复合质控血清研制及临床应用评价

张春雷，李忠新，张书楠，陈桂冰，曾学辉

(深圳市中医院检验科，广东深圳518083)

复合质控血清研制及临床应用评价

张春雷，李忠新，张书楠，陈桂冰，曾学辉

(深圳市中医院检验科，广东深圳518083)

目的制备乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体弱阳性对照复合质控血清，用于日常室内质量控制。方法用HBsAg、HCV抗体、HIV抗体阳性血清分别与健康人血清进行倍比稀释，选S/CO在2～3之间的稀释度制备室内质控血清。结果自制的复合质控血清变异系数(CV)在15%以内，有很好的稳定性、精密度。结论自制复合质控血清能作为HBsAg、HCV抗体、HIV抗体实验室检测的弱阳性室内质控血清。

乙型肝炎病毒表面抗原;丙型肝炎病毒抗体;人类免疫缺陷病毒抗体;复合质控血清;稳定性

全自动免疫分析仪器因其检测准确性高、重复性好、自动化程度高、符合实验室生物安全的需要等优点，在临床的应用越来越广泛。由于临床免疫检测影响因素较多，包括仪器、试剂保存及运输等环节，为了保证免疫检验结果的准确性及可靠性，每次实验均须有内部对照质控血清(阳性及阴性血清)和外部对照质控血清，以外部对照质控血清进行室内质量控制。为了避免商品化质控血清可能存在的基质效应，我们利用检测样本中阳性样本制备了乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性对照复合质控血清，用于日常室内质控。

材料和方法

一、材料

1.试剂HBsAg、HCV抗体试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供，HIV抗体试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司提供。

2.仪器URANUS AE 200全自动酶免分析仪，由深圳市爱康生物科技有限公司提供。

二、方法

1.样本收集要求无污染、溶血、黄疸和脂血。其中HBsAg阳性复合血清10份，HCV抗体阳性复合血清5份，HIV抗体阳性复合血清3份。同时收集HBsAg及HBsAb阴性、HCV抗体阴性、HIV抗体阴性的健康人血清足量，56℃灭活30 min，3 000×g离心15 min，去除纤维蛋白沉淀，经亚甲蓝光化学法灭活后备用，所有血清仍需按照传染物对待。

2.用阴性健康人血清分别对少量HBsAg阳性、HCV抗体阳性、HIV抗体阳性复合血清进行倍比稀释并对不同稀释度血清进行双份平行检测，选取S/CO值为2～3的稀释度为最适稀释度。

3.将上述阳性样本按照最适稀释度加至一定量的阴性健康人血清中，充分混匀，按照需求量分装到塑料试管中，用量1周，加盖密封保存于－20℃备用。使用时解冻后置4～8℃保存，使用前充分混匀。

4.严格按照操作规程对制备好的质控血清进行20次重复测定，求其均值()、标准差(s)和变异系数(CV)。

5.自制质控血清的精密度和稳定性观察:每次取自制质控血清与日常样本一起检测，持续检测6个月后统计S/CO的均值、s、CV，并分析各月与第1个月的检测结果的统计学差异。

三、统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行分析。不同月份质控血清精密度和稳定性的比较采用均数的t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、最适合稀释度

对HBsAg阳性、HCV抗体阳性、HIV抗体阳性复合血清不同稀释度血清进行检测后发现其s值有良好的浓度梯度，HBsAg阳性复合血清在1∶8 000～1∶16 000稀释范围内，S/CO在2.02～3.58之间，选定1∶10 000为最适稀释度，HCV抗体阳性在1∶4 000～1∶8 000稀释度范围内，S/CO值在1.73～3.45范围内，HIV抗体阳性复合血清在1∶4 000～1∶8 000稀释度范围内，S/CO值在1.94～3.85范围内，根据情况均选定1∶5 000作为最适稀释度。

