HPLC法测定饲料中喹乙醇含量的不确定度评定

卢光菊等

摘要 建立了高效液相色谱法（HPLC）测定饲料中喹乙醇含量的不确定度评定的数学模型，探讨了测量过程中不确定度的主要来源及评定方法。求得喹乙醇含量为3.58 mg/kg时，扩展不确定度为0.32 mg/kg（k=2）。

关键词 高效液相色谱法；饲料；喹乙醇；不确定度；评定

中图分类号 Q657.7+2；S816.17 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）01-0268-02

Abstract Amathematical mode of uncertainty evaluation of olaquindox content measurement in feed by High Performance Liquid Chromatography was established.The main source of uncertainty and evaluation method in the process of measuring were discussed.Results showed that，expanded uncertainty was 0.32 mg/kg（k=2）when olaquindox content was 3.58 mg/kg.

Key words HPLC；feed；olaquindox；uncertainty；evaluation

测量不确定度在测量结果临界值的判断、检测方法的确认和实验室间比对等方面具有重要意义[1]，近年来，在检测分析领域日益受到关注，尤其是通过国家认可的实验室，明确要求应有应用测量不确定度的程序。不确定度来源于标准溶液、样品称样量、提取液总体积、取出的提取液体积、定容体积、对照品和样品峰面积、样品前处理过程以及样品重复性测量引入的不确定度。根据《JJF1059—1999测量不确定度评定与表示》[2]及《CNAS-GL06：2006化学分析中不确定度的评估指南》[3]，以《GB/T8381.7—2009饲料中喹乙醇的测定-高效液相色谱法》[4]为例，探讨了该方法不确定度的来源、不确定度分量的合成以及结果表述方法，仅供同行参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

试验用仪器主要有高效液相色谱仪（2695，Waters）；HLB固相萃取柱（30 mg，1 mL）；离心机（CF16RX，日立）；电子天平（PB602-N、XP205，METTLER）。试验用试剂主要有99.0%喹乙醇对照品；Dr.Ehrenstorfer；试验用甲醇为色谱纯，盐酸为分析纯。

1.2 试验方法

称取5 g试样于具塞锥形瓶中，加入50 mL的甲醇+水（比例为5%+95%），室温下避光振荡45 min。提取液在3 500 r/min下离心10 min，上清液经滤纸过滤，收集滤液。固相萃取柱依次用2 mL甲醇和2 mL水活化。准确吸取2 mL滤液加入预先活化好的HLB固相萃取柱，待样液完全流出后，依次用0.02 mol/L的HCl 2 mL、0.1 mol/L的HCl 2 mL和2 mL的甲醇+水（比例为5%+95%）淋洗，吹干小柱，用2 mL甲醇+水（比例为40%+60%）洗脱，定容至2 mL，过膜上机测定[5-7]。

式中，X为样品中喹乙醇的含量（mg/kg）；Ai为样品中喹乙醇的峰面积；cs为标准溶液浓度（μg/L）；V1为提取液总体积（mL）；V2为取出的提取液体积（mL）；V3为定容体积（mL）；As为标准溶液的峰面积；m为样品质量（g）； f回为回收率校正因子； f重为重复性校正因子[8]。

2 结果与分析

2.1 配制标准溶液引入的不确定度

2.2 样品称量引入的不确定度

2.3 提取液总体积、分取体积及定容体积引入的不确定度

样品提取、定容分别用到了50 mL量筒、0～5 mL移液器和2 mL容量瓶。50 mL量筒的容量允差为0.50 mL，充满溶液至刻度，重复10次统计标准偏差为0.204 mL，温度变化区间为0.031 5 mL。0～5 mL移液器的容量允差为0.5%，重复性为0.2%，温度变化区间为0.001 26 mL。2 mL容量瓶的容量允差为0.025 mL，充满溶液至刻度，重复10次统计标准偏差为0.023 3 mL，温度变化区间为0.001 26 mL。计算方法同上，其相对标准不确定度分别为0.007 08、0.001 60、0.013 7。

2.4 样品峰面积和对照品峰面积引入的不确定度

2.5 样品前处理引入的不确定度

对空白样品在添加浓度为1、5、10 mg/kg 3个浓度范围内分别进行4次回收试验，试验结果见表1。

3 结论与讨论

由上述分析结果可知，标准溶液配制、方法回收率、样品重复测量和定容体积对HPLC法测定饲料中喹乙醇含量的不确定度有较大影响，而样品和对照品峰面积、提取液总体积及样品称样量对HPLC法测定饲料中喹乙醇含量的不确定度影响较小。因此，应针对影响不确定度的关键因素，采取改进措施，以有效降低样品测试的不确定度，从而保证检测结果的准确度和置信度。

4 参考文献

[1] 倪育才.实用测量不确定度评定[M].3版.北京：中国计量出版社，2010：10-11.

[2] JJF1059-1999测量不确定度评定与表示[S].北京：中国标准出版社，1999.

[3] 中国合格评定委员会.化学分析中不确定度的评估指南[M].北京：中国计量出版社，2002：142-148.

[4] GB/T8381.7-2009.饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法[S].北京：中国标准出版社，2009.

[5] 王永红，丁平，朱英才.饲料中喹乙醇检测方法研究[J].南方农业，2011（5）：55-56.

[6] 陈枫，黄海，陶利明，等.HPLC法测定饲料中维生素B2的不确定度评定[J].饲料工业，2008（17）：47-49.

[7] 张秋萍，丁建森.全自动固液相测汞仪测定汞的不确定度分析[J].上海预防医学杂志，2006（12）：47-48.

[8] 高洪，陈莲，杨建发，等.喹乙醇致鸡中毒后线粒体膜的ATPase活性变化研究[J].西南农业学报，2007（5）：255-258.