中药“兔稳康”对兔瘟免疫增强作用的试验观察

王中杰， 王传春， 苏 丹， 刘建胜（山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊261061）

在养兔生产中，兔瘟(RHD)潜伏期短、发病急、死亡率高，给养兔业造成巨大的损失。我国自行研制的兔瘟组织灭活苗对预防兔瘟的爆发起到了积极的作用，但也有一些地区的养兔场由于机体的整体免疫水平较低，经过RHD疫苗免疫后仍发生本病，为了更好地提高免疫效果，降低兔瘟的发生，我们研制了中药方剂兔稳康来提高该疫苗的免疫效果，现报道如下。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 中药及疫苗 兔稳康由防风、黄芪、茯苓、白术组成（购于北京同仁堂医药公司）。按配方比例称量粉碎，混匀过60目筛，塑料袋分装密封备用，试验时按设计比例添加饲料中混均制成颗粒饲喂。RHD疫苗由山东滨州华宏生物制品有限责任公司馈赠（批号131211）。人“O”型红细胞由山东省潍坊市人民医院化验科馈赠。

1.1.2 RHD种毒 为山东畜牧兽医职业学院分离的自然野毒株。经易感家兔传代，无菌采取有典型病变的肝脏，反复冻溶后，用组织匀浆机绞碎，加生理盐水稀释成1﹕10的乳剂，加双抗4℃冰箱过夜，－15℃低温保存备用。血凝效价（HA） 不低于1﹕2。

1.1.3 凝集抗原 取人工感染死亡兔肝组织，以PBS液作1﹕10倍稀释匀浆，反复冻融3次，加1/3体积氯仿摇均置室温作用2h，离心20min，取上清液，以血凝试验（HA） 测定抗原凝集价，以最高凝集价除以4，即为4单位凝集抗原。

1.2 试验方法

2.1 试验设计与分组 试验兔由山东益嘉集团蒙阴县益达兔业有限公司提供，选择40日龄未免疫的长毛兔120只，随机分为4组，每组30只。Ⅰ组为对照组，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为试验组。各组家兔颈部皮下接种RHD疫苗1ml/只，免疫前2天试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别饲喂添加1%、2%和4%中药免疫增强剂“兔稳康”[13，14，15]，连用7天，对照组不用药。试验期间每天观察记录兔临床症状，饲养管理条件一致。

2.2 样品的采取与处理 免疫后20天每只兔心脏采血10mL，然后分别放入加有肝素抗凝剂和无抗凝剂的干燥灭菌小试管内（分离血清） 测定血凝抗体水平和T淋巴细胞阳性率。

T淋巴细胞阳性率的测定方法、结果判定方法与标准参照何昭阳等老师编写的《动物免疫学实验技术》 （2002版）；血凝抗体的检测方法与步骤参照试剂盒说明书操作。

2.3 数据统计分析：用SPASS统计软件进行方差分析，用邓肯氏法进行多重比较。

3 试验结果

3.1 兔稳康对兔T淋巴细胞阳性率的影响 兔稳康对T淋巴细胞阳性率的影响结果见表1。在兔瘟疫苗免疫前以高、中、低剂量添加饲喂中药免疫增强剂兔稳康，20天后均能显著提高其T淋巴细胞的阳性率，即试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与对照组比较差异显著（P＜0.05）；Ⅲ、Ⅳ组之间比较差异不显著（P＞0.05），但显著高于Ⅱ组（P＜0.05）。故以2.0%剂量添加兔稳康饲喂较合适。T淋巴细胞染色见图1、图2、图3、图4。

表1 T 淋巴细胞阳性率 （%）

图1：对照组血液T淋巴细胞

图2：Ⅱ组血液T淋巴细胞

图3：Ⅲ组血液T淋巴细胞

图4：Ⅳ组血液T淋巴细胞

3.2 兔稳康对兔瘟HI抗体的影响 中药免疫增强剂对兔HI抗体的影响结果见表2。统计分析表明，在兔瘟疫苗免疫时以高、中、低剂量添加中药免疫增强剂兔稳康，第20天测定血液中HI抗体水平，均能显著提高试验组，即试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与对照组Ⅰ比较差异显著（P＜0.05）。试验Ⅲ、Ⅳ组与试验Ⅱ组之间比较差异显著（P＜0.05）；试验Ⅲ、Ⅳ组之间比较差异不显著（P＞0.05）。故以2.0%剂量添加中药制剂饲喂较适宜。

表2 HI 抗体水平检测结果 （log2）

4 讨论

自拟方剂兔稳康由防风、黄芪、茯苓、白术四味药物组成，黄芪、白术都具有补脾益气的作用，现代研究表明黄芪有强心作用，并对痢疾杆菌、溶容血性链球菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌等有抑制作用；白术利尿、轻度降血糖作用；茯苓能渗湿利尿，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等有抑制作用，四药合用，共同起到健脾益气、利水渗湿的作用。

表1表明，兔稳康可以提高机体的T淋巴细胞阳性率，这与其健脾益气的功效有关，其作用机理有待于进一步研究。试验时我们还检测了兔子的HI抗体水平，试验组的抗体有效滴度明显高于对照组，虽然HI抗体与保护性抗体不是同一种抗体，但两者之间有平行消长关系，因此检测HI抗体效价可间接的推测保护性抗体水平。兔稳康可以作为RHD疫苗的免疫增强剂，以2.0%剂量添加较为合适。