缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏转化生长因子-β1、骨形成蛋白7表达的影响①

何 琦，刘中柱

(佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003)



缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏转化生长因子-β1、骨形成蛋白7表达的影响①

何 琦，刘中柱

(佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003)

目的:通过输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化动物模型，并应用缬沙坦进行干预，研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、 骨形成蛋白7(BMP-7)在肾间质纤维化时的表达，探讨缬沙坦(血管紧张素II受体拮抗剂)在肾间质纤维化(RIF)的病理生理改变机制中发挥的作用。方法: 选取36只Wistar雄性大鼠，随机分三组(模型组、缬沙坦组，假手术组)，每组12只，并制备UUO模型(单侧输尿管结扎)，其中假手术组不结扎和剪断输尿管。每天一次对假手术组、模型组用0.9%Nacl等量灌胃。缬沙坦治疗组日一次以6mg/kg缬沙坦给药量灌胃。连续用药2w后，每组随机选取6只大鼠取血后处死取肾脏。将剩余大鼠继续给药至4w后同样方法取材及处死。用免疫组织化学方法检测肾组织中的TGF-β1、BMP-7表达情况；血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)用全自动生化仪检测。结果: 与假手术组相比，模型组和缬沙坦组在术后血肌酐及血尿素明显升高(P<0.05)。免疫组化法发现模型组TGF-βl表达增加，BMP-7表达减少，而缬沙坦组TGF-β1表达减少，BMP-7表达增加。结论：缬沙坦可能对肾间质纤维化起到拮抗作用，可能对临床用药提供实验理论依据。

单侧输尿管梗阻;缬沙坦; 转化生长因子-β1；骨形成蛋白-7

慢性肾病(chronickidneydisease,CKD)是指各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍。近年来，CKD已成为继心脑血管病、糖尿病、肿瘤之后的一个威胁人类健康的重要疾病。有调查显示， 慢性肾病的患病率和发病率每年都在呈现不断上升的趋势[1]。如何减慢或停止此病的进展、阻止终末期肾病的发生一直是肾脏病学领域的研究热点。肾间质纤维化(RIF)是许多病理生理等原因共同参与使得细胞外基质(ECM)在肾间质沉积过多引起。肾小管萎缩和肾间质纤维化是其基本的病理表现，是非常复杂的多种因素共同发生作用的结果。近几年研究发现TGF-β1是一种重要的肾前纤维化因子，在肾纤维化过程中起着中心作用;而骨形成蛋白7(Bbonemorphogeneticprotein7，BMP-7)是一种内源性抗肾纤维化因子，在阻止肾纤维化方面起重要作用[2]。本实验拟通过输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化动物模型，并应用缬沙坦进行干预，研究转化生长因子β1、骨形成蛋白7在肾间质纤维化时的表达，探讨缬沙坦在肾间质纤维化发生发展中起到的作用，希望能为临床应用提供实验数据及依据。

1 材料与方法

1.1 动物模型的选择与分组

购买雄性Wistar大鼠36只(体重190～210g)，随机分为假手术组、模型组、缬沙坦治疗组，每组12只。大鼠用3%戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉后，无菌条件下行左侧腹切口(1～2cm)逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，缬沙坦治疗组和模型组大鼠均分离左侧输尿管后结扎并剪断，逐层缝合组织到皮肤。假手术组不结扎和剪断输尿管，仅做分离。

1.2 给药方法

用0.9%Nacl每日一次等量给予假手术组和模型组大鼠灌胃。缬沙坦治疗组用缬沙坦(6mg/kg)每日灌胃一次。在给药持续两周后每组随机选取6只大鼠，取血后处死并取材。其它剩余大鼠继续用药至四周后同样按上述方法操作。

1.3 检测方法及主要观察指标

组织取材：用上述方法给药两周及四周后各组大鼠分别取内眦血，用生化分析仪测定血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)结果。在分别处死所有大鼠，均取出左侧肾脏，固定，包埋，切片，用免疫组化法检测其中TGF-β1、BMP-7的表达。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS17.0选用秩和检验法分析结果,P<0.05认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两周和四周时各实验组大鼠Scr和BUN结果比较

