普洱茶水浸液对人工龋齿显微硬度的影响

陈 莹，梁迎东，杨华甫，田富明，蓝 海

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

普洱茶为山茶科Theaceae山茶属Camellia多年生、常绿、大叶种乔木，处在北回归线以南，属热带北缘及东南亚热带地区。原产于我国云南省的西双版纳、思茅等地。普洱茶因为生产繁荣而产地也不断在扩大，除了以上提到的西双版纳、思茅这两地州外，昆明、临沧、大理、玉溪、红河、德宏等地也逐渐成为普洱茶的产地〔1〕。普洱茶中含有的生理活性成分，具有杀菌消毒健牙护齿的作用。湖南医科大学曹进教授通过普洱健齿茶进行抑制变形球菌附着能力试验，从中发现普洱茶确实具有抗菌斑形成的作用〔2〕。但目前用显微硬度仪测试普洱茶对牙釉质再矿化作用的研究还未见报道。

龋病（dental caries or tooth decay）是人类常见的多发病之一，WHO 将龋病列在癌症和心血管病之后，居危害人类疾病的第三位〔3〕。变异链球菌是口腔主要的致龋菌之一，变异链球菌在龋病发生发展的关键环节起到了举足轻重的作用，它可以黏附于牙面生长繁殖，形成牙菌斑，生长代谢并产酸，使牙釉质脱矿。20 世纪80 年代，因为再矿化现象的发现，人们也渐渐开始认识到龋病病变实际上是一个脱矿与再矿化的交替变化的过程〔4〕。

本实验通过对再矿化前后离体牛切牙进行显微硬度测定，比较普洱生茶、熟茶对牙釉质再矿化的影响，为普洱茶的进一步利用与开发提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器设备电子天平（波特乐-托利多仪器有限公司）、303-A-I 型热点恒温培养箱（萧山永发电器有限公司）、ZXQ-1全自动金相镶嵌机（上海维纬电子科技有限公司）、YMP-2B 金相试样磨抛机（苏州欧卡精密光学仪器有限公司）、402MVD型全自动转塔数显显微硬度仪（依工测试测量仪器上海有限公司）、PHS-25 数字酸度计（上海鹏顺科学仪器有限公司）、SY5200D超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 试剂材料脱矿液（2.2 mmol/L CaCl2、2.2 mmol/L NaH2PO4、0.05 mol/L CH3COOH pH=4.0）；再矿化液（1.5 mmol/L CaCl2、0.09 mmol/L NaH2PO4、0.15 mol/L KCl）；人工唾液（5.880 g/L NaHCO3、5.580 g/L Na2HPO4、0.340 g/L KCl、0.360 g/L MgCl2、0.282 g/L NaCl pH=5.6）；NaF溶液（20 mg/mL）；0.9%生理盐水。以上试剂均为分析纯。

普洱生茶、熟茶均购于大理沃尔玛超市，由普洱市圣普茶叶有限公司生产的圣邦普洱茶礼盒，2011年5月28日生产。

1.3 普洱茶水浸液的制备9.6 g茶叶浸泡于100 mL去离子水中，搅拌，煮沸后，放置1 h，过滤，进行倍比稀释。5个浓度分别为 96、48、24、12、6 mg/mL 生茶、熟茶的水浸液制备方法相同。

1.4 牛切牙的处理及脱矿市场购买新鲜牛切牙进行处理，除去牛切牙软组织以及根部，将牙髓剔除，用去离子水将冠髓冲洗干净，超声清洗40 min，选择无裂痕，大小合适的牛切牙，在阴凉处自然晾干后放入烧杯，加入适量（需要没过所有牙齿）脱矿液，密封后放入37 ℃的恒温箱保存10 d，其中第5天需要换一次脱矿液。

1.5 脱矿标本的制备用YMP-2B 金相试样磨抛机先在脱矿后的牛切牙釉质上打磨出完好的牙釉质测试面，再用ZXQ-1全自动金相镶嵌机将牛切牙测试面之外的其余部分用镶嵌粉包埋，表面开窗2 cm×4 cm。用402MVD 型全自动转塔数显显微硬度仪，在压力200 g条件下施力15 s，于每个标本开窗中央垂直测试5 个点，每个点测3 次，取平均值〔5〕。选取硬度值差异无统计学意义（经配对t检验分析，P＞0.05）的72 颗牛切牙标本作为实验样本随机分为12组，每组6颗，分别编为生茶96 mg/mL组、生茶48 mg/mL组、生茶24 mg/mL组、生茶12 mg/mL组、生茶6 mg/mL组、熟茶96 mg/mL组、熟茶48 mg/mL组、熟茶 24 mg/mL 组、熟茶 12 mg/mL 组、熟茶 6 mg/mL组、20 mg/mL NaF组（阳性对照组）、去离子水组（阴性对照组）。

1.6 再矿化实验脱矿化的牛切牙标本，用棉签分别蘸取不同浓度的普洱茶水浸液、去离子水、NaF溶液涂抹，每颗牙齿均匀涂抹3次，每次约1 min，然后用人工唾液再涂抹1 min。牙齿涂抹好放入37 ℃恒温箱中，每天涂抹4次，持续15 d〔4〕，用402MVD型全自动转塔数显显微硬度仪用上述方法测试牙釉质硬度3次，取其平均值。

1.7 统计学分析采用SPSS11.0 统计软件对数据（±s）进行方差分析〔6〕，两两比较用LSD-t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

