不同类型人乳头瘤病毒多重感染与宫颈病变的相关性研究

温路生，孟加榕，唐忠辉，黄仲庆，郭以河，潘羡心

(1.中国人民解放军第一七五医院/厦门大学附属东南医院病理科,福建漳州 363000；2.漳州卫生职业学院基础医学部,福建漳州 363000)



·论 著·

不同类型人乳头瘤病毒多重感染与宫颈病变的相关性研究

温路生1，孟加榕1，唐忠辉2△，黄仲庆2，郭以河1，潘羡心1

(1.中国人民解放军第一七五医院/厦门大学附属东南医院病理科,福建漳州 363000；2.漳州卫生职业学院基础医学部,福建漳州 363000)

目的 探讨不同类型人乳头瘤病毒(HPV)多重感染与宫颈病变的相关性。方法 应用基因芯片技术对200例宫颈病变患者石蜡组织标本进行24种HPV基因型进行检测，以组织病理学诊断作为宫颈病变确诊的金标准为依据。结果 200例标本中，HPV总感染率为51.50%(103/200)，其中慢性宫颈炎、鳞状上皮内低度病变(CIN1)、鳞状上皮内高度病变(CIN3)和宫颈鳞状细胞癌的HPV感染率分别为22/57(38.60%)、12/33(36.36%)、44/81(54.32%)、25/29(86.21%)，与宫颈病变密切相关(P<0.01)；不同宫颈病变中单一HPV感染率明显高于多重HPV感染率(P<0.05)；高危型单一感染组HPV感染率与宫颈病变不相关(P>0.05)，多重感染、高危型感染、高危型多重感染、低危型多重感染、高低混合型多重感染的各组HPV感染率在不同级别宫颈病变差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV感染率与宫颈病变的不同程度密切相关，持续高危型感染HPV和多重感染HPV是加重宫颈病变的重要因素。

人乳头瘤病毒； 多重感染； 宫颈病变

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，发病呈年轻化趋势。人乳头状瘤病毒(HPV)感染是宫颈上皮内瘤变(CIN)与宫颈癌的主要原因，一直是国内外学者研究焦点，HPV感染的基因型与感染持续时间与宫颈癌的发生、发展及预后密切相关，HPV多重感染是否增加和促进宫颈癌的发生，目前尚无统一意见。本研究采用基因芯片技术对手术切除宫颈石蜡组织进行HPV基因分型检测，同时对手术切除宫颈石蜡组织进行病理诊断，旨在了解漳州地区女性HPV感染在宫颈不同病变中分布，探讨HPV感染类型在宫颈癌及癌前病变发生、发展中的作用，为该地区宫颈癌防治提供依据。现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月至2014年9月解放军第一七五医院宫颈病变患者石蜡组织标本200例，其中慢性宫颈炎57例、鳞状上皮内低度病变(CIN1)33例、鳞状上皮内高度病变(CIN3)81例、宫颈鳞状细胞癌(简称宫颈鳞癌)29例，患者年龄18～73岁，平均年龄(43±9)岁。

1.2 仪器与试剂 DNA提取和检测人乳头瘤病毒分型试剂盒及等离子表面振谐技术(SPR)HPV基因分型检测仪购自金菩嘉公司。检测基因型包括16种高危型(HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，81)和8种低危型(HPV 6，11，40，42，43，44，54，70)。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取 用专用切片机厚8 μm连续切片(视组织大小)4～10张，灭菌镊子取下放入1.5 mL EP管中；加入200 μL石蜡裂解液，95 ℃裂解10 min；在石蜡凝固前以12 000 r/min离心2 min；穿过石蜡层加入10 μL蛋白酶K，混匀，56 ℃水浴过夜消化组织；第2天取出EP管95 ℃ 10 min灭活蛋白酶K；在石蜡凝固前以12 000 r/min离心3 min，分离石蜡层和DNA模板层；石蜡层下水层为DNA模板层用于PCR。

