FLT3-ITD突变急性髓系白血病的临床及免疫表型特征分析

刘延方，朱颖超，张秋堂，李 涛，马 杰，谢新生，孙 慧，孙 玲，万鼎铭

1)郑州大学第一附属医院血液内科 郑州 450052 2) 郑州大学第一附属医院血液病研究室 郑州 450052

FLT3-ITD突变急性髓系白血病的临床及免疫表型特征分析

刘延方1)△，朱颖超1)，张秋堂2)，李 涛2)，马 杰1)，谢新生1)，孙 慧1)，孙 玲1)，万鼎铭1)

1)郑州大学第一附属医院血液内科 郑州 450052 2) 郑州大学第一附属医院血液病研究室 郑州 450052

△男，1962年5月生，博士，教授，主任医师，研究方向：血液病的基础与临床，E-mail：liuyf371@163.com

FLT3-ITD突变；急性髓系白血病；免疫表型

人FLT3(fms-like tyrosine kinase 3)基因是Ⅲ型受体酪氨酸激酶 (receptor tyrosine kinase, RTK) 家族成员之一。在正常人骨髓中，FLT3基因的表达仅限于CD34+干/祖细胞，其与多种胞浆蛋白作用介导一系列细胞内信号传导，促进细胞的增殖与分化[1]。FLT3内部串联重复(internal tandem duplication, ITD)突变是FLT3基因常见的一种突变类型，具有FLT3-ITD突变(FLT3-ITDm+)的急性髓系白血病(AML)患者临床治疗反应差，预后不良[2]，但对其免疫表型特征报道的较少。该研究回顾性分析了43例FLT3-ITDm+与109例无FLT3-ITD突变(FLT3-ITDm-)的AML患者的临床与免疫表型特征，报道如下。

1 对象与方法

1.1 病例来源 收集2013年5月到2014年3月郑州大学第一附属医院收治的FLT3-ITDm+AML患者43例及同期于该院诊断及治疗的FLT3-ITDm-AML患者109例。排除确诊为急性早幼粒细胞白血病、急性混合细胞白血病及实验室检查资料不完整的患者。AML诊断和疗效标准参照WHO[3]和张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》[4]。

1.2 免疫表型分析 采用4色多参数流式细胞仪进行免疫表型分析，共检测了CD2、CD3、CD7、CD4、CD8、CD10、CD19、CD20、CD79a、CD16、CD56、CD13、CD33、CD14、CD64、CD15、CD117、CD11b、cMPO、CD34、CD38、HLA-DR、cCD3等23个抗原。以CD45/SSC设门分析白血病细胞免疫表型，计算抗原的表达比例。

1.3 基因突变检测 采用PCR扩增产物联合基因测序法检测FLT3基因的ITD突变[5]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0进行数据分析。两组性别构成的比较采用χ2检验；年龄及血红蛋白(Hb)呈正态分布，两组间的比较应用两独立样本t检验。白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、骨髓原始细胞比例及抗原表达比例等指标不符合正态分布，数据以[M(P25～P75)]表示，两组间的比较应用秩和检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 FLT3-ITDm+与FLT3-ITDm-AML患者临床特征的比较 见表1。与FLT3-ITDm-AML患者相比，FLT3-ITDm+AML患者WBC、骨髓原始细胞比例显著增高，两组在发病年龄、性别构成、Hb及PLT方面差异无统计学意义。

2.2 FLT3-ITDm+与FLT3-ITDm-AML患者白血病细胞免疫表型的比较 见表2。FLT3-ITDm+与FLT3-ITDm-AML患者共有5个白血病细胞抗原表达的差异存在统计学意义。其中在FLT3-ITDm+AML患者中表达显著高于FLT3-ITDm-AML患者的抗原包括髓系抗原CD33、CD11b和淋系抗原CD7；在FLT3-ITDm+AML患者中表达显著低于FLT3-ITDm-AML患者的抗原包括髓系抗原CD15和干/祖细胞抗原CD34。

表1 FLT3-ITDm+与FLT3-ITDm-AML患者临床特征的比较

表2 FLT3-ITDm+与FLT3-ITDm- AML患者免疫表型的比较 %

3 讨论

FLT3-ITD突变是FLT3基因最常见的一种突变类型，国内报道15.9%～20.8%的成人AML患者存在FLT3-ITD突变[6-7]，低于国外报道(25%～31%)[2，8]，提示可能存在种族差异。由于FLT3-ITD突变引发RTK持续激活，使细胞发生自发性、非受体依赖性的增殖，导致AML患者外周血WBC增高[9]。该组资料亦显示FLT3-ITDm+患者就诊时外周血WBC显著高于FLT3-ITDm-患者，提示FLT3-ITD突变可能参与了白血病细胞的增殖分化或者抑制了白血病细胞的凋亡，其具体机制需要进一步研究。临床资料[10-12]表明，FLT3-ITD突变是AML患者重要的预后影响因素。

Munoz等[13]发现FLT3-ITDm+AML患者白血病细胞高表达CD13、CD33、CD11b、CD64和CD4，低表达CD34和CD117，提示FLT3-ITDm+AML患者白血病细胞免疫标志紊乱。该研究观察到FLT3-ITDm+AML患者的白血病细胞高表达髓系抗原CD33、CD11b及淋系抗原CD7，低表达髓系标志CD15和干/祖细胞抗原CD34。文献报道[2,14]淋系抗原CD7是FLT3-ITDm+AML细胞最常见的差异性表达抗原。FLT3基因在单核系细胞的分化发育过程中表达，并促进其增殖[10]。FLT3-ITD突变在伴单核细胞分化发育障碍的M5亚型中的表达显著增高[15]。作者亦发现单核系抗原CD11b在FLT3-ITDm+AML患者中高表达，与Munoz等[13]研究结果一致。CD11b是AML预后不良的标志之一[16]，因此，FLT3-ITD突变与 AML患者白血病细胞高表达CD11b之间是否存在内在的病理生理学关联需要进一步研究。上述结果进一步表明FLT3-ITDm+AML白血病细胞具有与其他AML细胞不同的细胞表面抗原分化紊乱。

总之，研究FLT3-ITDm+AML患者的临床及免疫表型特征有助于临床医生早期识别这些高危AML患者，并及时采取有效的诱导缓解及治疗方案，提高诱导缓解率，为后续治疗如造血干细胞移植等争取时机，使患者受益。

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(2014-29-26 收稿 责任编辑王 曼)

10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.037