miR-26a在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义

陕西省肿瘤医院(西安710061)

周　敏　崔晓娜 　赵西侠 　王　勤



miR-26a在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义

陕西省肿瘤医院(西安710061)

周敏崔晓娜 赵西侠 王勤

目的:探讨卵巢癌患者血清miR-26a的表达情况及其在卵巢癌诊断及预后的价值。方法:收集70例卵巢癌患者及健康妇女的血清标本,提取血清总RNA,通过实时定量PCR检测血清miR-26a的表达水平,绘制ROC曲线；并分析miR-26a的表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系,以及miR-26a的表达与病人的生存之间的关系。结果:卵巢癌患者血清中miR-26a表达高于健康对照组,ROC 曲线下面积0.7963,最大约登指数0.729,灵敏度84.3%,特异度88.6%,对应诊断界值3.07。卵巢癌患者血清miR-26a表达与卵巢癌的临床分期、细胞核分化程度呈正相关,而与年龄及组织学类型无显著相关性。血清miR-26a高表达的卵巢癌患者5年生存率要低于血清miR-26a低表达患者。结论:卵巢癌患者血清中miR-26a表达水平增高,为卵巢癌的临床诊断及预后判断提供了重要参考。

卵巢癌由于缺少有效的筛查手段,确诊时70%以上已是晚期,病死率居妇科恶性肿瘤的首位,5年生存率低于30%。miRNA是一组存在于真核生物中的长度约21～23个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,通过降解靶mRNA或抑制其翻译,从而调控基因的表达,调节细胞生长、组织分化等,因而与发育、疾病有关[1]。研究表明：miRNA同肿瘤的发生、发展密切相关[2]，miR-26a在多种恶性肿瘤中异常表达,并与肿瘤细胞的增殖、侵袭迁移等有关[3]。Shen等[4]研究证明MiR-26a促进卵巢癌的增殖及肿瘤的形成。Chung[5]通过miRNA芯片分析了2例卵巢癌患者于健康对照的miRNA血清表达谱,发现miR-26a表达上调,被认为是候选的卵巢癌新的生物标志物。本研究利用RT-qPCR 技术检测卵巢癌患者血清miR-26a的表达并进一步分析其表达意义。

资料与方法

1 一般资料观察组70例为陕西省肿瘤医院2011年7月至2014年7月收治的卵巢癌患者；对照组70例为同期健康体检者。观察组均符合纳入标准:①患者均经影像学和病理组织学确诊为卵巢癌,均为初诊初治患者；②均未接受放、化疗及激素等药物治疗； ③肝肾功能未见异常；④无其他肿瘤及内科疾病。年龄30～75岁,平均60.14±5.33岁；绝经56例,未绝经14例；临床分期: 早期21 例,中期33 例,晚期13 例。对照组70例健康妇女中,年龄28～76岁,平均58.14±8.57岁；绝经53例,未绝经17例。两组受试者在年龄、生理等方面比较无显著性差异(P<0.05),具有可比性。

2 检测方法

2.1标本收集：空腹采血5 ml,真空干燥管中保存,2000r/min 离心10 min 后,-80℃冰箱保存待测。

2.2试剂与主要仪器：miR-26a和内参U6引物购自上海吉玛技术服务公司,Trizol试剂由美国Invitrogen公司提供,miRcute miRNA提取分离试剂盒购自北京天根生化科技有限公司,miRNA反转录引物和反转录试剂购自Ambion 公司,SYBR Premix购自TaKaRa公司；主要仪器: 美国ABI公司7500实时定量PCR仪；-80℃冰箱(Thermo)；美国Beckman台式低温高速离心机。

2.3miR-26a的提取及反转录:按照北京天根生化科技有限公司的miRcute miRNA提取分离试剂盒所述步骤提取miRNA。紫外分光仪检测RNA浓度及纯度。应用美国Ambion 公司的特异性miRNA反转录引物并按照反转录试剂盒步骤合成cDNA,每个反转录体系中含有10 ng 的RNA模板。反转录的条件: 16℃ 30 min, 42℃ 30 min, 85℃ 5 min。

2.4RT-qPCR 反应条件：95℃ 15s,95℃ 10s,60℃ 30s,40个循环。采用的相对定量法计算miR-26a的相对表达量( F ),F = 2-Δct,Δct =ctmiR-26a-ctU6,其中ct为每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。

结　果

1血清miR-26a 的表达水平比较 通过RT-qPCR检测卵巢癌患者血清及健康对照血清中miR-26a 的表达情况,结果显示卵巢癌患者血清中miR-26a的表达水平高于健康对照组(P<0.01)。

