HOXA10启动子区基因多态性与女性生殖能力的相关性研究

符免艾，李 娟，黄 林，冼梅兰，周立花，胡 英，张云霞

(1.海南省农垦总医院生殖科，海南 海口 571100；2.海南医学院，海南 海口 571199)

HOXA10启动子区基因多态性与女性生殖能力的相关性研究

符免艾1，李 娟1，黄 林2，冼梅兰2，周立花1，胡 英1，张云霞2

(1.海南省农垦总医院生殖科，海南 海口 571100；2.海南医学院，海南 海口 571199)

目的 探讨HOXA10启动子区基因多态性与女性生殖能力的关联性。方法选择我院2013年7月至2014年7月施行辅助生殖术(ART)的女性患者240例作为不孕组，其中三次施行ART未怀孕的患者归为ART失败组，同期产科自然怀孕且年龄偏大的女性250例作为自然怀孕组。检测两组患者HOXA10基因启动子区SNP位点rs3779456多态性，利用统计学软件SPSS19.0探讨其基因型及等位基因与女性生殖能力的关联性。结果三种基因型TT、CC、CT在不孕组和自然怀孕组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，在ART失败组和自然怀孕组间差异有统计学意义(P＜0.05)。CC基因型和其余两种基因型的分布频率差异有统计学意义(P＜0.05)，且CC在不孕组和自然怀孕组分布频率的OR值为1.24。等位基因T和C的分布频率差异有统计学意义(P＜0.05)，且T在自然怀孕组和不孕组的分布频率OR值为1.15。结论基因型CC可能不利于自然怀孕，等位基因T可能与女性生殖能力呈正相关。

HOXA10；女性；生殖能力；胚胎移植技术；启动子；基因多态性

生殖是物种繁衍的正常生理现象，孕育后代是一个女性基本的权利和义务，新生儿的诞生往往给家庭带来难以言喻的喜悦。目前我国约有超过10%的女性患有不孕不育症，这给她们的生活和人生带来了难以估量的痛苦。辅助生殖技术(Assisted reproductive technology，ART)为不孕不育的治疗带来了希望，然我们在施行ART的过程中发现影响成功率的因素众多，且难以形成评估患者受孕率的体系[1-3]。为此，我们试图从基因途径寻找影响女性生殖能力的相关位点，以期指导临床评估体系的构建。HOXA10基因的表达量随月经周期呈现周期性变化，且在着床窗口期表达增加，与胚胎着床密切相关[4]。我们认为启动子区的碱基变化(如SNP多态性)可能影响启动子的活性及HOXA10基因的表达量，进而影响HOXA10所调节的下游基因的表达，最终影响女性的子宫内膜容受性及生殖能力。本文通过不孕人群与自然受孕人群的比对研究进一步探讨其启动子多态性位点对女性生殖能力的关联性，为开展女性生殖能力评价及开展个体化医疗提供理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年7月至2014年7月在我院生殖医学中心接受ART并在3次或3次内移植结束后有妊娠结局的不孕患者240例归为不孕组，其中包括成功受孕并继续妊娠患者117例，成功受孕并流产患者20例，ART失败患者103例(归为ART失败组)。选择同期产科自然怀孕且年龄偏大者250例作为自然怀孕组。不孕组妇女平均年龄37.8岁，自然怀孕组妇女平均年龄34.5岁，两组妇女在年龄、体重等方面比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。排除子宫内膜异位症等其他子宫问题导致的不孕和因男方因素导致的不孕患者。

1.2 不孕患者评估标准 3次以内(含3次)成功受孕且胎儿正常发育者归为成功受孕并继续妊娠患者，3次以内(含3次)成功受孕但发生生化妊娠或者妊娠过程中胎儿停止发育、流产等不能成功产下婴儿者判定为成功受孕并流产患者，3次以内(含3次)未能移植成功者判定为ART失败患者。

1.3 基因多态性检测方法 采集所有研究对象空腹静脉血于EDTA抗凝管中，采用北京天根生物技术有限公司提供的全血基因组DNA提取试剂盒提取患者基因组DNA，DNA编号排序后委托生物公司进行多态性分析，公司提供各患者的三种基因型检测结果。

1.4 统计学方法 采用EXELE录入研究对象的相关信息，采用SPSS19.0软件对数据进行统计学分析。检验水准α=0.05，对组间差异采用四表格χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 自然怀孕组与不孕组受试者三种基因型比较 自然怀孕组和不孕组中均可检验出TT、CT、CC三种基因型，χ2检验结果为P=0.10，说明三种基因型的组间差异无统计学意义。TT基因型和其他两种基因型的比较差异亦无统计学意义(P＞0.05)，而CC基因型与其他两种基因型比较差异则有统计学意义(P＜0.05)，且自然怀孕组相对不孕组的OR值为0.75，说明不利于自然怀孕。等位基因T和C间比较差异有统计学意义(P＜0.05)，且T对C的OR值为1.24，见表1。

表1 自然受孕组与不孕组的三种基因型比较[例（%）]

