EDTA-K2抗凝剂对外周血淋巴细胞形态的影响

颜宇飞，张庆五

(上海市控江医院检验科，上海200093)

EDTA-K2抗凝剂对外周血淋巴细胞形态的影响

颜宇飞，张庆五

(上海市控江医院检验科，上海200093)

目的研究不同时间段乙二胺四乙酸二钾(EDTA－K2)抗凝剂对外周血淋巴细胞形态的影响。方法根据年龄将患者分为2组:儿童组55例和成人组70例。将所有受试者外周血在没有抗凝的情况下推血片2张，然后置于含EDTA－K2的血常规管中，分别于5、15、30、60、120 min各推片2张，以瑞姬染色，用光学显微镜对淋巴细胞形态进行观察。结果儿童组在1 h和2 h后异型淋巴细胞比例明显增高，差异有统计学意义(P＜0.01)，成人组在2 h后异型淋巴细胞比例增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论经EDTA－K2抗凝的血液标本应尽快完成淋巴细胞的检测。

EDTA－K2抗凝剂;异型淋巴细胞;瑞姬染色;光学显微镜

乙二胺四乙酸(EDTA)盐均可与钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。国际血液学标准化委员会(ICSH)建议血细胞计数用EDTA－K2作为抗凝剂。在日常住院患者血常规检测中，会遇见自动血液分析仪对淋巴细胞报警(Atypical Lymph?或Abn Lymph/L－Blasts?)，提示有异型淋巴细胞或原始淋巴细胞出现，这种现象在儿科患者中尤为明显。为此我们做了相关分析，以进一步探讨EDTAK2抗凝剂对外周血淋巴细胞形态的影响。

材料和方法

一、对象

随机选取2013年10月至2014年2月上海控江医院门诊血常规患者125例，其中55例儿童(0～6岁)，70例成人(18～65岁)。

二、仪器和试剂

1.仪器日本OLYMPUS－CX21型双目光学显微镜。

2.试剂和耗材威海鸿宇医疗器械有限公司的EDTA－K2抗凝管，批号13090191。珠海贝索生物技术公司的瑞姬染液，批号409081。珠海贝索生物技术公司的高级镜油，批号HX950972。JIANG FAN公司的载玻片和推玻片。

三、方法

将所有患者的外周血在没有抗凝的情况下推片2张，然后置于含EDTA－K2的血常规管中，分别以5 min、15 min、30 min、1 h、2 h为检测时间点，并将血标本置于室温中，待进行下一时间点的检测，检测时再推片2张，进行干燥、固定和染色。血片由2位从事血液细胞形态学检验的主管技师根据《全国临床检验操作规程》[1]和《白细胞分类计数参考方法》[2]中规定方法操作，先用低倍镜观察，再用油镜作白细胞分类计数，分类200个白细胞，特别注意淋巴细胞形态变化。将分类中异型淋巴细胞结果取均值。

四、统计学方法

采用SPSS 16.0软件进行统计分析。对数据进行正态性检验，结果呈正态分布，因此数据以x－±s表示。P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

儿童组经EDTA－K2抗凝1 h、2 h后外周血异型淋巴细胞比例与未抗凝外周血异型淋巴细胞差异有显著统计学意义(P＜0.01);成人组经EDTA－K2抗凝2 h后外周血异型淋巴细胞比例与未抗凝外周血异型淋巴细胞差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。常见外周血异型淋巴细胞，儿童与成人都以Ⅱ型异型淋巴细胞为主，Ⅰ型与Ⅲ型较少见。见图1。

表1 放置不同时间外周血异型淋巴细胞结果(±s，%)

组别无抗凝剂抗凝5 min抗凝15 min抗凝30 min抗凝1 h抗凝2 h儿童5.68±2.955.62±2.925.70±2.815.69±2.936.13±2.466.78±2.79成人4.34±2.464.35±2.484.33±2.504.37±2.394.35±2.705.83±2.68

讨论

淋巴细胞在病毒、药物等外源刺激下引起应激反应，发生一些变化，如原始细胞和幼稚化，细胞体积变大、核体积增大、胞质变多且颜色加深、出现空泡、核不规则、染色质疏松、偶见核仁或丝状分裂等，此类细胞为异型淋巴细胞。正常人外周血中异型淋巴细胞为0～2%，＞5%有临床意义，＞10%时有诊断意义。近年研究发现，异型淋巴细胞与多种病毒感染等有关，如EB病毒、巨细胞病毒、柯萨奇病毒、腺病毒、弓形体病、药物过敏、自身免疫性疾病等，但是较少有报道异型淋巴细胞与EDTA－K2抗凝剂有关。

以往外周血白细胞分类都用未抗凝外周血直接推片染色分类，不存在抗凝剂对淋巴细胞影响。随着全自动血细胞分析仪的普及，不同种类抗凝剂的应用，使传统的工作模式发生了改变。由于从病房护士采血送至检验科需要一段时间，送到检验科后由于标本量大，从第一个血常规标本检测到最后一个血常规标本检测可能要长达1～3 h不等。李艳等[3]指出，EDTA－K2抗凝血异型淋巴细胞增高的原因可能有:(1)血液与玻璃管接触活化;(2)抗凝剂刺激、活化和退化;(3)标本放置时间过长，细胞退化、活化;(4)体内、外温差、活化等因素使细胞形态发生改变。本次研究证明，儿童组外周血异型淋巴细胞在EDTA－K2抗凝1 h后明显增高，个别患者在2 h后异型淋巴细胞比例接近10%。如将此数据给临床，可误诊为“传染性单核细胞增多症”[4]，给治疗产生明显影响。在成人组中，异型淋巴细胞在EDTA－K2抗凝2 h后才有明显增高，有接近10%的患者未发现，这可能是由于成人淋巴细胞相比儿童不易活化。众所周知，异型淋巴细胞Downey分型可分为Ⅰ型(泡沫型/浆细胞样)、Ⅱ型(不规则型/单核细胞样)和Ⅲ型(未成熟型/幼稚型)[5]。本研究发现，儿童与成人都以Ⅱ型异型淋巴细胞增高为主，Ⅰ型与Ⅲ型较少见，与杨秋连等[6]的研究结果一致。

综上所述，EDTA－K2抗凝剂在1 h以后就会将部分正常淋巴细胞转变为异型淋巴细胞，儿童患者更为明显，这会对临床检测结果产生明显影响。解决方法有:(1)送来的血常规标本应尽快检测，儿科的标本尽量先行检测;(2)全自动血液分析仪如有异型淋巴细胞报警，须推片后手工镜检;(3)在镜检时，如遇到异型淋巴细胞＞10%的情况，须采未经抗凝的外周血推片后再复检，以减少EDTA－K2抗凝剂对淋巴细胞形态的影响，保证分类结果的准确性。

[1]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社，2006:123－135.

[2]WS/T 246－2005.白细胞分类计数参考方法[S].

[3]李艳，丛玉隆，袁桂清.加强形态学临床检验专家座谈会纪要[J].中华检验医学杂志，2005，28 (2):147－148.

[4]张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准[M].3版.北京:北京科学出版社，2007:154.

[5]吴晓芝，阎佩珩，尚红.血液病诊断与鉴别诊断图谱[M].北京:人民卫生出版社，2009:38－39.

[6]杨秋连，刘军.EDTA－K2对外周血异型淋巴细胞计数的影响[J].临床医学与检验杂志，2011，8 (12):1463～1466.

1673－8640(2015)03－0287－02

R446.11

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.021

2014－03－21)

(本文编辑:范基农)

颜宇飞，男，1980年生，主管技师，主要从事临床检验工作。