抗磷脂酶A2受体抗体检测在特发性膜性肾病诊断中的意义

符克英，蔡俊宏，符生苗，韩叶光，王 茹，张 培

(海南省人民医院肾病研究室，海南 海口 570311)

抗磷脂酶A2受体抗体检测在特发性膜性肾病诊断中的意义

符克英，蔡俊宏，符生苗，韩叶光，王 茹，张 培

(海南省人民医院肾病研究室，海南 海口 570311)

目的 探讨血液中抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)在特发性膜性肾病诊断中的意义。方法应用间接免疫荧光方法检测特发性膜性肾病患者血液中的anti-PLA2R，以继发性膜性肾病患者及健康献血员作为对照，分析其与肾活检组织中病理诊断的相关性。结果间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R敏感性为76.7%、特异性为96.7%。继发性膜性肾病组仅检出1例阳性，正常组未检出阳性。血液anti-PLA2R与病理诊断的相关性分析发现其阳性符合率为97.9%，阴性符合率为80.8%，总符合率为87.5%，Kappa一致性检验，Kappa=0.752，P＜0.01。结论间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R可成为体外诊断特发性膜性肾病的特异性指标。

抗磷脂酶A2受体抗体；特发性膜性肾病；间接免疫荧光

特发性膜性肾病(IMN)是临床常见的以大量蛋白尿或肾病综合征为主要表现的原发性肾小球疾病[1，2]，伴血栓和心血管并发症，以及慢性肾功能衰竭风险。其典型的病理学特征是肾小球上皮下和基底膜内免疫复合物沉积，伴节段性或球性硬化；免疫病理检查可见IgG和C3沿基底膜细颗粒状沉积；电镜下可见电子致密物在基底膜的不同部位沉积。在2009年自身抗原磷脂酶A2受体(PLA2R)被鉴定以前，IMN的诊断主要通过肾脏穿刺、组织学检查或电镜检查[1]。但是仅依靠组织病理学检查并不能完全与其他原因引起的膜性肾病加以区别，故我们拟通过检测血液中抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)与肾活检病理诊断的相关性，探讨其在IMN诊断和鉴别诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例来源于2007年4月至2014年5月本院90例肾活检组织标本(石蜡常温保存)，其中IMN 60例，狼疮性肾炎20例，乙肝相关性肾炎10例，相应血液样本90例；以健康献血员血液样本30例作为对照(血液样本-80℃保存)。对肾活检组织行HE、PAS、PASM、Masson染色，免疫荧光检查及电镜检查，观察其病理改变。病例纳入标准：IMN依据肾脏病理光镜、电镜、免疫荧光诊断结合临床诊断纳入，排除其他可能引起膜性肾病的疾病。

1.2 研究分组 根据病理诊断将60例IMN设为实验组，将狼疮性肾炎和乙肝相关性肾炎30例设为继发性膜性肾病组，健康献血员30例为正常对照组。

1.3 方法 应用间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R水平，采用包被有未转染及转染PLA2R的EU90细胞为检测基质，试剂盒购自德国欧蒙医学实验诊断股份公司。比较分析其与肾活检组织病理诊断的相关性。

1.4 统计学方法 所有数据均采用SPSS18.0统计软件进行分析，计数资料进行χ2检验，比对资料进行Kappa一致性检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受试者anti-PLA2R水平比较 IMN组阳性46例，占76.7%，继发性膜性肾病组阳性1例，占3.3%，正常对照组均为阴性，阳性样本均可见anti-PLA2R与基质的转染细胞反应引起特异性胞浆荧光。本研究中，间接免疫荧光方法用于IMN检测的敏感性为76.7%、特异性为96.7%。

2.2 血液anti-PLA2R水平与肾活检组织病理诊断比较 血液anti-PLA2R与肾活检组织病理诊断结果的相关性分析发现，两种方法比较χ2检验值为70.825，P＜0.01，其阳性符合率为97.9%，阴性符合率为80.8%，总符合率达87.5%；对比分析Kappa一致性检验的结果，Kappa=0.752，P＜0.01，见表1。

