南宁市4679例新生儿突变耳聋基因筛查结果

南宁市4 679例新生儿突变耳聋基因筛查结果

杜娟,许涓涓,黄萍丽,付华钰

(广西壮族自治区妇幼保健院，南宁530003)

摘要：目的了解南宁市新生儿突变耳聋基因携带情况。方法选择在广西壮族自治区妇幼保健院出生3～5 d的新生儿4 679例，采集其足跟末稍静脉血，提取DNA，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA四个耳聋基因的20个突变位点。结果4 679例新生儿中有143例检出四个耳聋基因的13种突变类型，突变耳聋基因携带率为3.056%。GJB2基因检出235delC、299_300delAT、176_191del16三种突变共76例，GJB3基因检出538C>T、547G>A两种突变5例，SLC26A4基因检出IVS7-2A>G、1174A>T、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2168A>G、六种突变48例，12SrRNA基因检出1555A>G突变14例。结论 通过突变耳聋基因筛查可早期发现迟发性耳聋患儿，为人群听力障碍防控提供帮助。

关键词：耳聋；先天性疾病；耳聋基因；基因突变；基因筛查；新生儿

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.006

中图分类号：R394.3文献标志码：A

基金项目：广西壮族自治区科技研究与开发计划项目(1140003B-82)。

作者简介：第一杜娟(1965-)，女，学士，主任医师，主要研究方向为临床遗传学。E-mail： xyycmz@163.com

作者简介：通信付华钰(1984-)，女，硕士，住院医师，主要研究方向为临床遗传学。E-mail： fuhuayu211@163.com

收稿日期：(2015-08-10)

Screening results of deafness gene mutations in 4 679 newborns in Nanning

DUJuan,XUJuan-juan,HUANGPing-li,FUHua-yu

(MaternalandChildHealthHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530003,China)

Abstract:ObjectiveTo understand the newborns' carrying situation of the mutation of deafness-related genes in Nanning.MethodsSamples of heel blood were collected from 4 679 newborns in Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region who were born in 3-5 days. DNA samples were extracted and detected by Matrix-assisted Laser Desorption-Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF-MS), including 20 mutation sites of 4 deafness-related genes (GJB2, GJB3, SLC26A4 and 12SrRNA). Results Among 4 679 newborns, 143 cases (3.056%) were detected with 13 mutation types, which included 76 cases of GJB2 (235delC, 299_300delAT, 176_191del16) gene mutation, 5 cases of GJB3 (538C>T, 547G>A) gene mutation, 48 cases of SLC26A4 (IVS7-2A>G, 1174A>T, 1229C>T, 1975G>C, 2027T>A, 2168A>G) gene mutation and 14 cases of 12SrRNA (1555A>G) gene mutation. ConclusionThe mutation of deafness-related gene screening in neonates may be useful in early detection of delayed deafness and it helps for the prevention and control of hearing impairment.

Key words: deafness; congenital diseases; deafness genes; gene mutation; genetic screening; newborn

2006年中国第二次残疾人抽样调查结果显示，我国听力言语残障者共2 780万例，占残障人总数的33.52%。7岁以下的聋哑儿童达80万例，并以每年8万例聋儿的速度在增长。在重度以上耳聋人群，特别是儿童耳聋群体中，遗传性耳聋的比例高达60%[1～4]。为做好听力障碍防控工作，降低人口出生缺陷，我们采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对南宁市4 679例新生儿的GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA四个耳聋基因的20个突变位点进行了检测，了解本市新生儿突变耳聋基因携带情况。现将结果分析如下。

1资料与方法

1.1临床资料2014年1月1日～2015年5月10日在广西壮族自治区妇幼保健院出生3～5 d的新生儿中，家属同意进行突变耳聋基因筛查的新生儿共4 679例(男2 745例，女1 934)。

1.2耳聋基因检测方法采集受检新生儿足跟末稍静脉血，提取DNA，采用MACDI-TOF-MS检测耳聋基因：根据飞行时间质谱法的技术路线，将样本进行扩增、消化、延伸和纯化，将延伸产物用质谱检测(详细步骤参照Sequenom Spectro CHIP Arrays操作说明书)，最后测序、进行数据分析。该方法可检测的耳聋基因共四个(包括20个突变位点)：GJB2(35delG、167delT、176_191del16、235delC、299_300delAT)，GJB3(538C>T、547G>A)，SLC26A4(281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)，mtDNA 12SrRNA(1494C>T、1555A>G)。