模型组与缬沙坦组大鼠术后2w、4w的Scr及BUN与假手术组比较，差异显着增高，差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比，缬沙坦组Scr及BUN术后2周和4周均较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1～2。

2.2 免疫组化结果

假手术组BMP-7表达相对较高，TGF-βl仅有少量表达。模型组TGF-βl表达增加，BMP-7表达减少，而缬沙坦组TGF-β1表达减少，BMP-7表达增加。见表3～4。

表1 术后不同时间各组大鼠Scr值比较

※与对照组比较,P<0.01,★与模型组比较,P<0.05。

表2 术后不同时间各组大鼠BUN值比较

*:与对照组比较,P<0.01,△:与模型组比较,P<0.05。

表3 TGF-βl在缬沙坦治疗组、模型组与假手术

与假手术组比较P<0.01，与模型组比较P<0.01。

表4 BMP-7在缬沙坦治疗组、模型组与假手术

′与假手术组比较P<0.01，″与模型组比较P<0.01。

3 讨论

慢性肾病的肾间质纤维化基本病理表现是肾小管萎缩和间质纤维化。由许多因素引起的ECM在肾间质内过度沉积，多种炎症细胞浸润肾间质,促进炎症细胞的浸润的细胞因子尚未完全明了[3]。TGF-β1是转化生长因子超家族中的成员，在创伤修复方面，免疫抑制以及各种原因所致的器官纤维化中都发挥重要作用[4]。BMP-7是转化生长因子超家族的成员，研究发现，在肾脏的发生发育上BMP-7更是发挥了至关重要的作用，促进肾脏发生发育以及维持其正常生理功能的重要因子[5]。有文献报道，BMP-7能抑制TGF-β1的生成，抑制促炎症因子基因和趋化因子的表达，说以增加BMP-7的含量能保护肾脏[6]。血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦，能对抗细胞外基质沉积，减慢肾脏纤维化进展。还可抑制TGF-B1的激活，来延缓肾纤维化的发生发展。本实验同时观察了转化生长因子-β1(TGF-β1)与骨形成蛋白7(BMP-7)在缬沙坦治疗组、模型组与假手术组中的表达情况和缬沙坦治疗组、模型组中血肌酐和尿素氮结果的对比，发现TGF-β1在缬沙坦治疗组的表达低于模型组，而BMP-7在缬沙坦治疗组的表达高于模型组。以上结果说明缬沙坦可能对肾间质纤维化起到拮抗作用，可能对临床用药提供实验理论依据。

[1]YangJ,DaiC,LiuY.HepatocytegrowthfaetorsuppressesrenalinterstitialmyofibroblastactivationandintereeptsSmadsignaltransduetion[J].AmJPathol，2003,163(2):621-632

[2]ReginaM.Day,ThielG,LumJ,etal.HepatoeytegrowthfaetorregulatesAngiotensinconvertingenzymeexpression[J].BiolChem，2004,279(10):8792-8801

[3]YamasakiN,NaganoT,Mori-KudoI,etal.HepatoeytegrowthfaetorproteetsfunetionalandhistologicaldisordersofHgCI(2)-indueedacuterenalfailuremice.Nephron，2002,90(2):195-205

[4]刘中柱，潘明阳，刘艳姝，等.厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化干预作用[J].黑龙江医药科学，2014，37(2)：50-51

[5]MakibayashiK,TatematsuM,HirataM,etal.AVitaminDana-Logamelioratesglomerularinjuryonratglomeralonephritis[J].AmJPathol, 2001, 58(5):1733-1741

[6]姚双,康晓明,李丽.雷帕霉素对大鼠慢性肾间质纤维化中HGF.TGF-β1的表达的影响[J].黑龙江医药科学，2013，36(3)：11-12

佳木斯大学研究生科技创新项目，编号:LM2014＿024；佳木斯大学科研课题，编号：L2012-055。

何琦(1986～)男，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生。

刘中柱(1964～)男，黑龙江嫩江人，学士，教授，硕士研究生导师。E-mail：liuzhongzhu75@163.com。

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