拉米夫定相关病毒基因检测及后续处理

宋家毅，满丽萍

拉米夫定应用后出现耐药迹象的病例包括HBV－DNA回升进行病毒基因型检测结果发现，本地区乙肝病毒以C 型为主。我们采用基因芯片技术检测出与拉米夫定相关基因变异阳性例数72 例，对其跟踪后续抗病毒治疗，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 资料 本资料收集于2012年5月－2014年2月我院门诊及住院患者，单独应用拉米夫定(LAM)抗病毒诊疗期间出现HBV-DNA 和/或ALT 复升病例200 例，其中男122 例，女78 例，年龄75～15 岁，平均年龄46 岁。其中200 例乙肝基因检测阳性且以C 型为主。检测出拉米夫定相关变异基因阳性例数72 例。后续抗病毒采用加用阿德福韦酯(ADV)和改用恩替卡韦(ETV)加阿德福韦酯，随机分为LAM +ADV 组36例和ETV +ADV 组20 例。24 周和48 周回顾性收集HBVDNA 和肝功能，观查2 组临床疗效。抗病毒和降酶治疗使用正大天晴公司生产的阿德福韦酯，恩替卡韦和甘草酸制剂。

1.2 方法 乙肝病毒血清型，拉米夫定相关变异基因和HBV-DNA 检测采用安普利公司960 型PCR 扩增仪及试剂盒和亚利生YN-H16 型恒温杂交仪。肝功能检测使用日立7180型全自动生化分析仪。

1.3 统计学方法 采用SPSS11.0 软件，对加用阿德福韦酯和换用恩替卡韦加阿德福韦酯2 组的HBV－DNAH 和ALT数据进行检测分析和差异比较。

2 结果

2.1 乙肝病毒基因型检测分型 200 例患者检测基因阳性200 例，其中B 型34 例(17%)，C 型154 例(77%)。B+C 型7 例(3.5%)。说明本地区慢性乙肝以C 型为主，B 型次之。

2.2 相关基因变异 本资料200 例拉米夫定相关变异基因检测72 例呈阳性结果。其中RT180-M 22(30.6%)，RT204-V18 例(25.0%)，RT204-I 10 例(13.9%)RT204V + I 5 例(6.9%)，RT 207-I 3 例(18.0%)，RT 181-V 8 例(8.7%)，RT 236-T 1 例(0.14%)。见表1。

表1 拉米夫定相关变异基因(n，%)

2.3 67 例阳性患者更换治疗方案后HBV－DNA 及ALT 变化比较 2 组病例24 周HBV-DNA 和ALT 检测结果，加用阿德福韦酯组HBV-DNA 下降21/36(58.3%)，ALT 复常34/36(94.4)。换用恩替卡韦联合阿德福韦酯组为16/20(80%)和19/20(95%)。48 周DNA 阴转为35/36(96.4%)，ALT 复常35/36(97.2)，和17/20(85%)和18/20(90%)。见表2、表3。注:DNA 阴转率，P＜0.05;ALT 复常率，P＞0.1。

表2 拉米夫定+阿德福韦和恩替卡韦+阿德福韦24 周治疗(n，%)

表3 拉米夫定+阿德福韦和恩替卡韦+阿德福韦48 周治疗(n，%)

注:DNA 阴转率，P＞0.1;ALT 复常率，P＞0.1。

3 讨论

我国乙肝病毒基因以C 型为主，其次为B 型。与国内有关报告相一致［1－4］。

利用基因芯片技术检测乙肝拉米夫定相关变异基因阳性率较低。200 例中累积各型变异株72 例，阳性率为36%。其中以YMDD 变异为主，RT204V.I 共33 例。其次为RT180M 22 例。此次，相关基因变异检测中未能检测到常见的RT173变异株，反而发现了恩替卡韦和阿德福韦相关变异株，这可能说明拉米夫定治疗前就存在，或由拉米夫定所诱发。如果是后者这可能影响阿德福韦和恩替卡韦疗效的原因［4-5］。

从理论上讲拉米夫定基因变异后加用阿德福韦或换恩替卡韦加阿德福韦是可行的。由于拉米夫定变异株的存在应该讲换用恩替卡韦加阿德福韦酯优于单纯加阿德福韦酯。我们的观察治疗24 周HBV－DNA 阴转率换用恩替卡韦组较优，48 周时已无差异。ALT 复常率2 组间无差异。通过本组资料观察分析，笔者得出如下结论:

(1)本地区乙肝病毒血清型以C 型为多其次为B 型。(2)200 例拉米夫定诱导的基因变异67 阳性，表现RT204M为主RT180 次之，另外还有RT181V 和RT236T［4］。使得拉米夫定敏感性明显下降同时也对阿德福韦酯和恩替卡韦的疗效有影响［5］。(3)我们对于拉米夫定治疗失败其基因相关变异检测阳性率不高，仅为35.5%，不及国内相关报告［1-2，6-7］。这可能与检测方法不敏感有关或者变异病毒库还未达到一定水平量所致。(4)挽救性治疗采用以上两种方法均有效，48 周后疗效无差异。

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