自制内眦采血器用于小鼠采血效果分析

王召波，董静

(青岛大学附属医院风湿免疫科，山东 青岛 266555)



自制内眦采血器用于小鼠采血效果分析

王召波，董静

(青岛大学附属医院风湿免疫科，山东 青岛 266555)

目的 探讨自制内眦采血器用于小鼠内眦取血的效果。方法 将60只昆明小鼠随机分为实验组和对照组各30只，分别采用自制采血器及普通毛细管行内眦定量取血5次。比较两组采血成功率、采血相关损伤率和采血相关死亡率。结果 两组均未发生采血相关死亡；实验组采血成功率明显高于对照组(χ2=6.522，P<0.05)；两组采血相关损伤率差异无显著性(P>0.05)。结论 自制内眦采血器制作容易，采血成功率高，操作简便，值得在动物实验中推广应用。

小鼠；内眦；采血；动物实验

毛细管内眦采血是小鼠及大鼠动物实验中经常会用到的操作，需要一定的技巧。特别是对于体型较小的小鼠，如果操作不当可直接造成小鼠眼球的不可逆性损伤,容易继发感染，严重时甚至造成小鼠死亡[1]。并且该操作一般需要两个人完成，在接取血样时，经常会因小鼠的挣扎及操作者配合欠佳造成血液标本的浪费及污染[2]。在小鼠采血的实践操作中，我们自制一种简易内眦采血器，经实际操作及对比分析，效果良好。现报告如下。

1 材料与方法

1.1内眦采血器的制作

取200 μL规格的吸头1支，视具体情况剪去前端长0.3～0.4 cm部分。取直径约1 mm的毛细玻璃管1支，沿吸头上端插入并从下端拔出至吸头与玻璃管套叠部分长0.3～0.5 mm，经乙醇灯适当烧灼，两部分可紧密连接。此过程中注意调整玻璃管与吸头成直线，勿使成角，以免影响使用。使用小砂轮在适当长度切割，掰断去除冗长部分毛细管，裸露毛细管长度以2.0～2.5 cm为佳。为避免污染，以上过程在超净工作台上完成。制作好的采血器置入吸头盒，经消毒备用。

1.2实验动物分组及操作过程

雄性昆明小鼠60只，8周龄，体质量(21.0±2.0)g，由青岛大学医学院实验动物中心提供，均将其饲养于青岛大学附属医院动物中心无特定病原体(SPF)屏障环境中。将小鼠随机分为实验组及对照组各30只。两组小鼠均于8周龄开始，每5 d行内眦采血1次，共计5次。实验组采用自制采血器取血：手法固定小鼠，将其按置于有一定角度的斜面上(手应有一定力度，使其眼睛尽量突出)，手执采血器，将毛细管探入肝素瓶中蘸取少许肝素溶液以防止凝血，后以毛细管端刺入小鼠内眦，轻轻转动采血器使毛细管破坏小鼠眼部血管丛，血液会自动随毛细管流入吸头中，待获取满意血量，拔出采血器，以干棉球按压内眦止血，快速将毛细管端置入EP管中。该过程中在采血器置入EP管前禁止直立移动，以免血样流出。待血样完全流入EP管后，采血器可按照锐器处置方式丢弃。对照组取血按照孙奎等[1]所述眼眶取血方法进行。

1.3评价指标及判断标准

采血成功：单次取血量>0.1 mL且无溶血，经离心获得清亮血清视为采血成功。采血相关损伤：因取血所致的小鼠失明、眶周感染视为发生采血相关损伤。采血相关死亡：因采血所致的小鼠死亡。

2 结 果

实验组累计发生采血相关损伤4只，对照组发生采血相关损伤7只，两组采血相关损伤率差异无统计学意义(P>0.05)。实验组累计采血成功144只次，对照组采血成功132只次，两组采血成功率差异有统计学意义(χ2=6.522，P<0.05)。两组均未发生采血相关死亡。

3 讨 论

小鼠血液标本的获取一般有如下方法：断尾采血、断头采血[3]、摘除眼球采血、内眦采血[4]。少量采血可行断尾采血；大量采血且不需小鼠存活可断头采血；摘除眼球采血也是取得较多血量的常用方法，但是该方法会对小鼠长期存活产生不利影响；内眦采血是比较折中及人道的采血方法，在几乎不影响小鼠视力的前提下，可取得较多的血量，只要操作手法得当，几乎不影响小鼠的存活。本文结果显示，采用自制采血器采血成功率明显高于对照组，虽然采血相关损伤率低于对照组，但差异无显著性。在实际操作中，采用内眦采血器采血有如下优点：①内眦采血器制作简单，取材方便；②可单人完成采血；③可最大限度地避免标本污染及浪费，标本质量好；④采血量直观易于掌握；⑤可最大限度地减少对小鼠的伤害。

该采血器稍加改造，亦适用于大鼠采血，仅需将200 μL吸头更换为1 000 μL吸头，便可满足大鼠采血量较多的要求。该采血器制作过程亦可继续改进，如利用无毒、无污染胶水代替乙醇灯烧灼来制作将是另一种可行途径，有待进行相关实验研究。

[1] 孙奎,梅丹,姜华,等. 实验鼠采血方法及特点[J]. 第四军医大学吉林军医学院学报, 2003,25(1):31-32.

[2] 宗阿南,邹悦,任萍萍. 实验动物质量检测中不同采血方法的比较[J]. 中国比较医学杂志, 2008,18(2):74-75.

[3] 闫长虹,徐珞. Ghrelin对食源性肥胖小鼠血液中血管生成标志物影响[J]. 青岛大学医学院学报, 2014,50(1):7-9.

[4] 李晓晶,刘瑾. 实验动物采血方式优缺点比较[J]. 辽宁中医药大学学报, 2009,11(11):217-218.

(本文编辑 马伟平)

APPLICATION OF SELF-MADE INNER-CANTHUS HEMOSTIX FOR MOUSE BLOOD COLLECTION

WANGZhaobo,DONGJing

(Department of Rheumatology and Clinical Immunology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266555, China)

ObjectiveTo apply self-made inner-canthus hemostix for blood collection in mice.MethodsSixty Kunming mice were equally randomized to experimental group and control group using the self-made inner-canthus hemostix and glass capillary for blood sampling, respectively. Inner-canthus blood collection was done for five times. Success rate of blood collection, its related injury rate and mortality were compared between the two groups.ResultsNo blood-collection-related death was found in both groups. The success rate of blood collection was obviously higher in the experimental group than the control (χ2=6.522,P<0.05). There was no significant difference in blood-collection-related injury between the two groups (P>0.05).ConclusionThe self-made inner-canthus hemostix is easy to make, with high success rate in blood collection and simple to manipulate, which deserves to be widely applied in animal experiment.

mice; inner canthus; blood collection; animal experiment

2014-05-23;

2014-09-25

青岛市科技计划基础研究项目 (11-2-4-2-(13)-jch)；山东省高等学校科技计划项目(J10LF78)

王召波(1983-)，男，在读硕士研究生。

董静(1972-)，女，博士，副主任医师，硕士生导师。

R33-33

A

1008-0341(2015)01-0082-02