p16基因在不同非小细胞肺癌之间的表达比较

延安大学附属医院肿瘤科(延安 716000) 冯 蓓 杨卫卫 杨小平 冯 艳

·临床病理·

p16基因在不同非小细胞肺癌之间的表达比较

延安大学附属医院肿瘤科(延安 716000) 冯 蓓 杨卫卫 杨小平 冯 艳

目的：探讨p16基因在不同类型非小细胞肺癌中的表达。方法：采用链霉素抗生物素-过氧化酶免疫组化法(SP法)检测63例非小细胞肺癌患者及26例肺良性病变患者中p16蛋白的表达情况。结果：肺良性疾病组织中p16蛋白阳性率为100%，而非小细胞肺癌组织中P16蛋白阳性率为47.62%，两者相比有显著性差异(P<0.05);不同组织、非小细胞肺癌不同发展阶段的p16蛋白表达情况也呈显著性差异(P<0.05)。结论：p16的基因表达率与非小细胞肺癌不同组织类型有明显差异；p16的基因表达率会随着非小细胞肺癌的发展阶段产生不同的变化。

原发支气管肺癌，简称肺癌，是最常见的恶性肿瘤之一，也是人类癌症死亡的主要原因之一，无论男女，其发病率和病死率呈逐年上升趋势，其中病死率已占癌症病死率之首[1]。但早期肺癌症状不易表现出来，75 %以上的患者在确诊时肿瘤已局部进展或发生转移，在这些患者中只有将近5%的肺癌患者诊断后存活能够超过5年以上[2]。大多数患者在临床诊断时已属晚期，随着肿瘤分子生物学研究领域的发展，许多人在研究肿瘤基因的异常表达与肿瘤的关系中发现，在肺癌的发生、发展过程中常伴随着一些肿瘤基因的异常变化。近年来肺癌的早期诊断越来越受到重视[3]，因此检测人体组织中某些基因的异常变化对肺癌的早期诊断及恶性程度的判定具有一定的临床意义[4]。肿瘤抑癌基因的重要关键点就是防止细胞周期发生紊乱而引起的无限制的细胞增殖。p16基因就是这样一种抑癌基因，若p16一旦失活，失活后的p16蛋白对细胞的抑制作用减弱，就会引起细胞的增殖加快[5]，使细胞周期调节失去控制，无限制的进入了S期。后果就是导致肿瘤细胞逃避负性调控[6]而引起恶性肿瘤的发生发展。p16基因异常是肿瘤发生与发展过程中一个重要的因素[7]，尤其是在侵袭力更强的肿瘤中p16 的过表达作用更明显[8]。可见在恶性肿瘤中的起因和发展与p16基因的失活有着重要的联系，需要我们人类对其有更加深入广泛的研究。本研究采用免疫组化技术大范围检测不同类型及阶段非小细胞肺癌组织中p16蛋白的表达阳性率，旨在为临床诊断提供更为有效的依据。

资料与方法

1 临床资料 收集我院病理证实的肺癌患者63例，其中男39例，女24例，年龄38～71岁，平均53岁。鳞癌36例，腺癌27例。TNM作为分期标准：I期22例，II期19例，III期22例。高、中分化40例，低分化23例；伴有淋巴结转移36例，无转移者27例。另选肺良性患者26例为对照组，其中男15例，女11例，年龄24～72岁，支气管扩张9例，肺炎性甲瘤5例，结核12例。

2 研究方法 取患者手术后切除的新鲜病变组织标本。通过用10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，最后制成厚4μm的切片，用链霉素抗生物素-过氧化酶免疫组化法(SP法)对组织标本进行p16蛋白染色，应用图像分析系统进行定量灰度扫描后进行分析。分析p16蛋白表达情况。免疫组化染色：严格按照试剂盒说明书进行每一项实验步骤。