表1 不同浓度普洱茶水浸液再矿化前后牙釉质表层显微硬度平均值（±s）

表1 不同浓度普洱茶水浸液再矿化前后牙釉质表层显微硬度平均值（±s）

注：再矿化前后对比，*P＜0.05，**P＞0.05。

组别生茶96 mg/mL生茶48 mg/mL生茶24 mg/mL生茶12 mg/mL生茶6 mg/mL熟茶96 mg/mL熟茶48 mg/mL熟茶24 mg/mL熟茶12 mg/mL熟茶6 mg/mL NaF 20 mg/mL去离子水再矿化前/(kg/mm2)310.35±19.26 321.52±19.99 298.30±21.06 302.00±19.91 302.00±19.34 302.00±20.63 306.70±21.86 313.60±11.93 344.15±16.51 336.98±12.38 324.80±15.83 287.58±18.45再矿化后/(kg/mm2)411.26±22.24*380.52±23.73*354.25±22.34*338.11±20.29**337.60±19.95**376.03±14.03*378.03±7.11*333.00±19.20**363.51±23.20**351.53±11.36**405.17±12.07*304.32±14.64**

采用单因素方差分析的结果显示：釉质脱矿标本经 96 mg/mL 生茶、48 mg/mL 生茶、24 mg/mL 生茶、96 mg/mL熟茶、48 mg/mL熟茶、20 mg/mL NaF处理后，各组釉质硬度值均较基线值明显增高（P＜0.05），说明生茶（96、48、24 mg/mL）、熟茶（96、48 mg/mL）和20 mg/mL NaF 对脱矿牛切牙都具有再矿化能力。

用LSD 法进行再矿化后组间比较，结果显示：高浓度的生茶、熟茶对脱矿牛切牙再矿化均有显著促进再矿化作用，且生茶组和熟茶组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。但20 mg/mL NaF组与普洱茶高浓度组对脱矿牛切牙再矿化作用差异有统计学意义（P＜0.05），即普洱茶组再矿化作用不如20 mg/mL NaF组。

其他低浓度的生茶、熟茶水浸液和去离子水再矿化前后的釉质硬度差异无统计学意义（P＞0.05），对脱矿牛切牙无明显的再矿化作用。

3 讨论

在已经脱矿的牙齿硬组织内发生矿物质的重新沉积并进行结晶化称为再矿化。再矿化可以使部分脱矿晶体恢复正常和促进新晶体形成。其主要物质基础是磷酸盐类〔7〕。

经过多年的实验经验积累，人们已经认可NaF作为主要的防龋药物，其防龋机制主要是影响牙形态，形成氟磷灰石，降低釉质溶解度促进釉质再矿化。NaF 之所以只能保持在20 mg/mL 的低浓度安全防龋范围，是因为氟浓度的稳定性、毒性、亚毒性，以及耐氟菌的出现等问题现在并没有解决，使NaF的应用仍受到限制〔8〕，NaF组再矿化作用强于普洱茶组是因为它是无机化合物直接引发的离子取代及补给，高浓度的氟离子直接取代了牙釉质的主要成分羟基磷灰石的羟基，形成晶格缩小、硬度大的氟磷灰石，再矿化作用强。普洱茶中含有氟化物和茶多酚，氟化物也能使羟基磷灰石转化为硬度更高、稳定性更好的氟磷灰石，另外，茶多酚中含有的的儿茶素通过对致龋菌-变形球菌所产生的葡糖基转移酶（GTF）活性的抑制作用，有效控制了牙菌斑在牙面的黏附，从而达到防止牙釉质脱矿、促进再矿化的作用〔9〕。普洱茶的再矿化作用虽然不及化学物质NaF，但具有天然植物所特有的安全性且云南省资源丰富。随着研究的不断深入，在亚热带地区的低氟区和适氟区，顺着趋势的发展普洱茶也将成为安全有效的防龋用茶品种之一。

〔1〕宋丽媛，汪俊. 釉质表层特征及其脱矿与再矿化行为〔J〕.牙体牙髓牙周病学杂志，2009，19（9）：537-540.

〔2〕曹进.茶中儿茶素对变形链球菌的生长、产酸、黏附影响的体外实验〔J〕.中华口腔医学杂志，1991（3）：161-163.

〔3〕蓝海，罗常辉.隔山消和五倍子水提物对牛切牙脱矿与再矿化的动力学研究〔J〕.中成药，2011，33（4）：692-694.

〔4〕赵今，李卫新，刘弈杉，等.年轻恒牙釉质脱矿与再矿化实验研究〔J〕.新疆医科大学学报，2005，28（6）：539-542.

〔5〕陈宏，丁熙，张秀华.含氟牙膏对离体恒牙脱矿再矿化作用的实验研究〔J〕.口腔医学，2008，28（10）：509-511.

〔6〕罗家洪，唐军.医学统计学学习指导〔M〕.北京：科学出版社，2007：1-228.

〔7〕蓝海，杨颖，杨晓莉，等.隔山消水提物对再矿化及抗酸脱矿作用的体外研究〔J〕.中国现代医学杂志，2008，18（24）：3639-3641.

〔8〕刁水全，陈娜，李翔，等.隔山消与氟化钠对牛切牙脱矿的动力学研究〔J〕.大理学院学报，2010，9（8）：12-14.

〔9〕赵燕，湛吉洪，刘箭卫.普洱茶抗龋作用的研究（1）：氟，茶多酚含量的动态观察〔J〕.牙病防治杂志，1993，1（1）：17-19.