表1 血液anti-PLA2R与肾活检组织中病理诊断结果的相关性

3 讨论

磷脂酶A2受体(PLA2R)属于Ⅰ型跨细胞膜受体，是哺乳动物甘露糖受体家族4个成员之一。PLA2R的N端是1个富含半胱氨酸的结构域，与之相邻的是1个纤连蛋白Ⅱ(Fibronectin typeⅡ)结构域以及8个串联的C型植物凝集素样结构域(C-type lectin-like domain，CTLD)，位于胞浆内的C端含有与内吞装置相互作用的结构，可能与将细胞外的配体分子转运至细胞内有关。PLA2R主要分为两型(M型与N型)，已经确认M型PLA2R是自身抗体的主要靶抗原[3-5]。PLA2R主要在肾小球足细胞呈高表达，并与IgG4共定位于IMN患者肾小球的免疫复合物沉积中，IMN患者中anti-PLA2R主要为IgG4亚型，这是肾小球沉积物中的主要免疫球蛋白亚类，从IMN患者沉积物中洗脱的IgG可识别PLA2R，因此PLA2R是导致IMN的一个主要抗原，检测循环血液中的anti-PLA2R对于诊断和监测IMN病情活动很可能具有重要作用[3，6]。在IMN患者中，血液中的anti-PLA2R与PLA2R构象依赖表位结合，两者形成原位免疫复合物沉积在肾小球基底膜，引起足细胞的损伤、肾小球基底膜的增厚以及通透性的改变[1]。IgG4是anti-PLA2R中最主要的抗体亚型，这与继发性膜性肾病(狼疮性膜性肾病或恶性肿瘤相关膜性肾病等)不同，后者抗体以IgG2、IgG3为主要亚型。有研究表明，anti-PLA2R滴度与IMN疾病活动度有关，也可以作为评价治疗效果的一项指标[2-5]。

2009年Beck等采用Western印迹法在37例IMN患者血液中的26例检出了M型PLA2R，认为anti-PLA2R对于诊断和监测IMN病情活动很可能具有重要作用[3，6]。Qin等[7]报道认为anti-PLA2R对于IMN具有很高的特异性，其血液中抗体的滴度可用于判断患者的疗效和预后。周广宇等[8]报道认为anti-PLA2R可能是IMN的特异性抗体和致病性抗体。有学者[9-10]研究认为anti-PLA2R水平可作为IMN病情活动和治疗效果的监测工具。根据国外报道，免疫组织化学法可以用来检测anti-PLA2R[3]，而以转染细胞作为检测基质的间接免疫荧光法是血液学筛查anti-PLA2R的一种便捷可靠的方法，适于anti-PLA2R的定性与定量分析[3，11-13]。

本研究结果显示，应用包被有未转染及转染PLA2R的EU90细胞为检测基质，间接免疫荧光法检测患者血液中的anti-PLA2R，敏感性为76.7%、特异性为96.7%；与肾活检组织病理诊断比较分析的一致性非常好，且继发性膜性肾病组30例中仅1例阳性，健康献血员血液样本30例中无阳性结果。在本次研究中，有14例临床确诊IMN患者间接免疫荧光法结果为阴性，可能与以下几点有关：(1)IMN患者体内可能存在除了PLA2R受体以外的自身抗体靶抗原；(2)在样本采集时，IMN患者正处于病情缓解阶段或治疗过程中，病理性免疫活动处于低水平状态，自身抗体的滴度降低；(3)由于转染细胞内靶抗原的表达水平和构象的影响，造成检测anti-PLA2R的误差。

综上所述，我们认为应用包被有未转染及转染PLA2R的EU90细胞为检测基质，间接免疫荧光法检测患者血液中的anti-PLA2R可作为体外诊断IMN的特异性指标，有利于和继发性膜性肾病的鉴别诊断。

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Significance of anti-phospholipase A2 receptor antibody in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy.

FU Ke-ying,CAI Jun-hong,FU Sheng-miao,HAN Ye-guang,WANG Ru,ZHANG Pei.Division of Nephrology Research,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo discuss the significance of anti-phospholipase A2 receptor antibody(anti-PLA2R) in diagnosing idiopathic membranous nephropathy.MethodsAnti-PLA2R in the blood was detected by indirect immunofluorescence in the patients with idiopathic membranous nephropathy(IMN group),and then compared with those in the patients with secondary membranous nephropathy(secondary membranous nephropathy group)and healthy blood donors(healthy control group).The relationship between anti-PLA2R and pathological diagnosis of renal tissue was analyzed.ResultsFor detection of anti-PLA2R in blood by indirect immunofluorescence,the sensibility was 76.7%and the specificity was 96.7%.Only one case was positive in the secondary membranous nephropathy group, and none was positive in the healthy control group.Correlation analysis between anti-PLA2R and pathological diagnosis showed a positive coincidence rate of 97.9%,negative coincidence rate of 80.8%,total coincidence rate of 87.5%, and the Kappa of consistency test of 0.752,P＜0.01.ConclusionAnti-PLA2R in blood detected by indirect immunofluorescence could be used as the specific indicator for diagnosing idiopathic membranous nephropathyin vitro.

Anti-phospholipase A2 receptor antibody(anti-PLA2R);Idiopathic membranous nephropathy (IMN);Indirect immunofluorescence

R692

A

1003—6350（2015）11—1626—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.11.0581

2014-12-15)

海南省卫生厅立项课题（编号：琼卫2012 PT-16）

蔡俊宏。E-mail：cjh7506@163.com