2血清miR-26a表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系血清miR-26a表达水平与临床分期密切相关,随着临床进展,血清miR-26a的表达逐渐升高(P<0.05)。此外,血清miR-26a表达与卵巢癌细胞核分化程度亦密切相关,血清miR-26a在卵巢癌细胞核中/低分化组的表达显著高于细胞核高分化组(P<0.05)。miR-26a的表达与卵巢癌其他临床病理特征,包括年龄、组织学类型均无显著相关性(P>0.05)。

3血清miR-26a表达水平对卵巢癌的诊断效率根据上述血清miR-26a的表达水平绘制ROC曲线。结果显示：ROC曲线下面积0.7963,最大约登指数0.729,灵敏度84.3%,特异度88.6%,对应诊断界值3.07。

4血清miR-26a表达与卵巢癌患者生存之间的关系血清miR-26a表达与卵巢癌患者术后5年生存率密切相关,miR-26a高表达的卵巢癌患者术后5年生存率显著低于miR-26a低表达的患者(Log-rank test:P=0.0412)。

讨　论

肿瘤标志物是反映肿瘤存在或者进展的化学类物质,或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织,或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量。肿瘤标志物的存在或量变可以提示肿瘤的性质,借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能,以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。理想的肿瘤标志物的特点：①敏感性高,能早期检测出肿瘤患者；②特异性好,能准确鉴别肿瘤/非肿瘤患者；有器官特异性,方便对肿瘤的定位；③血清中水平与肿瘤体积大小、临床分期相关,用以判断预后；④半衰期短,可反映肿瘤的动态变化,监测治疗效果、复发和转移测定方法精密度、准确性高,操作方便。

研究证明,miRNAs与肿瘤的发生发展有着极为密切的关系,利用芯片等高通量检测技术发现其在肿瘤组织与正常组织之间存在显著差异,并且具有明显的组织特异性,更重要的是miRNAs可以在人体的血清、血浆等体液中检测出来,为开展无创诊断带来了可能[6]。Chai等[7]发现在肝细胞癌中miR-26a通过PI3K/Akt通路下调巨噬细胞集落刺激因子的表达抑制巨噬细胞的招募。在乳腺癌中miR-26a通过靶向作用于HMGA1分子抑制肿瘤细胞的增殖。在胆管癌细胞中ω-3多不饱和脂肪酸通过抑制miR-26a/b的表达上调15-PGDH表达,为ω-3多不饱和脂肪酸治疗胆管癌提供了前期研究基础[8]。miR-26a在多种恶性肿瘤中异常表达,并与肿瘤细胞的增殖、侵袭迁移等有关[4]。如上所述,MiR-26a促进卵巢癌的增殖及肿瘤的形成[5]。与健康对照的miRNA血清相比,卵巢癌患者血清miR-26a表达上调,被认为是候选的卵巢癌新的生物标志物[6]。

我们的研究证实了卵巢癌患者血清中miR-26a表达高于健康对照组,ROC 曲线下面积0.7963,最大约登指数0.729,灵敏度84.3%,特异度88.6%,对应诊断界值3.07,提示血清中miR-26a可以作为卵巢癌诊断的分子指标；卵巢癌患者血清miR-26a表达与卵巢癌的临床分期、病理分级呈正相关,而与年龄无显著相关性；血清中miR-26a高表达的患者5年生存率要低于血清中miR-26a低表达患者。我们的研究为卵巢癌的临床诊断及预后判断提供了重要参考,具有重要的临床应用价值。

[1] Zhang J, Li S, Li L,etal. Exosome and exosomal microRNA: Trafficking, sorting, and function [J]. Genomics Proteomics Bioinformatics, 2015 ,13(1):17-24.

[2] Croset M, Kan C, Clézardin P.Tumour-derived miRNAs and bone metastasis [J].Bonekey Rep,2015,4:688.

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[4] Shen W, Song M, Liu J,etal.MiR-26a promotes ovarian cancerproliferation and tumorigenesis [J]. PLoS One, 2014, 9(1):e86871.

[5] Chung YW, Bae HS, Song JY,etal. Detection of microRNA as novel biomarkers of epithelial ovarian cancer from the serum ofovarian cancer patients[J].Int J Gynecol Cancer，2013,23(4):673-679.

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[8] Yao L, Han C, Song K,etal.Omega-3 polyunsaturated fatty acids upregulate 15-PGDH expression in cholangiocarcinoma cells by Inhibiting miR-26a/b expression [J]. Cancer Res,2015,75(7):1388-1398.

(收稿：2015-06-20)

R737.31

Adoi：10.3969/j.issn.1000-7377.2015.09.073

主题词卵巢肿瘤/诊断卵巢肿瘤/病理学预后@ miR-26a