ～10月，河南省新乡市某羊场所养山羊个别羊只皮肤上出现脓肿疙瘩，一个多月后，发病情况并没有好转，而其他羊只陆续被感染，随后经我中心技术人员现场调查和实验室诊断确诊为链球菌感染。由于即时采取了综合的治疗和防控措施，羊化脓性链球菌病得到了有效控制，降低了经济损失，现将具体情况报告如下：

1 发病情况

该羊场共养殖有80只山羊，起初只有个别羊只发病，后陆续感染，发病初期病羊有一过性精神不好，食欲下降，体温41℃，3天后恢复正常，所以养殖户没有进行治疗，半月后发现羊只精神沉郁，食欲减退，逐渐消瘦，个别羊颈部和腹部开始出现玉米粒大小疙瘩，而且疙瘩越来越大，最后肿大到拳头大小，用刀片刺破后流出乳白色浓汁，病羊眼结膜潮红，鼻孔又少量脓性鼻涕，无羊只死亡。

2 实验室诊断

2.1 直接染色镜检

无菌操作取病变处浓汁直接涂片，用革兰氏染色方法进行染色后直接显微镜下观察，发现视野中有2个或3个蓝紫色圆形球菌成线状排列，视野中始终未见其他细菌。

2.2 细菌培养

将浓汁经灭菌生理盐水稀释后分别接种普通营养琼脂平板和鲜血琼脂平板，进行常规培养和厌氧培养。24小时观察是，只在划过线的地方出现灰白色划线痕迹，没有见明显菌落，48小时观察，发现在划线痕迹附近长出细小、灰白色、表面光滑、边缘整齐的菌落，菌落大小为0.3mm左右，在血琼脂上菌落多于普通琼脂，厌氧培养长出的菌落多于通培养，但培养出的细菌没有在血琼脂上产生溶血现象。

2.3 生化鉴定

分解葡萄糖，产酸不产气。不分解菊糖、果糖、半乳糖、密二糖、赤藓醇、卫矛醇、山梨醇，不被胆汁溶解，触酶试验阴性，最后认定为链球菌。

2.4 PCR检测

图1 PCR鉴定链球菌

用接种环刮取部分菌落放于装有1mL灭菌生理盐水的EP管中按照常规DNA提取步骤进行操作，然后进行扩增：94℃5 min后，94℃45s，56℃45s，72℃45s循环35次，最后72℃延伸10min。试剂购自河南省动物疫病预防控制中心。电泳后用凝胶成像系统观察（江苏捷达）。结果显示在Marker2000标示的500bp到750bp之间出现了一条亮带，说明菌液中含有链球菌。

3 药敏试验

药敏试验采用纸片法，药敏片购自杭州天和微生物试剂有限公司，细菌接种量和具体操作方法参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）规定的Kirby-Bauer纸片扩散法敏感试验标准进行，结果判定参考杭州天和产品使用说明书提供的标准判定，具体分离株药敏试验结果见表1。该株链球菌对大部分青霉素和喹诺酮类药物敏感，对少部分青霉素类耐药，对四环素类和林克酰胺类以及大部分头孢类药物耐药，其中喹诺酮类药物并不能完全杀死分离株细菌，根据药敏试验结果结合实际治疗方法宜选用青霉素G和头孢噻吩进行治疗。

表1.分离株药敏试验结果

4 治疗

将脓包用灭菌手术刀纵向划开小口挤出浓汁，用3%双氧水对皮肤下的脓包进行冲洗，边冲洗边向外挤压液体，然后用灭菌生理盐水再次冲洗，最后根据药敏试验结果，用青霉素G敷于脓包内，同时用头孢噻吩肌注，控制全身感染。其他健康羊用阿莫西林饮水3-5天，然后对临床健康羊进行链球菌疫苗免疫，对羊圈和饮水用具等进行彻底清洗消毒。

5 讨论

从患病山羊病变浓汁分离出的病菌，根据发病情况，镜检结果、培养特性、生化试验和PCR等确定为化脓性链球菌。该病发生后使用青霉素G和头孢噻吩联合用药病情很快得到控制。药敏试验表明，该病原菌对部分常规药物敏感，不过对部分常规药物已经产生耐药性。

另外该场之所以会发生链球菌感染，主要是因为：1.当地羊的饲养量不大，大部分养羊户对疫苗防疫没有清醒的认识，往往防疫三联四防后就认为万事大吉；2.饲养条件差，冬春季比较寒冷，没有做好保暖防寒的措施，圈舍比较潮湿；3.没有严格的消毒和管理措施，从而导致病菌滋生，时常引起疾病的发生。今后，当地养羊户应当更加科学的进行羊的饲养管理，提高饲养条件，加强免疫和消毒工作，这样才能减少疫病发生频率，降低养殖风险，获得更大的利润空间。