2.2 自然怀孕组与ART失败组受试者三种基因型比较 自然怀孕组和ART失败组中均可检验出TT、CT、CC三种基因型，χ2检验结果为P=0.02，说明三种基因型的组间比较差异有统计学意义。TT基因型和CC+CT基因型比较差异无统计学意义(P＞0.05)， CC基因型与其他两种基因型比较差异有统计学意义(P＜0.05)，且自然怀孕组相对不孕组的OR值为0.65，说明不利于自然怀孕。等位基因T和C间比较差异有统计学意义(P＜0.05)，且T在自然怀孕组中分布频率为ART失败组的1.28倍，见表2。

表2 自然受孕组与ART失败组受试者三种基因型比较[例(%)]

3 讨论

HOXA10属于同源框基因家族的成员，因该基因家族中都含有一段183 bp的同源盒而得名[4]。该基因定位于人类7号染色体，基因组DNA全长12 573 bp，在子宫内膜特异性表达，表达产物为含有410个氨基酸的蛋白质。该蛋白具有转录因子的功能，目前已经被证实参与雌性生殖系统的发育和正常子宫内膜形态的构建，并对子宫内膜的增殖与分化、子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及粘附、胞饮突的形成、子宫内膜的蜕膜化以及血管通透性的增强中发挥着重要作用[5-6]。近些年来的研究表明基因多态性是个体差异和诸多疾病的重要分子基础。HOXA10基因启动子区目前已经报道的SNP位点共有24个，其中突变频率超过0.1的共有3个(NCBI数据)，但到目前为止，尚未见HOXA10基因启动子区SNP多态性与女性生殖能力的相关报道。

我们对240例施行ART的不孕患者及250例自然怀孕女性启动子区rs3779456(T→C突变)位点的多态性进行了比对研究，三种基因型无组间差异，但CC基因型在自然怀孕组的分布频率是ART组的0.75倍，且与其他两种基因型的总和比较差异具有统计学意义，说明该基因型可能不利于自然怀孕。而对等位基因T和C的分析表明，T可能有利于自然怀孕。为了进一步确认上述结果，我们对ART患者按照妊娠结局进行了进一步的筛选，选择103例经3次种植均失败的患者与自然怀孕患者进行比较，比较结果与上述基本相符，不同的是三种基因型的组间分布出现了差异。

综上所述，在海南女性人群中HOXA10基因启动子区多态性位点rs3779456的多态性与其生殖能力密切相关，其中等位基因T有利于自然受孕，而CC基因型不利于自然受孕。我们的研究结果进一步证明HOXA10基因多态性可能密切影响着女性的生殖能力，而相关机制的阐明尚需更深入的研究。

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[2]王思慧,傅 萍,姜 萍.不孕不育与遗传学相关因素的研究进展[J].中国优生与遗传杂志,2012,20(1):126-128.

[3]符免艾,李 娟,冼梅兰,等.体外授精—胚胎移植后早期自然流产相关因素分析[J].海南医学,2014,25(24):3637-3639.

[4]Zanatta A,Rocha AM,Carvalho FM,et al.The role of the Hoxa10/ HOXA10 gene in the etiology of endometriosis and its related infertility:a review[J].JAssist Reprod Genet,2010,27(12):701-710.

[5]Smith CC,Taylor HS.Xenoestrogen exposure imprints expression of genes(Hoxa10)required for normal uterine development[J]. FASEB J,2007,21(1):239-246.

[6]Cermik D,Selam B,Taylor HS.Regulation of HOXA-10 expression by testosterone in vitro and in the endometrium of patients with polycystic ovary syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab,2003,88 (1):238-243.

Investigation on the relationship of polymorphism of Hox110 promoter with the reproductive ability of females.

FU Mian-ai1,LI Juan1,HUANG Lin2,Xian Mei-lan2,ZHOU Li-hua1,HU Ying1,ZHANG Yun-xia2.
1.Department of Reproduction,Hainan Provincial Nongken General Hospital,Haikou 571100,Hainan,CHINA;2.Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

Objective To investigate the polymorphism of the HOXA10 promoter and the female reproductive ability.MethodsA total of 240 female infertile patients undergoing assisted reproductive technology(ART)in our hospital from July 2013 to July 2014 were enrolled as infertility group,among which the patients was not pregnant after 3 times of ART were collected as the ART failure group.Two hundred and fifty aged females with normal reproductive ability were chosen as the control group.The polymorphism of rs3779456 located in the HOXA10 promoter was detected and the data were analyzed by SPSS19.0.ResultsThere was no significant difference in the three genotypes(TT,CC,CT)between the infertility group and the control group(P＞0.05),while there was statistically signifi-cant difference between ART failure group and the control group(P＜0.05).The frequency of CC and the other two genotypes was significantly different(P＜0.05),the OR value of CC in the infertility group and the control group was 1.24.The allele frequency of T and C between infertility group and the control group were significantly different with an OR value of 1.15.ConclusionThe genotype CC may be a dangerous factor for natural pregnancy,while the allele T is beneficial for the reproductive ability.

HOXA10;Female;Reproductive ability;In vitro fertilization and embryo transfer(IVF-ET);Promoter;Gene polymorphism

R339.2+2

A

1003—6350（2015）13—1887—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0680

2014-12-2)

海南省卫生厅科研项目（编号：琼卫2013自筹-20）

张云霞。E-mail：zhangyunxia1977@qq.com