2 结果

4 679例受检新生儿中有143例检出四个耳聋基因的13种突变类型，突变耳聋基因携带率为3.056%(143/4 679)。

携带突变耳聋基因的143例新生儿中，GJB2基因突变(235delC、299_300delAT、176_191del16位点突变)76例(占53.147%)，携带率为1.624%(76/4 679)，其中235delC纯合突变2例、杂合突变59例、235delC杂合突变合并1555A>G同质突变1例；299_300delAT纯合突变2例、杂合突变9例；176_191del16杂合突变3例。

携带突变耳聋基因的143例新生儿中，SLC26A4基因突变(IVS7-2A>G、1174A>T、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2168A>G、281C>T位点突变)48例(占33.566%)，携带率为1.026%(48/4 679)。其中IVS7-2A>G纯合突变2例、杂合突变19例；1229C>T复合1975G>C双重杂合突变1例、1229C>T杂合突变16例、1975G>C杂合突变3例；2168A>G杂合突变4例；1174A>T杂合突变、2027T>A杂合突变、281C>T杂合突变各1例。

携带突变耳聋基因的143例新生儿中，mtDNA 12SrRNA基因突变(1555A>G同质性突变和异质性突变)14例(占9.790%)，携带率为0.299%(14/4 679)。其中1555A>G同质性突变12例、1555A>G异质性突变2例。

携带突变耳聋基因的143例新生儿中，GJB3基因突变(538C>T、547G>A位点突变)5例(占3.497%)，携带率为0.107%(5/4 679)。其中538C>T杂合突变3例、547G>A杂合突变2例。

在接受四种耳聋基因突变检测的4 679例受检新生儿中，排在前五位的突变位点依次为235delC占1.325%(62/4 679)、IVS7-2A>G占0.449%(21/4 679)、1229C>T占0.363%(17/4 679)、1555A>G占0.321%(15/4 679)、299_300delAT占0.235%(11/4 679)。

3讨论

本组4 679例受检新生儿中有143例检出四个耳聋基因的13种突变类型，突变耳聋基因携带率为3.056%，其中GJB2基因突变检出率为53.147%、SLC26A4基因突变检出率为33.566%、12SrRNA基因检出率为9.790%、GJB3基因检出率为3.497%，携带率排在前五位的突变位点依次为235delC、IVS7-2A>G、1229C>T 、1555A>G、299_300delAT。即GJB2基因中235delC的携带率最高，SLC26A4基因中IVS7-2A>G携带率最高，这与国内外报道[5～8]的我国耳聋热点基因是一致的。

在听力障碍人群中，遗传性耳聋占比例高达60%，耳聋致病基因携带率为3.6%[9]。 GJB2、GJB3、SLC26A4基因突变导致常染色体隐性遗传性疾病(GJB3基因突变也可有常染色体显性遗传)。GJB2基因突变患者多数表现为出生即有的先天性耳聋，部分表现为婴幼儿期或青少年始发的后天性耳聋，多为语前聋[10]。GJB3基因突变引起进行性高频耳聋。 SLC26A4基因突变患者表现为前庭水管扩大，可引起中度、重度、极重度耳聋，多为语后聋。SLC26A4基因突变的新生儿在成长过程中应严格防止头部外伤、谨慎参加体育活动、防止做头部倒立动作、预防感冒、远离噪声以避免耳道破裂造成迟发性耳聋[11]。12SrRNA基因突变母系遗传线粒体氨基糖苷类抗生素毒性耳聋，可引起中重度、极重度耳聋及感音神经性耳聋，多为语后聋。12SrRNA基因突变新生儿禁止使用耳毒性药物[12]。本组受检新生儿中，检出GJB2基因299_300delAT、235delC纯合突变各2例、235delC杂合突变复合1555A>G纯合突变1例，检出SLC26A4基因IVS7-2A>G纯合突变2例、1229C>T杂合突变复合1975G>C杂合突变1例。对此种新生儿应加强听力筛查(DPOAE)及进一步的诊断性检查(ABR、40Hz-AERP、ASSR等)，以及早进行干预。