1.3.2 PCR扩增HPV DNA循环 每例样本取DNA 5 μL与95 μL试剂盒内的体系液加入200 μL的EP管中，混匀，PCR反应循环程序按说明书进行。预温：50 ℃，2 min；预变性：94 ℃，4 min；扩增(28循环)：变性94 ℃，30 s，退火48 ℃，45 s，延伸72 ℃，20 s；扩增(25循环)：变性94 ℃，30 s，退火65 ℃，45 s，延伸72 ℃，20 s；冷却：4 ℃。

1.3.3 检测 PCR反应产物加入60 μL杂交缓冲液和20 μL的阳性PCR产物，混匀，95 ℃杂交5 min，将EP换成软盖，按照仪器说明书步骤在SPR检测仪上对样本进行HPV基因分型检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS18.0软件对数据进行处理及统计学分析，计数资料采用百分率或例数表示，组间比较采用χ2检验。以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HPV基因型检测结果 200例宫颈病变患者检查结果显示HPV阳性103例，感染率为51.50%(103/200)。慢性宫颈炎、CIN1、CIN2和宫颈鳞癌的HPV感染率分别为22/57(38.60%)、12/33(36.36%)、44/81(54.32%)、25/29(86.21%)，与宫颈病变密切相关(χ2=21.070，P=0.000)。随着慢性宫颈炎→CIN→宫颈癌的宫颈癌变升级，HPV感染率呈明显的升高趋势，分别为22/57(38.60%)、56/114(49.12%)、25/29(86.21%)，差异有统计学意义(χ2=18.043，P=0.000)，表明随着癌变程度加重，其HPV感染率逐渐升高，其感染程度也明显加重。

2.2 HPV感染类型与宫颈病变的相关性 在不同宫颈病变中，单一感染组与多重感染组HPV感染率随着宫颈病变加重而增加，慢性宫颈炎、CIN1、CIN3、宫颈鳞癌的HPV感染率分别为33.33%(19/57)、24.24%(8/33)、39.51%(32/81)、37.93%(11/29)、5.26%(3/57)、12.12%(4/33)、14.81%(12/81)、48.28%(14/29)，差异有统计学意义(χ2=10.482，P=0.015)，其中单一感染组差异无统计学意义(χ2=2.581，P=0.461)，而多重感染组差异有统计学意义(χ2=27.103，P=0.000)。HPV感染率最高在宫颈鳞癌中高危型感染组为62.09%(18/29)，高危型单一感染组或低危型单一感染组或低危型感染组，与宫颈病变的严重程度呈不相关(χ2=2.423，P=0.489；χ2=3.120，P=0.346；χ2=3.196，P=0.330)，但高危型感染组与宫颈病变密切相关(χ2=10.230，P=0.017<0.05)，说明持续高危型HPV感染会增加宫颈癌前病变和宫颈癌的发生。多重感染组、高危多重感染组、低危多重感染组、高低混合型多重感染组与宫颈病变呈密切相关(χ2=27.103，P=0.000；χ2=10.750，P=0.00；χ2=5.205，P=0.046；χ2=9.162，P=0.011)，说明HPV多重感染在宫颈癌变过程中起促进作用，若患者出现持续感染，则危险性更大，更容易导致宫颈病变，增加宫颈癌的发生。见表1。

表1 HPV感染类型与宫颈病变类型的关系(n)

注：单一感染组与多重感染组比较，χ2=10.482，P=0.015；*为精确概率计算方法进行分析。

3 讨 论

HPV是一组无包膜的小DNA病毒，具有嗜上皮性、高度组织和宿主特异性，可致人类皮肤和黏膜异常增生，引起多种良、恶性病变。宫颈病变是女性最常见的疾病之一，最严重者为宫颈癌。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的较长而连续发展的过程，即慢性宫颈炎→CIN1→CIN3→宫颈癌。本研究发现宫颈病变患者总HPV感染率为51.50%，慢性宫颈炎、CIN1、CIN3和宫颈鳞癌患者的HPV感染率分别为38.60%、36.36%、54.32%、86.21%，与宫颈病变密切相关(P<0.01)。随着慢性宫颈炎→CIN→宫颈癌的宫颈癌变升级，HPV感染率呈升高趋势，分别为38.60%、49.12%、86.21%，差异有统计学意义(P<0.01)，表明随着癌变程度加重，其HPV感染率逐渐升高，其感染程度也明显加重，与国内外文献报道相似，进一步论证了HPV感染与宫颈病变高度相关[1-4]。

