新生儿溶血DAT三种检测方法的比较

甘泉涌，叶海辉

（1.襄阳职业技术学院 医学院， 湖北 襄阳 441021；2.襄阳市中心医院 检验部， 湖北 襄阳 441021）

近年来，新生儿溶血病（Hemolytic Disease of New-born，HDN）的诊断与防治不断受到重视，成为临床研究的一大热点，建立一种能够尽早为妇幼科提供HDN实验室诊断依据的简便快速而灵敏度高的检测方法尤为重要。新生儿溶血三项试验即红细胞直接抗人球蛋白试验（直抗试验）、血清游离抗体试验（游离试验）和红细胞致敏抗体放散试验（放散试验）。其中，提高直接抗人球蛋白（DAT）检测灵敏度能够相应提高HDN的初次确诊率。[1]本文探讨了临床疑似HDN患儿直接抗人球蛋白的三种检测方法，对HDN的诊断有着较为重要的意义。

一、材料和方法

（一）标本来源

2011年7月至2013年7月在襄阳市中心医院门诊及住院的疑似ABO-HDN的高胆红素血症新生儿242例，均排除遗传性溶血性疾病，年龄0.5 d～7 d，男134例，女108例。抽取患儿静脉血5 ml，同时抽取母亲血液，避免溶血，离心得血清，并制备红细胞悬液备用。母亲血型均为O型，Rh（+）；患儿血型均为Rh（+），A型110例，B例132例。

（二）主要仪器和试剂

微柱凝胶抗人球蛋白检测卡（西班牙Grifols公司）、玻璃珠微柱抗人球蛋白检测卡（美国强生Ortho公司）、抗人球蛋白试剂（上海血液生物医药有限公司）、ABO试剂红细胞（上海血液生物医药有限公司）、卡式离心机ID-Centrifuge-12 SⅡ（瑞士Diamed公司）、微电脑控制离心机（台湾贝索生物技术有限公司）。

（三）微柱凝胶卡式法

将微柱凝胶抗人球蛋白检测卡第一孔设为测定孔，向内加入50 uL 1%患儿红细胞悬液；设第二孔为阴性对照，加入50 uL 1%标准红细胞悬液，用专用离心机离心后，按照《全国临床检验操作规程》判读结果。[2]

（四）玻璃珠微柱卡式法

将玻璃珠微柱抗人球蛋白检测卡第一孔设为测定孔，向内加入50 uL 1%患儿红细胞悬液；设第二孔为阴性对照，加入50 uL 1%标准红细胞悬液，用专用离心机离心后，按照《全国临床检验操作规程》判读结果。[2]

（五）传统试管法

向小试管中滴加50 uL生理盐水，再加入50 uL抗人球蛋白血清，混匀，离心1 min后，观察结果，凝集者为阳性，无凝集者为阴性。同时设生理盐水为阴性对照。

（六）统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.不同母婴血型新生儿溶血DAT检测阳性结果分布：242例疑似HDN患儿中，不同检测方法，母婴血型O-A和O-B的DAT阳性例数不同，见表1。

表1 不同母婴血型、不同检测方法DAT检测结果

2.三种方法检测242例DAT结果比较：见表2。

表2 三种方法检测DAT结果比较

经统计学分析，三种方法任何两种比较，其差异均有统计学意义（P＜0.05）。

3.三种方法DAT不同凝集水平构成分布：见表3。

表3 三种方法DAT不同凝集水平构成分布（n）

三、讨论

新生儿溶血病包括胎儿和新生儿溶血，主要是母亲和胎儿血型不合时，胎儿红细胞经胎盘进入母体，刺激后者产生相应的抗体，而产生的IgG类抗体又能经胎盘结合胎儿红细胞，产生溶血，严重者可造成胎儿死亡。若胎儿存活出生，新生儿体内的IgG抗体将继续造成溶血，严重者可造成神经系统不可逆损害甚至死亡。[3]目前对HDN的可靠诊断手段是新生儿溶血三项试验（直抗试验、游离试验、放散试验）。直抗试验用于检测红细胞是否被IgG类抗体致敏，而游离试验和放散试验则检测IgG类抗体的存在。[4]直抗试验是免疫学方法的基础，DAT检测目前在临床应用最为广泛，对新生儿溶血、系统性红斑狼疮等免疫性疾病的诊断和鉴别诊断有着重要价值。

本研究利用抗人球蛋白血清与患儿红细胞发生凝集反应来检测患儿红细胞是否被抗体致敏，在HDN诊断中具有重要意义。DAT检测阳性提示患儿体内红细胞被抗体致敏，不同DAT阳性水平提示着不同程度的溶血，而DAT阳性水平与抗体类型、抗体效价水平及红细胞被致敏的程度有关。[5]目前，对新生儿DAT检测方法主要有微柱凝胶卡式法、玻璃珠微柱卡式法和传统试管法。两种卡式法的卡内介质分别为凝胶颗粒和细微玻璃珠，卡式法都具有操作条件简单、时间较短、室间差异变化小、灵敏度较高的优点。[6]

本文使用三种方法检测疑似HDN患儿血液中的DAT，在对242例临床标本的检测中发现，微柱凝胶卡式法阳性检出率为34.7%（84/242），玻璃珠微柱卡式法阳性检出率为64.5%（156/242），传统试管法阳性检出率为27.3%（66/242）。结果显示，玻璃珠微柱卡式法的阳性检出率高于微柱凝胶卡式法和传统试管法。三种方法两两比较，其差异均有统计学意义（P＜0.05）。表3显示，DAT阳性标本中，DAT凝集水平在1+～2+时，玻璃珠微柱卡式法检出率最高；DAT凝集水平在3+～4+时，细胞结合较紧密，两种卡式法差异无统计学意义（P＞0.05）；任意卡式法与试管法比较，其检出率均高于后者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。DAT阳性水平越高，不同检测方法的阳性检出率差异越小。因此，在对HDN的早期诊断方面，玻璃珠微柱卡式法比微柱凝胶卡式法和传统试管法具有更大的优势，值得推广。[7]

新生儿溶血的实验室诊断是一个比较新颖且复杂的热点问题，理想的诊断方法应该达到快速、简便、灵敏、特异性强的特点。为了作出早期准确的诊断，应尽量采用微柱卡式法，进一步提高对新生儿溶血的诊断，为临床诊断和及时治疗提供可靠的实验室依据。此外，本文仅研究了新生儿溶血三项试验之一的直抗试验，DAT阳性对HDN诊断极有帮助，但阴性也不能完全排除本病，临床上需同时结合游离试验和放散试验结果来共同分析。

［1］黎海澜，焦伟.ABO新生儿溶血病实验室检测方法及临床应用[J].检验医学与临床，2013（2）：200-201.

［2］叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程（第3版）[M].北京：人民卫生出版社，2010.

［3］夏琳.临床输血诊疗技术[M].北京:人民卫生出版社，2008.

［4］徐桂珍,费淑兰.118例高胆红素血症新生儿的溶血病抗体检测结果分析[J].中国社区医师，2010（33）：51-52.

［5］裘晓乐，戴佩佩.应用微柱凝胶技术筛查新生儿ABO溶血病及结果分析[J].临床血液学杂志，2010（8）：451-453.

［6］唐任光，黄庆.微柱凝胶卡式法和传统试管法检测新生儿溶血症3项结果的比较[J].中国输血杂志，2009（11）：913-914.

［7］唐聪海，原敏.两种微柱法直接抗人球测定结果比较[J].中国医学创新，2013（2）：110-111.