二、混合血清稳定性测试

稀释完成后，对质控血清进行20次重复测定，S/CO均值、s和CV。见表1。

三、混合血清保存稳定性测试

连续6个月使用自制质控血清绘制质控图，同时比较每个月质控血清的，s，CV值，观察其精密度及稳定性，结果见表2、表3、表4。以均数t检验比较，与一月份相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。由此可见，－20℃保存自制的质控血清，至少可以保存6个月，解冻后4～8℃保存1周，可用作于室内质控使用。

讨论

室内质控目的是控制实验室每天检测结果的可靠性，是实验室管理最基本措施。临床实验室只有建立一个全面的质量管理体系，才能获得可靠的测定结果。外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和试剂盒反应批间或批内差异而由实验室设置的一套对照血清。而弱阳性对照最能反映检测结果的差异，即能显示半定量分析或定性分析上的假阴性结果或误差[1]。因此，为了保证实验的准确性和精密度，设置外部弱阳性对照质控血清是实施室内质控的一种有效的方法。酶联免疫吸附试验(ELISA)由于其操作简便、成本低、适合批量检查等优点，在临床和科研领域抗原及抗体的测定中有着广泛的应用。影响ELISA检测的因素很多，包括试剂盒本身的质量、运输和保存的环境，样本本身含有一些自身抗体、样本的保存和是否细菌污染及样本的处理，洗液的配制及是否污染，温育的温度和时间，显色的时间等，所以实验室采用室内监控尤其重要。

目前，HBsAg、HCV抗体、HIV抗体等项目，是手术前检测的常规项目，ELISA方法检测仍然是各级医院主要选择的方法。卫生部临床检验中心已经研制了用于进行HBsAg、HCV抗体、HIV抗体等项目ELISA检测国内标准品，单位为国际单位IU/mL。该种标准物质已在许多三级医院得到广泛的应用，但价格偏贵，而且都是单一项目质控品，给临床的应用和推广带来了不便。本研究中制作的是室内多项目复合质控品，从实验结果可以看出，HBsAg、HCV抗体、HIV抗体－20℃至少可以稳定6个月，解冻血清4～8℃可保存一周。一般CV值达到了20%以内，质控品稳定性较好[2]。本实验中CV值能够控制在15%以内，质控品稳定性良好。我们所在科室以上ELISA检测项目近年均从临床检验中心采购商品化质控品，采用全自动酶免分析仪尽量减少人为的误差，CV值一般稳定在10%～15%。多项目质控品制作过程操作简便，能够在各级医院实验室独立完成，可行性高。同时，用HBsAg及HBsAb阴性、HCV抗体阴性、HIV抗体阴性的健康人血清作为基质，排除了基质效应，能够更好的监测实验过程。目前有研究报道用ELISA试剂盒阳性对照配制室内质控血清的方法[3－5]，我们认为不可取。目前试剂盒内阳性对照一般不是从阳性样本中得到，多是合成的半成品或片段，我们前期实验也发现，ELISA阳性对照用金标的试剂检测结果为阴性。本研究中用阳性样本配制室内多项质控品，能够大大减少实验室成本。

自制复合质控血清可有效控制实验室测定工作的准确性及可靠性，提高日常检测结果的一致性，有利于临床检测准确性的提高，使检测结果更接近于患者的真实情况，有利于临床的诊断应用。

[1]王治国.临床检验质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社，2004:207－208.

[2]孔祥沙，季颖，张海莹，等.甲型肝炎病毒抗体室内质控血清制备及评价[J].中华检验医学杂志，2013，36(12):1146－1147.

[3]韩光宇，谭昆，徐湛，等.自制抗－HIV临界值质控血清的室内质控及评价[J].国际检验医学杂志，2013，34(6):711－712.

[4]韦雪芳.ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备[J].检验医学与临床，2011，8(20):2527－2528.

[5]孙少岩，吴敏慧.HCV抗体临界值质控血清的制备及应用[J].南京军医学院学报，2001，23(3):181.

1673－8640(2015)03－0292－03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.024

2014－07－09)

(本文编辑:储怡星)

张春雷，男，1974年生，学士，副主任技师，主要从事临床免疫学检验工作。