女性生殖道HPV感染存在基因型单一感染与多重感染，但由于不同HPV基因型之间基本不存在交叉保持性抗体，容易造成HPV多重感染。HPV多重感染是否促进宫颈癌的发生，目前存在争议，有学者认为多重感染可促进宫颈癌的发生，并加大治疗难度[5]。本研究中，在HPV基因型单一感染中，无论是高危型HPV基因型单一感染或低危型HPV基因型单一感染，与宫颈病变的严重程度无明显相关性，说明仅单一HPV基因型感染在宫颈癌变过程中不是起关键作用，即使是高危型HPV基因型感染。HPV多重感染占HPV感染患者32.04%，无论是高危型HPV多重感染或低危型HPV多重感染或高低危险混合型多重感染，与宫颈病变的严重程度明显相关，且随着病变级别增加而增加，提示HPV多重感染与宫颈癌变的发生密切相关，结果与文献[6-9]报道一致，但与张元等[10]报道相反。HPV感染率最高在宫颈鳞癌中的高危型感染，且高危型HPV感染随着病变级别增加而增加，说明持续高危型HPV感染在宫颈癌变过程中起关键作用，促进宫颈癌的发生，提示HPV多重感染患者出现持续高危型HPV感染与的危险性更大，更容易导致宫颈癌变。

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Relationship between different types of HPV multiple infection and cervical lesions*

WENLu-sheng1,MENGJia-rong1,TANGZhong-hui2△,HUANGZhong-qing2,GUOYi-he1,PANXian-xin1

(1.DepartmentofPathology,175thHospitalofPLA/AffiliatedSoutheastHospitalofXiamenUniversity,Zhangzhou,Fujian363000,China;2.FacultyofBasicMedicine,ZhangzhouHealthVocationalCollege,Zhangzhou,Fujian363000,China)

Objective To explore the relationship between different types of human papilomavirus(HPV) multiple infection and cervical lesions.Methods The gene chip technology was applied to detect 24 types of HPV genotypes in the paraffin tissue specimens from 200 patients with cervical lesions,the histopathological diagnosis was used as the gold standard of cervical lesion diagnosis.Results In 200 specimens,the total infection rate of HPV was 51.50%(103/200),in which the HPV infection rates in chronic cervictis,low-CIN1,high-CIN3 and squamous cell carcinoma were 22/57(38.60%),12/33(36.36%),44/81(54.32%) and 25/29(86.21%),respectively,and were correlated with the cervical lesions(P<0.01);In different cervical lesions,single HPV infection was significantly higher than multiple HPV infection(P<0.05);The HPV infection rate in the high-risk type single HPV infection group had no correlated with the cervical lesions(P>0.05).The HPV infection rates in the multiple infection,high-risk HPV infection,high-risk HPV multiple infection,low-risk HPV multiple infection,and high and low risk mixed HPV infection groups had statistically significant differences among different grades of cervical lesions(P<0.05).Conclusion The infection rate of HPV is correlated with the different degrees of cervical lesion.The persistent high-risk HPV infection and multiple HPV infection are the important factors for aggravating the cervical lesions.

human papilomavirus; multiple; cervical lesions

福建省漳州市自然科学基金资助项目(ZZ2012J21)；中国人民解放军第一七五医院(厦门大学附属东南医院)青年苗圃基金项目(12Y014)。

温路生，男，主治医师，本科，主要从事妇科疾病与肿瘤的预防及早期诊断方面的研究。△

，E-mail：tzh6409@126.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.15.007

A

1672-9455(2015)15-2156-02

2015-02-22

2015-05-18)