1例抗-HIV反应性结果的原因分析

张晓伟 刘香云 张红利

血站是采集、检验、制备、储存血液，并向临床提供合格用血的医疗卫生机构，保证血液质量安全是血站的职责［1］。2013年4月26日，检验科在工作过程中，发现4月25日采集的同为O型的两份血样中，初检与复检均发现一检测管(称其为A，以下同)抗-HIV有反应性，对应的血袋(A1)小辫抗-HIV亦有反应性;另一检测管(B)抗-HIV反应性，对应的血袋小辫(B1)无反应性。为了探究问题出现的原因，我们设计了本实验。

1 资料与方法

1.1 一般资料 我们将与检测管(B)同车采集的20袋血液重新剪样，用两种HIV试剂进行了抗-HIV检测，所有留样检测结果均为无反应性，把与检测管同血型同日检测的66袋同血型血液(除外检测管A及A1)重新剪血样，用两种HIV试剂进行了抗-HIV检测，66个血检测结果均为无反应性，由此可以得出，该检测管(B)的抗-HIV反应性是孤立，我们找不到与之对应的血袋的。在采血过程中，有可能发生的情况是:采血者违规操作，误将检测管(B)留了(A)的样，或检测管(B)的样没有留够加一定量的(A)样补足。做DNA试验验证检测管(B)和血袋B1的同源性、检测管(B)与(A)是否具有同源性是最简单的方法，遗憾的是联系省内多家专业检验机构(包括公安刑侦部门)，都以抗-HIV反应性为由拒绝检测。为此，我们采取了RH血型小因子方法进行了区分。

1.2 试剂

1.2.1 上海血液生物医药有限责任公司生产抗-C、抗-c、抗-E、抗-e，北京金豪生物药业股份有限公司生产抗-D，检测用血型试剂均在有效期内使用。

1.2.2 北京金豪生物药业股份有限公司的抗-HIV检测试剂，批号:2012111031。

1.2.3 北京万泰生物药业股份有限公司的HIV-Ag/Ab检测试剂，批号:H20130101。

1.3 方法

1.3.1 通过Rh血型检测验证两个检测管是否来自不同献血者，以及与血袋的同源性;

1.3.2 通过全血标本混合后检测Rh血型差别，排除人为留样不足后，补充留样时错误造成标本污染;

1.3.3 找到献血者使用不同抗凝剂对血液进行抗凝;1.3.4 模拟实验:将同时检测反应性血浆，在灭活后，分别取 5 μl、10 μl、20 μl，30 μl，40 μl，50 μl加入无反应性5 ml血浆中，同样使用两种HIV试剂进行ELISA检测。

2 结果

2.1 经过检测发现，该检测管与血袋检测抗-HIV均有反应性的标本，检测管与血袋Rh血型均为CCDee;检测管检测抗-HIV有反应性而血袋检测抗-HIV无反应性的标本，检测管与血袋Rh血型均为CcDEe;检测结果能够证实两个检测管来自不同献血者。

2.2 模拟以Rh血型为CCDee的全血混入Rh血型为CcDEe的全血标本中，以1∶6比例混合，混合后的标本检测c、E抗原时，能发现明显的游离红细胞;而平行检测，检测管检测抗-HIV有反应性而血袋检测抗-HIV无反应性的检测管样本c、E抗原时，没有发现明显的游离红细胞，能够排除检测管留样不足后补充留样的情况。

2.3 与献血者沟通，抽取献血者的血液分别用肝素、EDTA和MAP等抗凝，对抗凝的血液分别进行血液检测，检测结果一致，均为无反应性，排除了该份标本因抗凝剂造成假反应性的可能性。

2.4 模拟实验结果，不同剂量反应性血浆混入5 ml血浆抗-HIV均有反应性，并且检测结果的S/CO值很相近，能够肯定在操作中如果有大于5 μl反应性血浆，不小心污染了另一支5 ml血浆的检测管，完全可以导致另一支检测管亦出现抗-HIV反应性。见表1。

表1 不同剂量反应性血浆混入5 ml血浆检测管ELISA检测结果分析

3 讨论

排除采血过程中的污染。为了彻底查清检测管(B)抗-HIV反应性原因，我们派人驱车百里，找到了检测管(B)的主人，即25日献血者本人。在进行耐心的说服解释工作后，采集两份血样标本，回站后检验科进行了全面检测，HIV试剂检测为无反应性，且所有结果检测结果均为合格。献血者本人的血是清白的，但献血者的检测管(B)却是抗-HIV反应性，而且抗-HIV结果呈强反应性。用RH血型小因子方法得出结论，检测管(B)与对应血袋小辫(B1)具有同源性。由此可得出，采血过程中的污染可以排除。

在检验过程中是否存在污染。排除体采环节污染的因素后，实验室是否存在污染应该认真探究。通过对检验过程的反复回放，发现检验人员在生物安全柜中检测管开盖的过程，存在单手同时开启两个以上检测管的情况。而巧合的是，离心后的检测管A和检测管B，为同一批次接受检验，无法排除单手操作在开盖过程中的震动(因检测管内为负压，有时较难开启)或放入试管架时的震动，加之生物安全柜的负压更易导致液滴的飞溅，导致检测管A微量的血浆飞溅入检测管B，而我们设计的试验证明5 μl的阳性血浆即可造成检验结果抗-HIV反应性，也验证了这一点。

血站检验科在出现检测管结果抗-HIV反应性后，应留取对应母袋血液进行检测结果确认，如有差异，必须进行原因分析，首先通过母袋血液的检测结果以及该批同血型母袋血液的检测结果，判断采血护士在留取标本的工作中是否出现差错;再使用不同抗凝剂抗凝血液的检测结果，排除抗凝剂的影响因素;如果不是以上两种原因，检验科应考虑哪个工作环节存在漏洞。

血站检验科不能像医院的检验科一样只对检验标本负责，血站的工作性质是必须保证血液质量，同时也要对无偿献血者的献血权利负责，必须对我们给出的结果负责，对异常结果必须查明原因，心知肚明。虽然我们无法排除试剂的假阳性，以及窗口期的问题，但是对于出现的血样污染必须重视，检验科在标本再次混匀、离心、开盖、摆架、转移过程中必须小心操作，严防标本飞溅，洒漏［2］。特别是在生物安全柜中开盖，由于存在负压，必须逐一小心开启，严禁手握两个或多个试管同时开盖，以防出现血样污染，造成检验结果差异或操作者自身暴露［3］。

通过上述分析，虽然只是一项违规操作，但是值得引起我们注意，也有必要提醒其他血站对此加以重视，严格操作规程中的每一个细小环节。我们必须在保证临床用血安全的同时，在采血形式紧张的情况下，一定要对我们检测的每一份血液负责，为献血者负责，最大限度的保证血液安全和减少血液浪费。

1 樊凤艳，张松，刘晓莉.Tn多凝集致ABO血型鉴定疑难1例.临床输血与检验，2012，14:83-84.

2 冯秋霞，杨忠思，潘海平，等.青岛地区首次、重复无偿献血者HIV流行率及血液筛查后残余风险度评估.中国输血杂志，2012，25:868-869.

3 孙蕊娟，范乃权，桂丽，等.咸阳地区无偿献血者抗-HIV感染情况分析.中国输血杂志，2013，26:159-160.