在本研究中，检测了常见的四个耳聋基因的20个突变位点，只检出13种突变，有7种突变未检测到，耳聋基因携率约为3.056%，比其他地区的调查结果(3.6%)[9,13]略低。耳聋基因在遗传性耳聋患者中具有较高的遗传异质性，不同地区和不同人群中耳聋基因的突变频率、突变方式和热点突变有很大差异，且不同地域、不同民族有其自身特点。广西是我国少数民族最大的聚集地，也是少数民族种类和人口最多的地方，本研究在对南宁市新生儿突变耳聋基因的筛查中发现了其他省市未检测到的致病突变位点，如SLC26A4基因中1229C>T突变的携带率仅次于IVS7-2A>G。在曾云等[14]的研究中，杭州、厦门地区的耳聋患者中未检出1229C>T突变。说明各地耳聋基因突变类型有差异，应扩大样本量、制定更适合本地的筛查方案，找出本地95%以上耳聋基因突变位点。

目前我国常用的新生儿听力筛查只是通过物理方法检测听力，没有普遍开展对遗传物质(耳聋基因)进行检测，药物性聋或迟发性聋患儿就会被漏诊，达不到早期发现、早期诊断、早期干预的目的。新生儿听力和基因联合筛查能提高耳聋检出率[13]，是早期发现迟发性耳聋的重要手段。

对在本研究中发现的8例耳聋基因纯合突变和复合杂合突变新生儿，应开展进一步的家系调查。对父母为耳聋基因突变携带者，应依据遗传模式进行后代遗传性耳聋的风险评估，并进行下一步的生育指导及产前诊断。对于GJB2、SLC26A4基因杂合突变携带者，如果日后与具有相同基因型的携带者婚配，生育聋儿的风险为25%，应进行遗传风险告知及婚育指导，从而降低遗传性聋病的发生[15，16]。

参考文献：

[1] Olusanya BO. Neonatal hearing screening and intervention in resource-limited settings: an overview[J]. Arch Dis Child， 2012，97(7):654-659.

[2] Mahboubi H， Dwabe S， Fradkin M， et al. Genetics of hearing loss:where are we standing now[J]. Eur Arch Otorhinolaryngol， 2012，269(7):1733-1745.

[3] Papacharalampous GX， Nikolopoulos TP， Davilis DI， et al. Universal newborn hearing screening， a revolutionary diagnosis of deafness:real benefits and limitations[J]. Eur Arch Otorhinolaryngol， 2011，268(10):1399-1406.

[4] 戴朴.遗传性耳聋的预防和阻断[J].中华医学杂志，2007,87(40)：1-3.

[5] 姜鸿，陈晓巍.耳聋基因诊断[J].协和医学杂志，2012，3(2)：134-137.

[6] Yan D， Park HJ， Ouyang XM， et al. Evidence of a founder effect for the 235delC mutation of GJB2(connexin 26) in east Asians[J]. Hum Genet， 2003，114(1)：44-50.

[7] 赵丽亚，李庆忠，翟所强,等.国人前庭水管扩大患者SLC26A4基因的特异性突变[J].听力学及言语疾病杂志，2006,14(2):93-96.

[8] 左路杰，张勋，袁永一，等.北京地区耳聋残疾人群大前庭水管相关SLC26A4基因热点突变分子流行病学调查[J].中华耳科学杂志，2012，10(2)：237-240.

[9] 周怡，刘海红，郝津生，等. 15 343例新生儿耳聋基因普遍筛查结果分析[J].中国听力语言康复科学杂志，2014,12(2)：109-112.

[10] 于飞,韩东一,戴朴,等．1 190例非综合征性耳聋患者GJB2基突变序列分析[J]．中华医学杂志,2007,87(40)：2814-2819．

[11] 袁永一,王国建,黄德亮,等．大前庭水管相关SLC26A4基因热点变区域筛查方案探讨[J].中华耳科学杂志,2010,8(3):292-295．

[12] 刘新,戴朴,黄德亮,等．线粒体DNA A1555G突变大规模筛查及预防意义探讨[J]．中华医学杂志,2006,86(19):1318-1322．

[13] 韩冰，李倩，纵亮，等. 新生儿听力及基因联合筛查临床实践及筛查模式研究[J].中华耳科学杂志，2013,11(3)：380-383.

[14] 曾云，姜丹，冯大飞，等.飞行时间质谱检测技术在非综合征型耳聋基因检测中的应用[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2013，87(12)：985-990.

[15] 李磊，杨涛，吴皓.耳聋基因的筛查与诊断[J].诊断学理论与实践，2010,9(5)：409-411.

[16] 李隽，历建强，王智楠，等.678新生儿听力和聋病易感基因联合筛查结果分析[J].听力与言语疾病杂志，2010,18(5)：419-422.