连琼兰 福建省永春县农业局东关畜牧兽医站 362605
奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)为营腐生人畜共患病病原菌,在人和动物的肠道及自然环境中广泛分布,作为条件致病菌,可引起人和动物多种食物中毒及炎症[1-2]。近年来,雏鸡暴发此病增多,不仅造成鸡只死亡,还导致雏鸡愈后生长缓慢,影响经济效益,种鸡感染后还可以垂直传播,导致雏鸡的大批死亡,给畜禽养殖造成巨大经济损失,因此应引起高度重视[3-5]。2014年12月,永春县某养鸡场的2 500羽雏鸡出现腹泻症状,经剖检和实验室检查诊断为雏鸡奇异变形杆菌病。现报道如下。
2014年12月,永春县某养殖场2 500羽雏鸡,购入时鸡苗精神状况良好,按照常规程序进行了疫苗的接种,饲养至25日龄时发病,表现食欲减退、腹泻严重,伴随有死亡,用恩诺沙星、青霉素等药治疗效果甚微,后经检查确诊为奇异变形杆菌感染,根据药敏试验结果改用敏感药物进行治疗,病死率控制在14%左右。
患鸡初期精神萎顿,食欲减退,少数鸡出现张口呼吸,翅膀下垂,垂头缩颈,羽毛蓬乱,站立不稳且喜卧,后期则排灰白色或黄绿色稀粪或水样便,多数患鸡出现腿瘫痪,少数病例表现有神经症状,头向上弯曲。患鸡1~3 d内死亡。
取20羽患鸡进行剖检,多数患鸡表现为消瘦,营养不良;肺脏瘀血呈暗红色;脾脏肿大,表面有出血点;肝脏稍肿大,质地稍软,易碎,表面有红黄相间条纹;肾脏稍肿大有尿酸盐沉积,表面点状出血,呈大理石花斑状;脑膜充血、出血。
4.1 涂片镜检 无菌取脾、肝、心血组织涂片,革兰氏染色,镜检可见大量形态大小不一,单个或成对排列,革兰氏阴性,无荚膜,无芽胞,呈球状、球杆状、杆状或丝状杆菌。
4.2 细菌分离培养 无菌取脾、肝及胸、腹腔渗出物,接于普通琼脂、麦康凯琼脂培养基和SS琼脂培养基上,37℃培养8 h后长出灰白色、圆形、透明单菌落,有腐败臭味,14 h后,迁徙生长现象明显,平板表面布有菌膜,培养物在光照下可出现淡黄绿色的荧光。在麦康凯培养基上长出扁平的粉红色菌落。SS培养基上为圆形、淡橘红色菌落,中心有黑点。革兰氏染色镜检,为多形态革兰氏阴性杆菌。
4.3 药敏试验 采用常规纸片法对分离菌进行药敏试验。结果分离菌对头孢噻肟、庆大霉素和氟哌酸敏感;对卡那霉素、先锋霉素中度敏感;对青霉素、新霉素、妥布霉素、强力霉素、万古霉素、复方新诺明、四环素、红霉素等不敏感。
4.4 生化试验 生化试验结果表明该菌能分解葡萄糖,产酸、产气;分解木糖产酸;鸟氨酸脱羧酶、氨酸脱羧酶、尿素酶、M.R.试验呈阳性,靛基质试验、V-P试验呈阴性;能产生硫化氢,还原硝酸盐,利用枸橼酸盐;不分解蔗糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、卫矛醇、水杨苷,不产生吲哚。
4.5 血清学检查 分离菌经过夜培养后作为待检抗原。将其与兔抗鸡P.mirabilis高免血清进行平板凝集试验[6],3~4 min后观察结果,同时以无菌的PBS和鸡P.mirabilis诊断抗原分别作阴性和阳性对照。结果显示:兔抗鸡P.mirabilis高免血清均出现平板凝集反应阳性,且对照组呈正确结果。
4.6 动物试验 分离菌经24 h纯培养后,取10羽10日龄雏鸡腹腔接种0.5 mL/羽,对照组接种等量的灭菌PBS。攻毒后14 h表现腹泻等症状,伴随有死亡;12 d内试验组陆续死亡,对照组正常。剖检可见死亡雏鸡肠道出血,泄殖腔和直肠出血严重,呈现出血斑;肾、脾肿大,呈点状出血;肝表面有红黄相间条纹。尸体剖检与自然发病的病变一致,死亡雏鸡进行组织触片染色镜检和划线培养,于内脏各器官分离到攻毒菌。
综合发病情况、临床症状、剖检变化和实验室检查结果,确诊为雏鸡奇异变形杆菌病。
6.1 加强管理 保持鸡舍干净,同时做好通风和保温工作,降低舍内氨气和尘埃含量,适当降低鸡群饲养密度,避免温度忽高忽低。为保证各种营养物质的供应,应选用全价配合饲料,确保雏鸡生长发育的需要。
