西吡氯铵漱口液对铜绿假单胞菌和MRSA的抗菌活性研究

王新红，殷 丽，魏 娟，张丽梅，廖晚霞，罗 薇

（广州医科大学附属口腔医院/广州口腔病研究所/口腔医学重点实验室，广东广州510140）

西吡氯铵漱口液对铜绿假单胞菌和MRSA的抗菌活性研究

王新红，殷 丽，魏 娟，张丽梅，廖晚霞，罗 薇

（广州医科大学附属口腔医院/广州口腔病研究所/口腔医学重点实验室，广东广州510140）

目的 检测西吡氯铵漱口液对铜绿假单胞菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的抗菌活性。方法参照美国临床实验室标准化委员会规范，利用微量肉汤稀释法以96孔板进行检测。用加入不同稀释度药液的水解酪蛋白肉汤培养细菌，通过观察不同孔内细菌生长现象判断其抗菌效果。结果 0.1%西吡氯铵对MRSA抗菌效果较为明显，绝大多数菌株最小抗菌浓度（MIC）为0.016mg/mL；而对铜绿假单胞菌抗菌效果差异较大，有些菌株MIC大于0.5mg/mL。结论 西吡氯铵漱口液对MRSA具有较好的抗菌效果，而对铜绿假单胞菌的抗菌效果则相对较弱，且不同菌株之间差异较大。

西吡氯铵； 铜绿假单胞菌； MRSA； 微量肉汤稀释法； 抗菌活性

西吡氯铵（CPC）主要成分为阳离子季铵化合物，属于表面活性剂。目前，国内已有文献报道，该制剂可吸附于口腔黏膜，对黏膜无明显刺激作用，且无着色效应[1]。该制剂在国内外均属非处方药物，可应用于口腔卫生保健[2]，初步研究证实其对口腔感染中常见的细菌和真菌如牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、黏性放线菌和具核梭杆菌及白色假丝酵母菌等均具有一定的抗菌作用[3]，但对临床常见耐药菌的抗菌作用方面研究较少。因此，本文选取铜绿假单胞菌（含标准株）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA，含标准株）2种临床常见耐药性较强的菌株作为实验材料进行研究。

铜绿假单胞菌为常见的机会性致病菌，该菌对环境的适应能力较强，也是天然耐药菌，对常见的多种抗生素均有一定的耐药性，易出现多重耐药菌。该菌可引起伤口化脓性感染，是颌面部术后的常见感染菌，在肿瘤患者放疗、化疗之后易于引起口腔黏膜感染，还可导致败血症[4]。MRSA是常见的医院内感染细菌，有较强的耐药性，可引起局部化脓性感染、败血症及脓毒血症等，容易在口腔中定植，进而造成感染[5]。本文以上述2种菌株的标准株及临床分离株为实验材料，对0.1%CPC漱口液的抗菌活性进行了测定。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品 0.1%CPC漱口液（杭州民生药业有限公司，批号：131003），硫酸庆大霉素注射液（欣辰药业股份有限公司，批号：1305096311），0.9%氯化钠注射液（山东华信制药集团股份有限公司，批号：20140531S02）。

1.1.2 培养基 营养琼脂（北京奥博星生物公司，批号：20130707），水解酪蛋白（MH）肉汤（北京奥博星生物公司，批号：20140611），以上培养基均按说明书配制，并按规定条件121℃高压蒸汽灭菌15min备用。

1.1.3 主要仪器设备 麦氏比浊管；大龙牌移液器（10、100、50~300μL 12道），96孔无菌细胞培养板及一次性无菌培养皿（直径90mm），均购自北京博通生物试剂公司；中科美菱YC-300L冷藏柜，购自广州深华公司；DNP-9300-BS-11电热恒温培养箱，购自上海和勤分析仪器有限公司；SpectraMax M5酶标仪，购自美国Molecular Devices公司。

1.1.4 实验细菌 实验所用菌株由广州医科大学附属羊城医院检验科提供。铜绿假单胞菌标准菌株2株[CMCC（B）10110-ATCC27853]，另有临床分离株共计6株。金黄色葡萄球菌标准株CMCC（B）26003，临床分离MRSA共计7株。以上各菌株接种于营养琼脂培养基平板表面，37℃24 h培养后，挑取其菌苔以生理盐水配成1×106cfu/mL的对应菌液备用。

1.2 方法 采用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的微量稀释法，在此基础上稍作改良，以96孔板培养细菌，根据细菌生长现象判定其最小抗菌浓度（MIC）。操作方法：在96孔板中每孔加入MH肉汤100μL，然后在第1行中加入100μL药液，从第1行中吸取100μL混合液加入第2行，依次类推至第8行，待检药物等效浓度为1mg/mL，经递倍稀释得到2、4、8、16、32、64、128、256倍稀释梯度。另单独设置阴性对照，直接加入相应菌液，观察生长现象作为对比。同时设立药物2、4、8、16、32、64、128、256倍稀释梯度，并以MH肉汤空白做为辅助对比。阳性对照孔每孔加入10μL硫酸庆大霉素注射液。以上药液和对照加样完毕后，每孔加入1×106的对应菌液10μL，每种药物做3次平行试验，37℃24 h培养，酶标仪测定培养板600 nm波长下OD值，结合细菌生长情况判断结果。