3 结果判定 棕色颗粒(见图2)为p16蛋白的阳性反应，图1为p16蛋白对照组。阳性细胞等级划分：<5%; 5%～25%;25%5～0%;50%～75%;>75%。

4 统计学处理 本研究采用χ2检验与Spearman等级相关法，以P<0.05为有显著性差异，P<0.01为有极显著性差异。

结 果

1 非小细胞肺癌不同类型及发展阶段之间p16蛋白的表达差异 见附表。非小细胞肺癌p16蛋白表达与组织学类型、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)，与分化程度无关(P>0.05)。

2 两组患者p16蛋白表达率比较 见图1～2。良性肺组织中的p16蛋白表达率达到了100%，远高于各肺癌组织中该基因蛋白的表达率(47.62%，30/63)，两组患者间有显著性差异(P<0.05)。

讨 论

p16属于肿瘤抑癌基因，在染色体的9p21区[3]；通过参与细胞周期的进程，抑制了细胞的增殖和分裂，直接参予调控的一种细胞周期的基本基因。 p16基因编码的蛋白可以把细胞阻滞在G1期，阻止细胞进入S期。p16基因的失活最终的结果就是导致了细胞周期的正常调控，使得细胞异常增殖和肿瘤的发生。基因缺失、点突变及甲基化异常均可使p16失活[9]。p16基因失活后则无法通过表达蛋白与CDK4-CyclinD复合物结合，使细胞无限制进入G1/S期，并加速分裂，后果就是导致肿瘤细胞逃避负性调控[6]而引起恶性肿瘤的发生发展。因此，p16基因在发生任何异常时，都可以导致恶性肿瘤的发生。肿瘤与基因的改变有着重要的联系[10]，已有实验针对p16基因甲基化，证实对肺癌的早期诊断有一定的临床意义[11]。由于p16本身其具有重要的生物学功能，同时它具有纯合性缺失或突变存在很多的肿瘤组织中，使得p16基因可以用于癌症靶标的治疗。同时p16基因的分子量小，在用于基因的诊疗过程中，更加方便，更加容易操作。并且与其他的肿瘤基因的相互作用中，可以发挥更好的协同作用，抑癌的作用得到了加强。这对靶向药物的发明有着极其重要的临床意义[12]。

附表 不同类型及发展阶段之间肺癌p16蛋白的表达差异

图1 p16蛋白对照组

图2 p16蛋白阳性反应组

本研究结果得出：p16蛋白在良性肺病变组织中的阳性率表达显著高于肺癌病灶，表明p16蛋白的损失可能与p16基因失活有关，肺癌的发展有可能与该蛋白的表达缺失有关。腺癌和鳞癌的阳性表达率差异显著，明显高于鳞癌。Ⅰ～Ⅱ期肺癌阳性表达率显著高于III期，淋巴结蛋白转移的p16蛋白阳性率显著下降(转移的为19.44%，没转移的为62.96%)；可见，p16基因缺失的比例会随着癌症程度加重及发生转移而增加，可用于预测肺癌的发展状况，是一项很重要的指标。

最新研究表明：细胞周期蛋白复合物是用于调节G1的节点，其中，Rb蛋白磷酸化中起着必不可少的作用。TRIO-18研究已经证实PD 0332991(Palbociclib)在治疗晚期乳腺癌中的有效性。Palbociclib可以选择性地抑制CDK4和CDK6，是一种口服的靶向药，它可以抑制肿瘤细胞的发展，使细胞周期的调控恢复正常。在陈首慧[13]的研究中证实5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态,5-Aza-CdR有可能作为肺癌治疗的有效药物。

因此，检测p16基因在肺癌组织中的表达水平，是对临床的早期诊断，及判断肿瘤的性质及预后的一项重要指标，对潜在的靶向药物治疗提供了一定的依据。

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(收稿：2014-12-10)

癌，非小细胞肺/病理学 肺疾病/病理学 蛋白/代谢 @p16蛋白

R734.2

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.05.045