6.2 药物防治 由于患鸡食欲不振,先肌注庆大霉素,5 000 u/羽,1 次/d,连用 3 d,同时在饮水中添加电解多维、维生素C(按0.1%比例),注射后疫情得到控制,采食量很快恢复正常。改用氟哌酸拌料饲喂,25 mg/d/羽,连喂 3 d,采取以上综合防治措施,鸡群很快恢复正常。
建议平常对鸡免疫灭活油乳剂菌苗,首免0.5 mL/羽,15 d后实施二免,鸡群经二免后大约需4周可抵抗强毒株的攻击[7]。
1)奇异变形杆菌感染人和动物的主要途径是通过污染食物,在畜禽方面,奇异变形杆菌可导致毛皮动物、山羊、断乳仔猪、鸡、大熊猫等多种动物发病。在禽类奇异变形杆菌主要引起腹泻、菌血症等,危害严重,给畜禽养殖带来巨大的经济损失,因此应引起高度重视[8-12]。
2)该病一年四季均可发生,应从饲养管理着手,做好预防措施是关键。随着抗生素在临床上的滥用,使该菌耐药性越来越强,并出现了多重耐药菌株,因此在生产中有针对性地使用敏感抗生素,且联合用药,才能取得满意的疗效[12]。
[1]陆承平.兽医微生物学 [M].北京:中国农业出版社,2007:118-119.
[2]李欣南,夏欣,李永才,等.奇异变形杆菌研究进展[J].现代畜牧兽医,2011(12):73-75.
[3]Barbour EK,Hajj Z G,Hamadeh S,et al.Comparison of phenotypic and virulence genes characteristics in human and chicken isolates of Protenus mirabilis[J].Pathog Glob Health, 2012,106(6):352-357.
[4]朱明华,朱瑞良,王慧,等.鸡奇异变形杆菌外膜蛋白的抗血清制备及其荧光标记抗体检测方法的建立[J].中国预防兽医学报, 2010,32(8): 603-606.
[5]Liu M C,Kuo K T,Chien H F,et al.New aspects of RpoE in uropathogenic Proteus mirabilis[J].Infect Immun,2015, 83(3):966-977.
[6]朱明华,朱瑞良,马荣德,等.鸡奇异变形杆菌的分离鉴定和16SrRNA基因序列测定与系统进化分析[J].中国兽医学报,2011,31(6):804-808.
[7]王红雷,郭文龙.鸡奇异变形杆菌亚单位疫苗的研制及其生物学特性的测定[J].家禽科学,2009(3):12-14.
[8]荣炳浩,李永芳,邵芹,等.肉鸡热应激引发奇异变形杆菌病的诊治[J].养殖技术顾问, 2010(12):124.
[9]Chen C Y,Chen Y H,Lu P L,et al.Proteus mirabilis urinary tract infection and bacteremia, Risk factors, clinical presentation, and outcomes[J].Journal of Microbiology,Immunology and Infection, 2012, 45(3): 228-236.
[10]Rafael P, Paola S, Ana U.Proteusmirabilis uroepithelial cell adhesin(UCA)fimbria plays a role in the colonization of the urinary tract [J].Pathogens and Disease,2013, 67(2): 104-107.
[11]孙秋艳,刘红芹,胡晓娜,等.鸡奇异变形杆菌的分离、鉴定及流行病学调查[J].家畜生态学报,2006,27(6):115-119.
[12]潘玉善,苑 丽,吴 华,等.禽源奇异变形杆菌超广谱β-内酰胺酶基因的分子特征 [J].中国农业科学,2013,46(7):1463-1469.