2 结 果

2.1 阳性、阴性及空白对照 经37℃24 h培养后，硫酸庆大霉素阳性对照孔中无明显生长现象，阴性孔细菌对照中细菌生长良好，肉眼可见明显浑浊，经酶标仪测定后，其吸光度与硫酸庆大霉素阳性对照孔差异明显。药物稀释梯度各孔及MH肉汤空白孔中均无明显生长现象。

2.2 铜绿假单胞菌抗菌实验结果（含标准菌株） 铜绿假单胞菌标准菌株CMCC（B）10110的MIC为0.063mg/mL，ATCC27853的MIC为0.130mg/mL；临床分离菌株中，株1和株3在0.5mg/mL时依然无明显抗菌效果，株2和株6的MIC为0.031mg/mL，株4和株5的MIC均为0.016mg/mL。见表1。

表1 铜绿假单胞菌抗菌实验结果

2.3 MRSA抗菌实验结果（含标准株） MRSA标准菌株CMCC（B）26003的MIC为0.016mg/mL；临床分离MRSA菌株中，株1、2、5、6的MIC均为0.016mg/mL，株3、4、7的MIC均为0.031mg/mL。

表2 MRSA抗菌实验结果

3 讨 论

有研究显示，CPC是一种中性表面活性剂，可通过降低表面张力，增强细胞的通透性而抑制并杀灭细菌和真菌，不易受常见细菌耐药机制的影响，因此具有较为广泛的抗菌谱，对常见呼吸道、消化道感染细菌如金黄色葡萄球菌、链球菌、具核梭菌、幽门螺杆菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌等均有一定抑制效果[6]，可阻止口腔中牙菌斑的形成，还可阻止口腔感染中常见的真菌如白色假丝酵母菌、新生隐球菌等，对口腔真菌感染有较好的疗效[7]，特别是对白色假丝酵母菌所致感染治疗效果优于聚维酮碘[8]。该药物用药后不良反应尚不明确，目前除个别患者用药后出现味觉障碍外，无其他不良反应，对口腔正常菌群无明显影响[9]，因而在临床工作中广泛用于消毒处理。CPC为阳离子型表面活性剂，其主要作用机制为降低表面张力，增强细胞通透性而抑制细菌的生长[3]，国内外已有较多医院在口腔临床中使用该药，主要用于抗细菌及真菌感染，作为口腔疾病的辅助治疗药物，还可用于日常口腔护理及口腔清洁。

金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌是临床常见的创伤感染细菌，其中铜绿假单胞菌是医院内感染常见菌，具有天然耐药性，对多种抗生素不敏感，常在人体咽部定植，在人体免疫力下降时极易引发感染。近年来在呼吸道感染中，由该菌所致病例比例逐年上升，其感染治疗难度相对较大[10]。有研究显示，头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南和美罗培南近2年的耐药率均有不同程度增高，而这些药物均为临床中抗铜绿假单胞菌常用药物[11]。MRSA是临床常见耐药菌代表之一，其耐药机制主要在于基因组中固有耐药序列及耐药质粒转移，还有基因表达调控相关的耐药及主动外排系统等。由于抗菌药物的广泛使用，目前MRSA已经成为医院内感染的主要致病菌。该菌生存力强，易于在口咽部定植，可致免疫力降低，危重患者可能出现脓毒血症等继发感染，增加了治疗难度[12]。

本研究结果显示，0.1%CPC漱口液对多株铜绿假单胞菌和MRSA标准株、临床株均有一定抑制效果，其中对 MRSA抗菌效果较为显著，绝大多数菌株为0.016mg/mL；而对铜绿假单胞菌抗菌效果差异较大，有些临床菌株在0.5mg/mL浓度下依然无明显抗菌效果。此结果与既往相关体外研究基本一致[3-4，7]，说明CPC对MRSA有较好的抑制效果，用于临床可有效抑制MRSA引起的相关口腔感染，对铜绿假单胞菌抑制效果较弱且有较大差异。有研究者认为，该结果与铜绿假单胞菌较为复杂的耐药机制有关，该菌可通过细胞膜通透性降低、主动外排泵及钝化酶产生等各种机制产生耐药性[13]，特别是细胞膜通透性降低，对表面活性剂的作用效果有显著影响。MRSA的耐药机制主要是染色体及质粒介导的耐药、基因表达调控有关的耐药和主动外排系统等[14]，与铜绿假单胞菌有明显不同，导致二者对表面活性剂的敏感性有显著差异。因此，在口腔临床中应对铜绿假单胞菌引起的相关感染时，应考虑采用其他消毒剂以达到理想效果。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.09.045

B

1009-5519（2015）09-1389-03

2014-09-20

2014-12-10）

王新红（1976-），女，山东威海人，博士研究生，副教授，主要从事牙周病及黏膜病学的医教研工作；E-mail：wangxinhongtougao@163.com。