结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选研究

孙克让 李 健

(河北省玉田县中医医院检验科，河北 玉田 064100)

在当今社会，结核病仍然是困扰人们的传染病之一，给人类的身体健康带来不利影响，病死率依旧很高［1］。中国死于结核病的人数位居世界前列，并且感染人数也较多，由于药物使用不当，还出现了耐药结核病，造成结核病难以治愈，给患者的身体带来不可逆伤害，影响患者的健康。为了减少疾病的发生，如何检测病原体就成为医学专家研究的重点。本研究通过进行结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选试验，发现结核分枝杆菌与结合肽的亲和力较强，可以有效检测出结核分枝杆菌，为结核病体外检测提供了方便快捷的方法，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010－10—2013－10于河北省玉田县中医医院就诊的肺结核患者，将从他们痰液中提取不同的结核分枝杆菌用于筛选试验。同时选取非分枝杆菌进行筛选，与分枝杆菌进行对比。所选的分枝杆菌有结核分枝杆菌H37Rv、脓肿分枝杆菌、金色分枝杆菌等，非分枝杆菌选择的是白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。对所有菌体进行筛选试验，观察其与结合肽的结合能力。

1.2 筛选方法 将所有菌体在液体培养基内进行培养，并进行灭活，再把菌体进行5 000×g离心10 min、0.9%氯化钠注射液洗涤2次后进行筛选。从第2轮筛选开始将耻垢分枝杆菌加入H37Rv结合肽菌液，用非特异性洗脱缓冲液进行洗涤后得到特性结合的结核分枝杆菌噬菌体，之后开始脱氧核糖核酸(DNA)单链扩增，将最后提纯的单链DNA进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。比较不同菌种对与结合肽的亲和力，试验重复3次。

1.3 观察指标 观察记录不同菌体结合肽的结合活性，并记录ELISA检测结果。

1.4 统计学方法 应用SPSS 15.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采取t检验;计数资料率的比较采取χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

ELISA检测结果见表1。

表1 不同杆菌ELISA检测结果

由表1可见，结核分枝杆菌与H37Rv结合肽的结合能力最强，其余分枝杆菌(除结核分枝杆菌外的分枝杆菌)较弱，非分枝杆菌的亲和力最弱，接近于无，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

对于结核病的治疗最主要还是在于早发现、早治疗，为了解决这个问题，许多专家都致力于研究结核分枝杆菌的检测［5］。为了能准确的发现病菌，本研究通过观察结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选，得到了有效的检测方法，可以在体外准确检测结核分枝杆菌的存在，为结核患者及早诊断提供了有效检查手段，为治疗提供了有力保障。结核分枝杆菌，H37Rv结合肽的筛选可以发现灭活结核分枝杆菌，H37Rv靶分子的亲和力最强［6］，有利于检测的进行。

通过肽库进行筛选检验结核分枝杆菌H37Rv结合肽，能够有效的对其亲和力进行检测，可以将噬菌体富集起来，明显看出亲和力的程度。在筛选时加入耻垢分枝杆菌进行特异性结合后［7］，可以使菌体的特异性提高，但不会影响最终结果。因为结核分枝杆菌的生长方式是慢性生长，而耻垢分枝杆菌的生长方式是快速生长的，可以区分开来。采用ELISA对结果进行检验，增加准确性［9］，并且简单易行，是有效的辅助检查手段。在荧光显微镜下可以发现，结核分枝杆菌H37Rv的荧光效果最强，其余分枝杆菌效果不明显［8］，非分枝杆菌无荧光效应，可以明显的区分杆菌的种类。通过本研究的结果可以发现，结合分枝杆菌H37Rv结合肽是一种良好的体外检测结核杆菌方法。

综上所述，结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选有助于体外检测结核杆菌，并且可以发现H37Rv结合肽与结核分枝杆菌的亲和力最好，能准确检测出结核杆菌，是有效的体外检测方法，对于结核患者病菌及早发现提供了有效检测方法，是值得临床上进行使用的辅助检查方法。

［1］ 杨华，张丽婷，李连青，等.结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选研究［J］.中华结核和呼吸杂志，2011，34(3):192－196.

［2］ 张丽婷，胡忠义，李连青，等.结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究［J］.中华结核和呼吸杂志，2010，33(5):382－383.

［3］ 赵琳，尤辉，任郭侠，等.肺结核中医证候规律的临床研究［J］.陕西中医，2011，32(2):173－174.

［4］ 弓显凤，张熙祎，张锦博，等.中医辨证配合化疗治疗肺结核54例［J］.陕西中医，2012，33(2):183－185.

［5］ 牛雪，吴丛梅，高冷，等.结核分枝杆菌H_(37)Rv异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及活性［J］.吉林大学学报:理学版，2011，49(4):777－781.

［6］ 何霞，谭守勇，罗春明，等.应用MPT64为靶标快速检测结核分枝杆菌生长的研究［J］.广东医学，2010，31(2):222－224.

［7］ 陆学东，孙会平，张银辉.免疫印迹技术在临床结核病血清学诊断中的应用［J］.中华结核和呼吸杂志，1993，16(6):357－359.

［8］ 王盛兰，陈玲，张建勇，等.结核分枝杆菌广泛耐药株与耐多药株菌体蛋白质组学比较研究［J］.中国人兽共患病学报，2011，27(9):820－824.